シモンズクエン酸寒天は、生化学的同定試験微生物、特にグラムとして使用される固体媒体である - 陰性桿菌。オリジナルのメディアは、1923年にコーザーによって作成されました。
コーザーのクエン酸塩培地は、リン酸ナトリウム、リン酸アンモニウム、リン酸一カリウム、硫酸マグネシウム、およびクエン酸ナトリウムを含むブロスで構成されていました。
A.脱水したシモンズクエン酸塩寒天培地B.調製したシモンズクエン酸塩寒天。出典：A. MScが撮影した写真。Marielsa Gil B. Roto2esdios、ウィキメディア・コモンズ
分かるように、培地中の唯一の炭素源はクエン酸塩であり、窒素はリン酸アンモニウムであり、これらの元素の源としてタンパク質と炭水化物を省略して、それらは一般的に他の培地に存在します。
したがって、この培地に接種された細菌は、クエン酸から炭素を吸収できる場合にのみ繁殖することができます。培地に濁りがある場合、試験は陽性でしたが、非特異的な濁りが発生する可能性があるという欠点がありました。
この問題は、シモンズがブロモサイモールブルーと寒天をコーザーの元の式に追加することで解決しました。原理は同じですが、解釈が異なります。
基礎
一部のバクテリアは、発酵や乳酸生産がなくても生き残る能力があり、他の基質を使用してエネルギーを得る必要があります。このテストでは、提供される唯一の炭素源はクエン酸塩です。
これらの条件下で生き残ることができる細菌は、トリカルボン酸サイクルまたはクエン酸発酵サイクルを使用して、従来のルートの代わりにクエン酸を急速に代謝します。
細菌によるクエン酸塩の異化には、補酵素Aの介入なしの酵素機構が関与します。この酵素は、シトリカーゼ（クエン酸オキサロ酢酸リアーゼ）またはクエン酸デスモラーゼの名前で知られています。反応は二価の陽イオンの存在を必要とし、その場合マグネシウムによって供給されます。
この反応により、オキサロ酢酸とピルビン酸が生成され、窒素源の使用によって形成されるアルカリ性pHの中間で有機酸が生成されます。これらの有機酸は、炭酸塩や重炭酸塩を生成する炭素源として使用され、環境をさらにアルカリ化します。
播種モード
シモンズクエン酸塩培地は、直線ループまたは針を使用してフィッシュテールに軽く接種し、35〜37℃で24時間インキュベートする必要があります。その後、結果が観察されます。
播種は寒天の表面にのみ行われます。穴をあけないでください。
解釈
培地が元の色（緑色）のままで、増殖が見られない場合、テストは陰性ですが、培地が青色に変わる場合、pHインジケーターによって検出されるアルカリ性製品の存在を示します。この場合、テストは陽性です。
クエン酸塩（+）および（-）。出典：修士号 マリエルサギル
これは、細菌がクエン酸塩の炭素を使用する場合、アンモニアを放出するリン酸アンモニウムの窒素を取り、培地をアルカリ化できるためです。
一方、培地で細菌の増殖が観察されたが、色の変化がない場合は、陽性であると見なす必要があります。増殖が認められた場合、細菌はクエン酸を炭素源として使用できたことを意味します。現時点ではpHに変化はありませんが、時間がかかる場合があります。
最終的な色の解釈に疑問がある場合は、接種していないクエン酸チューブと比較できます。
準備
1リットルの水に対して24.2 gの脱水培地の重さを量ります。混合して、約5分間静置します。頻繁に振とうしながら、1〜2分間加熱して培地を溶解します。
試験管に4 mlを注ぎ、121°Cで15分間オートクレーブします。オートクレーブを離れるとき、寒天がブロックまたは底がほとんどなくベベルのあるフルートのくちばしの形に固まるように、サポートの助けを借りて傾斜します。
クエン酸培地の最終pHは6.9（緑色）です。この培地はpHの変化に非常に敏感です。
pH 6以下では、培地は黄色になります。この色はバクテリアテストでは観察されません。
そして、pH 7.6以上では、培地は深いプルシアンブルーになります。
使用する
シモンズクエン酸寒天は、特定の微生物、特に腸内細菌科に属する桿菌および他の非グルコース発酵桿菌の同定に使用されます。
出典：Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
最終的な考え
シモンズクエン酸培地は非常にデリケートなテストです。特定のミスをすると誤検出が発生する可能性があります。
次の点に注意してください。
種菌
播種場所で残りの培地に影響を与えることなく銅色の黄色を発色させる可能性があるため、非常に濃厚な、または負荷のかかった細菌接種材料は作成しないでください。テストの陽性を意味するものではありません。
また、死にかけている細菌の細胞壁内で形成された有機化合物は、pHインジケーターを回転させるのに十分な炭素と窒素を放出できるため、厚い接種材料は偽陽性を引き起こす可能性があります。
したがって、理想的なのは、プラチナハンドルの代わりに針を使って播種し、余分な材料を摂取しないようにすることです。
播種
一方、問題の微生物を同定するための一連の生化学的試験を播種する場合は、クエン酸試験を最初に接種して、別の培地からのタンパク質または炭水化物のキャリーオーバーを回避することが重要です。
この状況では、誤って導入されたこれらの物質のいずれかが代謝され、pHが変化するため、偽陽性が発生する可能性があります。
物質のキャリーオーバーを回避するもう1つの方法は、ループを十分に燃やして、1つのテストと別のテストの間に新しい接種をすることです。
コロニーを触って接種を行うときも注意が必要です。これは、上記で説明したように、細菌が由来する培養液から寒天の一部を引きずることは避ける必要があるためです。
この意味で、Matsen、Sherris、およびBransonは、他の炭素源の移動を避けるために、クエン酸塩テストを接種する前に、接種物を生理的溶液で希釈することを推奨しています。
色の濃さ
テストが陽性であるときに生成される色の強度は、商業用住宅によって異なる場合があることを考慮する必要があります。
さらに、24時間で陽性となる微生物もありますが、pHの変化を引き起こすのに48時間以上かかる他の菌株もあります。
参考文献
- Mac Faddin J（2003）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的検査。第三版 社説パンアメリカーナ。ブエノスアイレス。アルゼンチン。
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- BD Laboratories。BBLシモンズクエン酸寒天スラント。2015.次で入手可能：bd.com
- ブリタニア研究所。シモンズクエン酸寒天。2015.次で入手可能：britanialab.com
- Valtek Diagnostic Laboratories。シモンズクエン酸寒天。2016. andinamedica.comで入手可能です。