コーンミール寒天培地は、特定の真菌の継代培養のためおよびカンジダ・アルビカンスの複合体の株で厚膜胞子を実証するための有用な固体培地、低栄養の消費電力、です。英語ではコーンミール寒天として知られています。
従来のコーンミール培地は非常にシンプルな構成で、コーンミール、寒天、水が含まれています。栄養レベルが低いため、適度な期間の菌株、特に黒菌の維持に使用するのに最適です。
A.トウモロコシ粉寒天上のカンジダアルビカンスコンプレックスのグラフィック表示。B.コーンミール寒天上に形成された顕微鏡下で見られるカンジダアルビカンスコンプレックスのクラミドスポア。出典：A. GrahamColm / B.作成者：CDC / Dr. ウィリアム・カプラン、提供：公衆衛生画像ライブラリ。
カンジダアルビカンス複合体の胞子形成は、寒天の調製中に1％のTween 80が添加される場合、この培地で好まれます。厚膜胞子の形成はこの種の特徴であり、実際に人間に影響を与える唯一のものです。
厚膜胞子を形成する他の種もありますが、ペンギンの糞に含まれるCandida australisや、めったに見られない腐生植物であるC. clauseniiなど、人に影響を与える可能性は低いです。同様に、例外的にC. stellatoidea種とC. tropicalis種がそれらを形成する可能性があります。
一方、ブドウ糖をコーンミール培地に添加すると、Trichophytom rubrum株での色素の形成が促進されます。
他の属とは異なり、Cryptococcus neoformansなどのコーンミール寒天に菌糸または偽菌糸を形成しない真菌があることを強調することが重要です。
コーンミール寒天は、実験室で自宅で作ることも、市販の培地を使用することもできます。
基礎
コーンミールが基質、寒天が固化剤、水が溶媒です。
コーンミール寒天には、tween 80（モノオレイン酸ソルビタンまたはポリソルベートポリエステル80）を追加できます。このコンパウンドは、その乳化力により、媒体の表面張力を低下させます。
また、誇張された細胞増殖を抑制し、菌糸の成長を刺激する敵対的な環境を作り出し、クラミドスポアの生産を促進します。後者は抵抗の構造を考慮した。この構造は、カンジダアルビカンス種の識別に役立ちます。
その一部として、この培地のグルコースは、いくつかの菌類の色素形成能力を高めます。
グルコースを含むコーンミール培地は、カンジダアルビカンス複合体の厚膜胞子の実証には有用ではないことに注意してください。
準備
自家製コーンミール寒天の準備
黄色のトウモロコシ粉47 gを量り取り、蒸留水500 mlに溶かします。約1時間準備を攪拌しながら60ºCに加熱します。次に、ガーゼと綿でろ過します。必要に応じて、Whatman No. 2のろ紙を通過させて再度ろ過することもできます。
蒸留水で容量を1000 mlにします。寒天17gを加え、溶けるまで加熱する。121ºCで15分間オートクレーブします。
滅菌ペトリ皿に盛り付けます。冷蔵庫で保管してください。
作製した培地の色は白っぽく、ゴツゴツした見た目です。
上記の準備にグルコースを含むトウモロコシ粉を準備する場合は、10 gのグルコースを追加します。
商業用トウモロコシ粉寒天
脱水した培地17 gを量り、1リットルの蒸留水に溶かします。混合物を加熱し、穏やかに振って完全に溶解させます。121ºC、15 lbのオートクレーブで15分間滅菌します。
滅菌ペトリ皿に注ぎます。固めましょう。使用するまで冷蔵庫で裏返し保存します。使用前に調質してください。
pHは25ºCで6.0±0.2です。
トウモロコシ粉寒天とトゥイーン80
ISO 18416に準拠するには、コーンミール寒天を次のように準備する必要があります。
リットルあたり65グラムの重さを量り、10 mlのTween 80を追加します。加熱しすぎないように注意しながら、溶けるまで数分間加熱します。121ºCで15分間滅菌する。
ブドウ糖を含むトウモロコシ粉寒天
Trichophyton rubrumコロニーの発色力を改善し、T。mentagrophytesと区別するために、0.2％グルコースを元の式に追加できます。ブドウ糖は厚膜胞子の形成を阻害するため、Tween 80を使用する必要はありません。
使用する
主に、トウモロコシ粉寒天の使用は、カンジダ株の研究を目的としており、アルビカンス種のクラミドスポアの特徴的な観察を通じてそれらを同定するのに役立ちます。すなわち、この寒天の使用は、これらの酵母を同定する補助的な方法として役立つ。
腐生種と病原種の両方がこの寒天上で発生しますが、それぞれが特徴的な菌糸構造を形成します。たとえば、トルロプシス属の種は菌糸体を生成せず、胚盤胞菌によってのみ繁殖します。
同様に、Trichosporon種とGeotrichum種はトウモロコシ粉寒天上に節分生子を生成し、一方と他方を区別するのが難しい場合があります。
ゲオトリクム属の節足動物は、ホッケースティックに似た菌糸の延長を作り出します。
また、ブドウ糖を補充したトウモロコシ粉寒天を使用した色素の生産は、Trichophytom rubrumの同定に役立ちます。
播種
臨床サンプル、化粧品、土壌などから初代培養培地-サブロー寒天培地で得られた疑わしいカンジダコロニーは、トウモロコシ粉寒天培地で継代培養されます。培地に播種し、22°Cで24〜48時間インキュベートします。必要に応じて、インキュベーション時間を長くすることができます。
クラミドスポアのデモ
この目的のために、トゥイーン80を含むトウモロコシ粉寒天は、ダルマウ技術を使用して接種する必要があります。この方法は、疑わしいコロニーの一部をプラチナハンドルで取り、中央に3つの平行な切り込みを入れ、ハンドルを45度に保ちます。カットは、互いに1 cmの距離で分離する必要があります。
続いて、以前に炎で覆われたカバーオブジェクトが、播種された縞の上に置かれます。その結果、半分は覆われ、もう一方は覆われなくなります。
播種したプレートを30°Cで48〜72時間インキュベートし、カバーガラスを通して顕微鏡で調べます。
菌株の維持
菌株を維持するために、播種および生育したプレートを冷蔵庫（4〜8ºC）で保管します。このように、それらは数週間続くことができ、教育または研究目的に使用できます。
QA
無菌制御のために、プレートは接種なしで室温でインキュベートされ、成長または色の変化がないことが予想されます。
品質管理のために、Staphylococcus aureus、ATCC 6538、Escherichia coli ATCC 25922、Aspergillus niger ATCC 16404、Candida albicans ATCC 1023、Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763などの既知の菌株を播種できます。
予想される結果は、黄色ブドウ球菌と大腸菌の部分的な阻害です。残りの株では満足のいく成長が期待されますが。
Aspergillus nigerは、およそ5日間のインキュベーションで、黒色および胞子形成コロニーとともに成長します。
クラミドスポア生産のカンジダアルビカンス酵母コロニー。
Saccharomyces cerevisiaeは大きな酵母細胞を生産します。
制限事項
コロニーと混同してはならない黄色い沈殿物がプレートの底に形成されます。
参考文献
- Neogen Laboratories。コーンミール寒天。で入手可能：foodsafety.neogen.com。
- カルチャーメディアマイクロキット。コーンミール寒天。Medioscultivo.comで入手できます。
- リナレスM、ソリスF.酵母同定ガイド。http：//www.guia.reviberoで入手できます。
- ウルシアF、ゲバラM. Rev.PerúMed.Exp。公衆衛生、2002; 19（4）：206-208。で利用可能：Scielo.com
- Casas-RincónG. General Mycology。1994年。ベネズエラ中央大学第2版、図書館版。ベネズエラカラカス。
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- カスティージョE.カンジダ属の分離と認識のためのいくつかの巨視的および微視的方法の比較研究。製薬化学のコロンビアの改訂。 1970; 3（1）：33-57。で利用可能：Ciencias.unal.edu.co