マロン酸ブロスは腸内細菌科のいくつかの属を区別するために使用される診断試験（マロン酸）、のために用いられる液体培地です。それは1933年にLeifsonによって作成され、その後、Ewingによって修正されました。Ewingは、元のフォーミュラに少量のブドウ糖と酵母エキスを加えました。
培地は現在、酵母エキス、硫酸アンモニウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、塩化ナトリウム、マロン酸ナトリウム、デキストロース、ブロモチモールブルーで構成されています。このテストは、一般的に腸内細菌科の生化学的識別バッテリーに含まれており、特定の属と種を区別するのに役立ちます。
マロン酸テストのグラフィック表現。A.陰性試験、B。（酸性化）陰性試験、C。（中程度のアルカリ化）陽性試験。ソース：カラーチューブpublicdomainpictures.net
マロン酸試験は主に、いくつかの微生物が唯一の炭素源としてマロン酸ナトリウムを使用し、窒素源として硫酸アンモニウムを使用する能力に基づいています。
マロン酸テストは、通常、Enterobacter、Klebsiella、およびCitrobacter属のいくつかの種で陽性です。一方、Escherichia、Salmonella、Shigella、Edwardsiella、Yersinia、Serratia、Morganella、Proteus、Providencia属のほとんどの種は否定的な反応を示します。
基礎
マロン酸試験は、マロン酸ナトリウムを唯一の炭素源として、硫酸アンモニウムを窒素源として使用できる細菌を示すことで構成されています。
マロン酸を使用しない腸内細菌科のほとんどは、ブドウ糖と酵母エキスを栄養素として、この培地で成長できます。
この場合、ペプトンを使用してアルカリ化しようとする試みは、ブドウ糖の発酵によって生成される酸の生成によって妨げられます。同様に、リン酸二カリウムおよびリン酸一カリウムは、pHを6.7に維持するバッファーとして機能します。
そのため、検査が陰性の場合、培養液は元の色（緑）のままです。まれに、ブドウ糖の発酵により培地が酸性になることがあります。ペプトンとpH指示薬を使用しないと、培地の色が黄色に変わります。これが発生するには、pHが6に低下する必要があります。
しかし、この試験が陽性である場合、微生物は他の成分を使用せずに、炭素源および窒素源としてそれぞれマロン酸および硫酸アンモニウムを使用したと言われています。
この場合、ナトリウムの放出とそれに続くNaOHの形成により、培地はアルカリ性になります。この意味で、pHインジケーター（ブロモチモールブルー）は、pHが7.6以上になると、培地の色を緑から青に変えます。青は明るい色または濃い色（プルシアンブルー）のいずれかです。
最後に、塩化ナトリウムは培地の浸透圧を維持し、水はすべての成分の希釈剤です。
解釈
同色培養液（緑）-陰性
黄色い培養液：陰性検査
淡いまたは深い青色のブロス：テスト陽性
フェニルアラニンマロン酸ブロスと呼ばれる変種があり、ショーアンドクラーク培地とも呼ばれます。この場合、炭素源としてマロン酸を使用することと、フェニルアラニンからピルビン酸を生成することの2つのテストを分析できます。
準備
マロン酸ブロス
選択した営利会社の挿入物によって指定されたグラム数が計量されます（それは1つずつ異なる場合があります）。秤量したグラムを1リットルの蒸留水に懸濁します。完全に溶解するまで少し加熱します。3 mlの培地をコットンキャップ付きの13/100試験管に分配します。
オートクレーブで121°Cで15〜20分間滅菌します。
使用前に冷やす。すぐに使用しない場合は、使用するまで冷蔵庫で保管してください。接種前にブロスを室温にします。
培地のpHは6.7±0.2です。用意した培地の色はボトルグリーン。
フェニルアラニンマロン酸ブロス
脱水した培地11gを量り取り、1リットルの蒸留水に溶かします。残りの準備は前に説明したものと同じです。
また、滅菌前にマロン酸ブロス培地に2 g / Lのフェニルアラニンを添加して調製することもできます。
使用する
それは、腸内細菌科の細菌の同定のために組み立てられた一連の生化学的試験の一部として使用されます。
以下を区別するのに役立ちます：
-Escherichia属およびSerratia属のKlebsiella属およびEnterobacter（+）（-）。
-Salmonella enterica ssp enterica（-）種のSalmonella enterica ssp arizonae、Salmonella enterica ssp salameおよびSalmonella enterica ssp diarizonae（+）の種。
-Klebsiella属から一般的に（+）Actinobacillus属から（-）。
-時々、非発酵グラム陰性桿菌であるAlcaligenes faecalis（+）やAcinetobacter sp（-）など、腸内細菌科に属さない属および種の細菌の識別に役立ちます。
出典：Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
処理する
ライターの下で、適切に滅菌および冷却されたプラチナハンドルを使用して、純粋なコロンの一部を取り出します。採取したサンプル（軽い接種材料）をマロン酸ブロスに溶解します。好気性環境で蓋を緩めて35°C±0.2で24〜48時間インキュベートします。
マロン酸ブロスはまた、トリプチカーゼ大豆ブロスでの18〜24時間の培養から接種することができます。この場合、滅菌ピペットで0.01 mlを取り、マロン酸ブロスに接種します。好気性環境で蓋を緩めて35°C±0.2で24〜48時間インキュベートします。
時間の終わりに、結果が解釈されます。48時間のインキュベーション後の青色の痕跡は陽性と見なされます。48時間のインキュベーション時間が経過するまで、テストは陰性と解釈されるべきではありません。
フェニルアラニンマロン酸ブロスバリアントを使用する場合、マロン酸が最初に解釈され、次に5滴の1N HClと3〜5滴の8％塩化第二鉄が追加されます。濃い緑色は、フェニルアラニンの陽性検査と解釈されます。一方、培地が淡い青色に変わった場合、テストはフェニルアラニンに対して陰性です。
QA
培地の無菌制御を行うには、1つまたは2つのブロスを35°C±0.2で24時間インキュベートする必要があります。その後は曇りや色の変化はありません。
品質管理には、Enterobacter aerogenes ATCC 13048、Klebsiella pneumoniae ATCC 33945、Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314、Escherichia coli ATCC 25922などの既知の株または認定株を使用できます。
期待される結果は次のとおりです。
- Enterobacter aerogenes、Klebsiella pneumoniaeおよびSalmonella enterica ssp arizonaeは陽性反応を示します（中程度の青色）。
- Escherichia coliの場合、結果は陰性であるはずです。つまり、色の変化がない（緑色）か、グルコース発酵により黄色に変わることが予想されます。
制限事項
濁り、沈殿物、変色、または劣化の兆候を示すブロスは使用しないでください。
参考文献
- ペドラザJ、サナンドレスN、バレラZ、アギレE、カマチョJ.サルモネラ属の微生物分離。そしてその検出のための分子ツール。Uninorte Health。バランキージャ（Col.）2014; 30（1）：73-94。利用可能：scielo.org.co
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- Mbiolog Diagnostics。マロナートブロス。利用可能：mbiolog.com
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Conda Pronadisa Laboratories。フェニルアラニンマロン酸ブロス。利用可能：condalab.com