セイヤーマーチン寒天：基礎、準備および使用 - 生物学 - 2025

セイヤーマーティン寒天が髄膜炎菌および淋菌の単離のための非常に栄養価および固体選択培地です。病原性または臨床的に重要なナイセリアとして知られています。

セイヤーマーティンアガーの最も重要な特徴の1つは、栄養補助食品の含有量が高いことです。ナイセリアは栄養の観点から非常に要求の厳しい微生物であり、したがって一般的な培地では増殖しないため、この特性は不可欠です。

Thayer Martin / Agar Thayer Martinビジネス媒体。ソース画像1：著者MScが撮影。マリエルサ・ギル、画像2. Pixinio.comバクテリアコロニー形成、改変、セイヤー、マーティン、寒天。

一方、これらの微生物は通常、無菌でない地域で見られるため、ナイセリア属の発達に影響を与えることなく、付随する植物相の成長を防ぐために阻害剤の添加が必要です。

この寒天は、GCベースの寒天、ヘモグロビン、追加の栄養補助食品、および阻害物質（抗生物質と抗真菌剤）の複合体で構成されています。商業施設では、各サプリメントを個別に販売しています。

この培地に播種するサンプルは、探している微生物によって異なります。Neisseria gonorrhoeaeにとって理想的な検体は、膣分泌物と尿道分泌物です。髄膜炎菌の場合、最も使用されるサンプルはCSF、咽頭および鼻咽頭の浸出液です。

基礎

ナイセリアは、迷惑なものとして分類される微生物であり、したがって、それらの分離は困難です。したがって、ThayerMartínは複雑な媒体であり、その各コンポーネントは以下で説明する機能を実行します。

GCベース寒天

GC寒天には、プロテオースペプトン、コーンスターチ、塩化ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、寒天が含まれています。その成分は、微生物の発達のための基本的な栄養素を提供し、有毒な脂肪酸を中和し、浸透圧のバランスを維持し、pHを定義し、培地に固体の一貫性を提供します。

ヘモグロビン

ヘモグロビンは、第V因子および第X因子を提供します（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドNADおよびヘミンをそれぞれ）。このため、ヘモフィルス種もこの培地で成長します。ヘモグロビンは脱水された形で商業的に入手することができ、または新鮮な脱フィブリン化されたウシの血液を培地に加えることができる。

濃縮サプリ

一方、ベース寒天に含まれる栄養素はナイセリア属の要件に十分ではないため、濃縮サプリメントもセイヤーマーチン培地に追加する必要があります。

最も一般的に使用される強化サプリメントはisovitalexと呼ばれます。グルタミン、アデニン、NAD、コカルボキシラーゼ、グアニン、硝酸第二鉄、p-アミノ安息香酸、ビタミンB12、チアミン、グルコースが含まれています。これらすべての化合物は、病原性ナイセリアの適切な発達に必要です。

阻害剤

これは非常に栄養価の高い培地であるため、その地域の通常のフローラからの微生物の成長を防ぎ、ナイセリア属の分離を促進する阻害剤を使用する必要があります。

阻害剤複合体は、バンコマイシン、コリスチン、ナイスタチンで構成されています。バンコマイシンはグラム陽性菌の増殖を阻害し、コリスチンはシュードモナスや一部の腐生性ナイセリアなどのグラム陰性菌の増殖を防ぎ、ナイスタチンはカンジダアルビカンスなどの酵母に作用します。

ただし、セイヤーマーティンアガーは後に修正されました。変化は、トリメトプリムの添加、寒天の量の増加、および余分なグルコースの添加で構成されていました。これらの変更により、Neisseria gonorrhoeae種の回復が大幅に改善されました。

トリメトプリムはプロテウス属の成長とその結果として生じる群れの形成を阻害することに注意すべきです。この意味で、セイヤーマーティン培地に選択的な特性を提供するのは抗生物質です。

準備

オリジナルセイヤーマーティン寒天培地

-GC寒天

脱水GC培地8.2 gを量り取り、100 mlに懸濁します。よくかき混ぜながら1分間混合して沸騰させ、完全に溶解させます。121°Cで15分間オートクレーブで混合物を滅菌します。

-2％ヘモグロビン

均一な混合物が形成されるまで、2 gの脱水ヘモグロビンを2または3 mlの熱蒸留水に懸濁します。少しずつ水を少しずつ加えて、容量を100 mlにします。懸濁液は滅菌前に均一でなければなりません。

オートクレーブで15分間滅菌します。

-濃縮サプリメント

同じ商業会社から提供された希釈剤で商業バイアルを再構成します。よく混ぜます。使用する希釈剤の量はキットの説明書に明記されています。

-VCN阻害サプリメント（バンコマイシン、コリスチン、ナイスタチン）

商業会社から提供された希釈液でバイアルを再構成します。よく混ぜます。使用する希釈剤の量はキットの説明書に明記されています。

-準備済み

GC寒天100 mlごとに、次の手順を実行します。

GC寒天がオートクレーブを離れたら、約50°Cの温度に冷却し、2 mlの準備されたヘモグロビン溶液、2 mlの濃縮サプリメント（イソビタレックスまたはブリタレックス）、および2 mlの阻害サプリメントを追加します。混ぜて滅菌ペトリ皿に入れます。

固化させ、使用するまで冷蔵庫に保管します。

用意した培地の色はチェリーレッドです。培地の最終pHは7.2±0.2

改変セイヤーマーティン寒天

脱水GC培地8.2 gを量り取り、100 mlに懸濁します。寒天1 gを加え、グルコース0.3 gを加える。よくかき混ぜながら1分間混合して沸騰させ、完全に溶解させます。121°Cで15分間オートクレーブで混合物を滅菌します。

前述のようにヘモグロビンと濃縮サプリメントを準備します。

使用される抑制サプリメントはVCNT（バンコマイシン、コリスチン、ナイスタチン、トリメトプリム）です。

-準備済み

元のThayer Martin寒天についての説明に従って進めます。

使用する

Thayer Martin Agarは、標本に縞を付ける前に温めておきます。一般的に使用されるサンプルは、咽頭スワブ、鼻腔スワブ、膣、尿道、および/または直腸分泌物、ならびにCSFです。

新鮮なサンプルを使用し、寒天上に強力な接種材料を作ります。サンプルは、材料の排出によって直接シードされ、その後、消耗が表面にストリークされます。

プレートは、微好気性ジャー（5％CO ₂）内で35〜37°Cで24〜48時間インキュベートされます。インキュベーション時間の終わりに、プレートは小さく、灰色で、時にはムコイドのように見えるコロニーが検査されます。

疑わしいコロニーに対してグラムおよび確認生化学試験を実施します。

QA

Thayer Martin Agarの品質管理には、以下の微生物株を使用できます。

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226およびNeisseria meningitidis ATCC 13090; 両方の株で満足のいく開発が期待されています。

次の菌株も含める必要があります：Staphylococcus epidermidis ATCC 14990、Escherichia coli ATCC 25922、Proteus mirabilis ATCC 43071、およびCandida albicans ATCC10231。これらすべてにおいて、この培地では全体的または部分的な阻害が予想されます。

制限事項

-使用する阻害剤に耐性のある細菌が培地で増殖する可能性があることを心に留めておく必要があります。

-使用するバンコマイシンの濃度に敏感な淋菌の株があります。このため、イソビタレックスを添加したチョコレート阻害剤を使用することをお勧めしますが、阻害剤は使用しません。

-この培地で増殖し、病原性ナイセリア、特に淋菌の分離を妨害するナイスタチン耐性酵母菌株があります。

参考文献

1. Valtek Diagnostic Laboratories。セイヤーマーティン寒天.2016。で利用可能：com
2. ブリタニア研究所。セイヤーマーティンミディアムモディファイド。2010.利用可能：britanialab.com
3. ウィキペディアの貢献者。セイヤー・マーチン寒天。ウィキペディア、フリー百科事典。2017年10月26日、16：33 UTC。利用可能：wikipedia.org 4。2019年2月28日アクセス。
4. ブリタニア研究所。GC寒天。2010.利用可能：britanialab.com。
5. Laboratories BBL™べとつく微生物のための培地濃縮。1999.利用可能：bd.com
6. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。