ローズベンガルは、ブルセラ症の診断のための抗原抗体反応に基づく臨床検査です。この技術により、ヒト血清サンプル中のブルセラ・アルバスタス菌に対する特異的抗体の検出が可能になります。結果は定性的または半定量的に報告できます。
定性的な形式は、患者が検査に対して陽性か陰性か、つまり抗体があるかどうかを表します。一方、半定量レポートはIU / mlで報告され、存在する抗体のおおよその量を示します。患者が微生物と接触した場合にのみ抗体が産生されることに注意すべきです。
凝集プレートでのローズベンガル反応。出典：ビデオhttps://youtu.be/igAVQ-GiyGYから取得
非常に単純で、感度が高く、特異性があるため、この疾患の診断の最初の検査として医学で最も使用されている血清凝集技術の1つです。
一部の研究者は、ローズベンガルテストの有効性を他の手法（血清凝集反応（熱性抗原）など）と比較しており、良好な相関関係はあるものの、熱性抗原テストが陰性であり、Rose de正のフレア。
得られた違いは、これらの患者がブルセラ・アバスタスに対するIgG抗体のサブクラスを有し、酸性pHでより優れた結合能力を有していたため、ローズベンガル試薬とは反応しましたが、発熱性抗原とは反応しませんでした。
この意味で、彼らは、熱性抗原技術の試薬を酸性のpHに改変して、この種の症例を検出できるようにすることを示唆している。
基礎
Rose Bengal Reagentは、抗原性懸濁液で構成されています。これは、酸性乳酸緩衝液（pH 3.6）で希釈されたBrucella abortusのS99株と、フェノールおよびローズベンガル色素で構成されています。
したがって、サンプルで求められるのは抗ブルセラ抗体です。これらが存在すると、試薬抗原と反応し、肉眼で見える凝集反応が観察されます。このテストでは、IgM抗体またはIgG抗体を検出します。
これは、IgM抗体が優勢な急性期とIgG抗体が優勢な慢性期の両方で疾患を検出できることを意味します。
これは、テストの感度を向上させるので有利ですが、IgM抗体とIgG抗体の反応は同一であるため、ステージを区別しないため不利です。
試験は常に陰性対照および陽性対照と一緒に実施する必要があります。陰性対照には抗体を含まない動物血清が含まれ、陽性対照には50 IU / mlの抗ブルセラ抗体を含む動物由来の血清が含まれます。
使用する
ブルセラ症は慢性的で危険な傾向がある深刻な疾患であるため、早期診断が非常に重要です。人獣共通感染症であり、人間は汚染された物質と直接接触することで感染する可能性があり、最も脆弱な人々は獣医師と動物の世話人です。
感染症は、感染症の中でも、感染した生肉を食べることによっても発生します。
この病気は局所的または全身的に攻撃します。全身の形態が最も深刻です。細網内皮系（肝臓、脾臓、骨髄）、皮膚（蜂巣炎およびリンパ節症）、呼吸器系（肺炎）、筋骨格系（関節炎、仙腸炎および脊椎炎など）。
ローズベンガルテストは、非常に安価で使いやすく、特異性と感度が非常に高いため、最初のスクリーニングを行うのに非常に便利な手法です。
偽陰性と偽陽性のケースは非常にまれであり、それぞれ非常に低い抗体価（<25 IU / ml）または極端に高い（> 1000 IU / ml）人々に発生する可能性があります。
処理する
材料
-ローズベンガルキット
-凝集プレート白背景
-50 µlピペット
-ローテーター（オプション）
-渦
テクニック（定性的方法）
市販のローズベンガルキットには、すぐに使用できる試薬が付属しています。
-作業を始める前に試薬を温めてください。
-凝集プレートには円が描かれており、それぞれが異なるサンプルに対応しています。3つの円を使用します。1つ目は陰性対照、2つ目はサンプル、3つ目は陽性対照です。
-1滴または50 µlのコントロールとサンプルを対応する円に配置します。
-ローズベンガル試薬をボルテックスを使用して混合します。以前に配置したものの隣にドロップを配置します。
-木製のつまようじと混ぜます（各標本またはコントロールに1つずつ使用します）。円全体を覆うように、円を描くように動かして広げます。
出典：ビデオから撮影した画像：https://youtu.be/igAVQ-GiyGY 編集された画像レイアウト。
-プレートを80〜100 RPMで自動回転装置に置くか、手動で4分間回転させます。この時間の終わりに証明を読んでください。
-コントロールが期待どおりに機能することを確認します。試験サンプルの反応をコントロールと比較します。凝集が観察された場合は陽性、凝集がない場合は陰性として報告します。
陽性の検査は、患者の抗ブルセラ抗体が25 IU / ml以上であることを示します。
陽性（凝集あり）および陰性（凝集なし）反応の解釈。出典：シトルリン。編集された画像。
テクニック（半定量的）
定性反応でサンプルが強く陽性である場合、それは半定量化できます。このため、サンプルの連続的な2倍希釈は生理食塩水で行われます。前述の手順は、希釈ごとに実行されます。
また、凝集を肉眼で観察することで解釈されます。結果は、陽性結果が観察された最高希釈の力価になります。
抗ブルセラ抗体の概算値を計算するには、次の式を使用します。
25 IU / ml x反応力価= IU / ml
例、半定量テストの患者が½、¼、および1/8希釈で陽性を示し、1/16希釈以降で陰性になり始めた場合、これは患者の力価が8であることを意味します。 。
式を適用する：
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-キットには有効期限があり、尊重する必要があります。試薬の有効期限が切れている場合は使用しないでください。
-使用中は、劣化の兆候があるため、試薬に固形粒子が含まれていないことを確認してください。
-2〜8°Cに保つ
-凍結しないでください。この行為は試薬に回復不能な損傷を与えます。
-常に陰性および陽性対照と一緒にテストを実行します。
-この手法は、ある程度の脂肪血症および溶血を伴う血清サンプルを許容しますが、過度の脂肪血症および溶血した血清を使用することはお勧めしません。どちらの条件でもテスト結果が変わるためです。
-分析を開始する前に、試薬を常に室温に戻してください。
-試薬が沈殿して陽性反応をシミュレートするため、一定時間後に偽陽性のレポートが生成されるため、推奨時間よりも長くかかる反応を解釈しないでください。
-この手法は100％感度が高く、特異度は98％です。
-1000 IU / mlの半定量後、プロゾーン効果（抗原の量と比較して過剰な抗体による偽陰性）が観察される可能性があります。
参考文献
- Rubio M、Barrio BおよびDíazR.血清凝集が陰性であるヒトブルセラ症の症例を診断するためのローザデベンガラ、クームスおよび対免疫電気泳動検査の価値。微生物学科。臨床微生物学サービス。大学クリニック。ナバラ大学。406-407。入手可能場所：elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
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