ビウレット：理論的根拠、試薬、手順、用途 - 生物学 - 2025

ビウレットは、タンパク質決意長鎖および短鎖のために使用される試薬です。特に分析化学および尿検査の分野で使用され、血清、血漿、尿中の総タンパク質の濃度を調査します。

特定の病状ではタンパク質値が増加または減少する可能性があります。低タンパク血症の症状は通常、腎臓病の患者、栄養失調の患者、慢性感染症の患者に発生します。

ビウレット反応で形成された複合体の化学構造ポジティブビウレットテスト。ソース：Yikrazuul / flickr

高タンパク血症は、多発性骨髄腫、全身性エリテマトーデス、細菌性心内膜炎、細菌性髄膜炎、ウォルデンストレームマクログロブリン血症などの病状で観察されます。

一方、尿中のタンパク質の存在は、腎臓によるアルブミンの濾過によるものです。これは研究されなければならない病理学的行動です。

この意味で、ビウレットは、他の多くのサンプルの中でも、血清、血漿、尿中のタンパク質の存在を定量化できるため、非常に有用です。

ビウレットでさえ、十分に調査されていないサンプルや未知の組成のサンプルにおけるタンパク質の存在と濃度を調査するために使用できます。そのため、研究分野で広く使用されています。

ビウレットテストは、ペプチド結合の検出に基づいています。テストはアルカリ性媒体で行われます。紫紫色の複合体を形成するには、サンプルに少なくとも2つのペプチド結合が含まれている必要があります。錯体は、結合と銅イオンの結合によって形成されます。

基礎

ビウレットの試薬は、水酸化カリウム、硫酸第二銅、酒石酸ナトリウムおよび酒石酸カリウムで構成されています。水酸化ナトリウムは、反応を行うために不可欠な条件であるため、培地をアルカリ化するために使用されます。

タンパク質と反応する物質は硫酸第二銅ですが、酒石酸ナトリウムは水酸化銅を生成させない機能を持っています。水酸化銅は沈殿しやすく、反応を妨げます。

ペプチド結合を持つ物質（ポリペプチドまたはタンパク質）がサンプルに見つかった場合、テストは陽性になります。

溶液が紫色に変わると、反応は陽性と解釈されます。色は、CO-NH基と第二銅カチオンを持つ少なくとも2つのペプチド結合間の複合体の形成によって生成されます。

紫色の錯体は、2つの方法で形成できます。1つは金属に結合するアミド基からプロトンが失われること（脱プロトン化）、もう1つは遊離して結合する酸素と窒素の電子の結合によるものです。銅で。

この反応は、タンパク質の種類によって強度と色が異なります。

テストは、定性的または定量的に実行できます。定性的な形式では、正または負として報告されます。定量的な形で濃度は分光光度法で測定できます。

反応は540〜560 nmの間で読み取られます。色の強度は、サンプル中のペプチド結合の濃度に正比例します。

試薬

-20％水酸化ナトリウム（NaOH）

-硫酸_第二銅五水和物1％（CuSO _4. 5H ₂ O）

-酒石酸ナトリウムと酒石酸カリウムの混合四水和物（KNaC ₄ H ₄ O ₆・4H ₂ O）

ビウレット試薬の安定性

-冷蔵保存する必要があります。

処理する

技術

-分析するサンプルまたは標準液100 µlを試験管に入れる。

-水酸化ナトリウム2 mlを追加します。

-よく混ぜる。

-ビウレット試薬5 mlを追加します。

-混合し、室温で25分間静置し、覆い、光から保護します。

-色の形成の有無を観察し、分光光度計で測定します。

検量線

ウシ血清アルブミンを標準として使用して、検量線を作成できます。そこから様々な濃度が用意されています。たとえば、25、50、75、100、125、150％などです。

反応はこれらすべての既知の濃度で設定され、吸光度は540 nmの波長で読み取られます。既知の濃度と吸光度の読み取り値のデータを使用して、検量線が作成されます。

各測定または処理済みサンプルのバッチごとに、標準液をマウントすることをお勧めします。ウシ血清アルブミン0.1-2 mg / mlを校正標準として使用できます。

測定は、分光光度計で540 nmで行われます。

直線性は、12 g / dlの濃度まで満たされます。

干渉

ビウレット試験を妨害する物質

それほど頻繁ではありませんが、このテストの実行中に一部の物質が干渉する可能性があることに注意してください。例えば、アンモニアの存在は色の形成を阻害する可能性があります。

同様に、特定の色素など、他の物質も同じ波長で吸収する可能性があります。

一方、ペプチド結合以外の物質が第二銅塩と錯体を形成すると干渉が発生します。例：いくつかの炭水化物と特定の脂質。

分析するサンプルに何らかの沈殿物が含まれる場合は、テストを行う前にろ過または遠心分離する必要があります。

ビウレット試験を妨害しない物質

テストは、以下の存在の影響を受けません。

-20 mg / dlの濃度までのビリルビン。

-750 mg / dlの濃度までのヘモグロビン。

-30 g / Lの濃度までのデキストラン。

-4000 mg / dlの濃度までのトリグリセリド。

利点

-それは実行する簡単な方法です。

-それは経済テストです。

-タンパク質に対する特異性が高い。

-小さな干渉。

短所

少量のタンパク質を検出するには感度が低い。Fuentes et al。によって実施された研究では、ビウレットの試験方法には1 mg / mlのタンパク質の検出限界と3 mg / mlの定量限界があることが確認されています。

しかし、アマゾニア大学で行われた他の研究では、はるかに低い値が報告されています。研究によって報告された検出限界は0.020 mg / mlであり、定量限界は1.33 mg / mlです。

用途

ビウレット試薬またはテストは、日常および研究室で臨床および非臨床サンプル中のタンパク質を測定するために使用されます。

の増加または減少で発生する病理

多くの病状では、臨床サンプル中の総タンパク質の濃度を決定することが重要です。

彼らはで上昇しています：

-多発性骨髄腫、

-全身性エリテマトーデス、

-細菌性心内膜炎、

-細菌性髄膜炎、

とりわけ、Waldenstromのマクログロブリン血症。

それは減少します：

-腎不全、

-重度の栄養失調の人、

-とりわけ慢性感染症の患者。

臨床サンプル

最も一般的な臨床サンプルは、血清、血漿、尿です。血清または血漿中のタンパク質の正常値は、6.0〜8.8 gr / dlです。

成人の尿中のタンパク質濃度は、150 mg / 24時間の数値を超えません。

尿タンパク質/尿クレアチニン比正常値

乳児：<0.50 mg

2歳以上の子供：インデックス：0.20 mg

成人：<0.2 mg

非臨床サンプル

ビウレット反応は、乳製品、抗毒素、またはタンパク質の存在を調査したい未知の物質など、多くのタイプの非臨床サンプルに使用できます。

参考文献

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