orceínaは主としてorchilla又はarchill、fruticose苔癬Rocella tinctoriaとLecanoraのparellaなどの様々な地衣類から抽出された、紫色の天然着色されています。Rocellaチンクトリアはアフリカとアメリカの大陸にありますが、ヨーロッパにある他の種に置き換えることもできます。
この染色は古代から細胞遺伝学研究で広く使用されてきました。この意味で、酢酸を含むオルセイン製剤は1941年にラコートによって導入されたので、当初はラコート技術と呼ばれていました。
オルセインとオルセイン溶液の化学構造。出典：Wikipedia.org/ de.wikipediaのOguenther（Dr. Guenther）
同様に、そのシンプルさと低コストのため、リトマス（地衣類から抽出された色素）の製造や、組織学的研究（細胞や組織の染色）にも使用されています。
さまざまな研究で、この染色を他の化学物質（アンモニアピクロカーミネートや酢酸など）と組み合わせて使用して、それぞれ弾性線維と染色体を染色しています。現在、オルセインは動植物の細胞遺伝学的研究で引き続き使用されています。
最近、シルバ等。2017年は、この染色を使用して、チリの高齢者の親指の皮膚の弾性繊維で発生するさまざまな変化を観察することに成功しました。この研究は、親指の繊維が加齢とともにどのように変化するかを明らかにしました。
この意味で、弾性繊維は80歳以上の個体では茶色がかった黒色であることが観察されました。最年少（60歳から）である間、彼らは赤褐色であると見られています。細胞質と他の細胞構造は黄緑色に変わります。
これにより、弾性繊維の配置、量、完全性の観点から、弾性繊維の存在と状態を確認することができました。一方、オルセインは、動脈瘤の特定や動脈炎の診断など、さまざまな条件で非常に役立つことも示されています。
基礎
オルセインは色素のオキサジングループの一部であり、染色はDNAに対する親和性に基づいています。染料は、リン酸基で代表されるこの分子の負電荷に結合します。そのため、染色体は紫色に染まっています。
ただし、残りのセルの構造は別の色になります。具体的には、弾性繊維の場合、赤褐色、細胞核は青から濃い紫に着色されますが、コラーゲンは染色されません。
このため、いくつかの種のハエでは、クロマチンを染色し、性別を区別するためにオルセインが使用されています。同様に、核とB型肝炎抗原によって生成された一部の肝封入物も染色できます。
オルセイン溶液は染色において特定の機能を持っています。オルセインAは、細胞膜を軟化させ、それらの死を引き起こし、それらの分裂の過程を麻痺させる機能を持っています。一方、オルセインBは、染色体への付着による染色の完了を担っています。
準備
アセトオルセイン溶液1％
アセトオルセインの1％溶液を調製するには、2 gのオルセインを45 mlの氷酢酸に溶解し、好ましくは高温にして、55 mlの蒸留水を室温で加えます。
その後、絶えず混合して溶液を均質化し、後で冷めるまで静置します。最後に、4℃で暗い瓶に保管されます。この準備は、牛の卵母細胞の成熟段階を観察するために、フローレス2012によって使用されました。
この場合、例えば、アセトオルセイン溶液を、前もって酢酸-エタノールで24時間固定した組織上に置く。この染色プロセスは30分間行われ、組織はその後変色します。
同様に、多細胞組織のオルガネラの同定にも使用できます。この場合、口腔粘膜の塗沫標本がアセト-オルセイン溶液の滴で染色され、カバーガラスがスライド上に置かれ、その下部構造を持つ細胞の核が即座に観察できます。
ラクトプロポニック溶液orcein 1％
さらに、オルセインは、乳酸やプロピオン酸などの他の化学物質で調製することができます。これを行うには、1 gのオルセインを、室温で23 mlの乳酸と23 mlのプロピオン酸の予備混合溶液に溶解します。100mlまでの蒸留水で容量を作ります。
このラクトプロピオン性オルセイン溶液を使用すると、植物細胞の減数分裂のさまざまな段階を観察することができます。この場合、あらかじめ固定して加水分解したサンプルをラクトプロピオンオルセイン溶液に15分間入れ、組織を顕微鏡のスライドに広げます。
Duqueの2016年のポリジェニック染色体に関する研究では、酢酸と85％乳酸で希釈した2グラムのオルセインを65％酢酸溶液で希釈した製剤を使用しました。最後に、キイロショウジョウバエの唾液腺の染色体を調べました。
オルセインAおよびオルセインB
サンプルと評価対象に応じて、適切なオルセイン溶液が調製されることに注意することが重要です。したがって、例えば、1N塩酸をオルセインA溶液に添加して、分裂している細胞を観察する。
一方、オルセインB溶液は45％酢酸に溶解されます。この手法は簡略化された染色法であり、一般的に染色体構造の染色の補助として使用されます。
最終的な考え
何世紀も前から、Lecanora、Parmelia、Umbilicariaなどの地衣類は、アルゼンチンなどのアメリカ大陸の国で発見されています。これらの国は、オルセインの優れた供給源です。また、カナリア諸島などのヨーロッパ地域は、当時、オーキラの大規模な生産者でした。
これは、ジェノヴァなどの同じ大陸の他の都市やイギリスなどの国に輸出されましたが、オランダはオーチラからのリトマスの製造を独占していました。したがって、この地衣類は、それが絶滅する寸前まで減少しました。
これにより、orchillaは染料の性質を持つ他の植物に置き換えられました。しかし、合成染料の出現は、このオルセイン源地衣類の取引の終了に貢献しました。
これは、1812年にオルセインの合成について説明したCocqのおかげで可能になりました。これは、オルシノールと呼ばれるフェノール化合物によって合成されることを知っていたからです。しかし、それにもかかわらず、今日でも天然のオルセインが好まれています。
これは、オルシノールが非常に強い臭いのする化合物であり、その長期間の曝露が、臭気を検出する能力の喪失などの健康リスクをもたらす可能性があるためと考えられます。下垂体へのこれらの損傷は、一時的なものから永久的なものへと、より多くの暴露に及ぶ可能性があります。
参考文献
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