EMB寒天グラム陰性菌、特に腸内細菌および多くを求めない他のグラム陰性菌の固体培養の単離のために使用される選択と差動媒体です。エオシンメチレンブルーを表す頭字語EAMでも知られています。
この培地は、1916年にHolt-HarrisとTeagueによって作成されました。これには、ペプトン、ラクトース、スクロース、リン酸二カリウム、寒天、エオシン、メチレンブルー、および水が含まれています。特にスクロースを含まないLevineのModified EMB Agarを使用する場合は、MacConkey Agarとよく似ています。
EMB寒天上の大腸菌の金属光沢出典：ウィキメディア・コモンズのカルメン・モレノ・ゴンサレス
実際、生化学的には異なりますが、同じ機能を果たすため、各研究室はどちらを使用するかを決定します。
プロテウス属による大量生産に関しては、古典的なマッコンキー寒天と同じ欠点さえあります。したがって、この現象を回避するために、寒天濃度を最大5％増やすことができます。
基礎
選択的
EMB寒天は、阻害剤として作用するアニリン染料（エオシンおよびメチレンブルー）を含んでいるため、微妙に選択的であり、ほとんどのグラム陽性菌および一部の扱いにくいグラム陰性桿菌の増殖を防ぎます。
ただし、この寒天には、一部のグラム陽性菌が阻害物質の存在に抵抗し、Enterococcus faecalisや一部のブドウ球菌などの小さな無色の点状コロニーとして成長するという欠点があります。
非常に小さなピンク色のコロニーを与えるカンジダアルビカンス複合体など、特定の酵母も成長する可能性があります。クラミドスポアは、サンプルがディープシードされている場合、この酵母から発生することさえあります。
微分
一方、EMB寒天は、これらの染料（エオシンとメチレンブルー）が一緒に酸性pHで沈殿物を形成する特性を持っているため、差別的な培地でもあり、したがって、それらはその生産の指標として機能します。
したがって、弱い乳糖またはショ糖発酵細菌は、24〜48時間以内に紫色のコロニーを生成します。たとえば、クレブシエラ属、エンテロバクター属、セラチア属。
Escherichia coliのような乳糖、またはYersinia enterocoliticaやProteus penneriのようなスクロースを強力に発酵させる細菌は、緑がかった黒色の沈殿物を形成し、これらの種に特徴的な金属光沢の外観を与えます。
EMB levine培地（スクロースなし）を使用すると、Yersinia enterocoliticaとProteus penneriは明確なコロニーを作ることに注意してください。
ラクトースまたはスクロースを発酵させない細菌は、細菌の増殖に必要なアミノ酸と窒素を提供し、明確なコロニーを生成するペプトンの存在によって養われます。たとえば、サルモネラ属とシゲラ属などです。
同様に、アシネトバクター属は、ラクトース発酵槽やスクロースではないが、細胞壁にメチレンブルーを固定する性質があるにもかかわらず、ラベンダーブルーのコロニーを示す可能性があることに注意することが重要です。これは他の酸化細菌でも起こります。
準備
元の脱水培地は薄いベージュ色です。
この培地を調製するには、36グラムの脱水培地を計量し、1リットルの蒸留水が入ったフラスコに懸濁する必要があります。
混合物を5分間静置した後、フラスコを熱源に取り、沸騰して完全に溶解するまで激しく、絶えず混合します。
その後、すでに溶解した培地はオートクレーブを使用して121°Cで15分間滅菌する必要があります。
時間の最後に、それはオートクレーブから取り出され、短時間放置されます。次に、まだ暖かい（45-50°C）、15-20 mlの寒天が各滅菌ペトリ皿に提供されます。培地はリトマスブルーでなければなりません。
提供した後、プレートは、寒天がわずかに冷えるまで、蓋をせずに残されます。次に、それらを覆い、完全に固化させます。その後、逆さまのプレートホルダーに並べ、使用時まで冷蔵庫（8℃）で保管します。
この手順は、汚染を回避するために、層流フード内またはブンゼンバーナーの前で実行するのが好ましい。
培地を準備するために秤量する量は、各商業施設によって示されることに留意することが重要です。
培地の最終pHは7.2±0.2でなければなりません
用途
この培地は、特にこの培地で非常によく増殖する腸内細菌科に属する桿菌のような、堅固ではないグラム陰性桿菌の存在が疑われる場合、尿と糞便またはあらゆるタイプの臨床検体を播種するために使用されます。
赤痢菌およびサルモネラ属の腸内病原性細菌は、無色またはわずかに琥珀色のコロニーで区別されます。
とりわけ、アエロモナス、シュードモナス、アシネトバクターなどの非乳糖発酵桿菌も増殖する。
同様に、この培地は、大腸菌群の測定の完全な確認段階、つまり、濁ったEC培養液からのE. coli最も可能性の高い数の技術（MPN）の。
QA
新たに調製された培地がうまく機能していることを確認するために、コントロール株を植えて、コロニーの特性を観察し、期待通りにそれらが与えることを確認できます。
このために、ATCC株またはよく同定された大腸菌、Enterobacter aerogenes、Klebsiella sp、Salmonella typhimurium、Shigella flexneri、Pseudomonas aeruginosa、および黄色ブドウ球菌などのいくつかのグラム陽性菌を使用できます。
大腸菌は、緑色の金属光沢を持つ、よく発達した青黒色のコロニーを生成すると予想されます。一方、Enterobacter aerogenesとKlebsiella spは、よく発達した青みがかった黒色のコロニーを形成するはずです。
一方、Salmonella typhimuriumとShigella flexneriは、無色またはわずかに琥珀色の大きなコロニーを形成する必要があります。
最後に、Pseudomonas aeruginosa属は、不規則なサイズの無色のコロニーとして成長しますが、グラム陽性菌は完全に阻害されるか、非常に小さなコロニーでまばらに成長します。
最終的な考え
時には滅菌によりメチレンブルーが減少し、中程度のオレンジ色を示します。メチレンブルーが酸化して紫色を回復するためには、色が回復するまで穏やかに混合する必要があります。
また、滅菌後、染料が沈殿する可能性があるため、ペトリ皿を提供する前によく混合する必要があります。
参考文献
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