LIA（リジン鉄）寒天：基礎、準備および使用 - 生物学 - 2025

寒天LIA（リジン鉄）は、腸内細菌科の細菌を同定するために使用される生化学的試験です。この媒体は、ファルコウの公式に基づいて、エドワーズとファイフによって作成されました。

もともとこのテストは、ペプトン、酵母エキス、グルコース、L-リジン、ブロモクレゾールパープル、蒸留水を含むブロスでした。エドワーズとファイフは、寒天、クエン酸第二鉄アンモニウム、チオ硫酸ナトリウムを追加しました。

リジン脱炭酸反応の陽性および陰性試験。出典：著者の修士課程の写真と図のプロパティ。マリエルサギル

テストは基本的に、アミノ酸L-リジンのカルボキシル基と反応することができる酵素リジン脱炭酸酵素の存在を示すことから成ります。酵素リジンデアミナーゼの存在により、アミノ酸の脱アミノ化も起こり得る。

さらに、培地の組成は、いくつかの細菌属が硫化水素を生成する能力を示しています。最後に、媒体中のガスの発生の有無を観察することも可能です。

基礎

ペプトンと酵母エキス

ほとんどの培地と同様に、リジン鉄寒天培地には、細菌の増殖に必要な栄養素の供給源となる成分が含まれています。これらの成分は、ペプトンと酵母エキスに代表されます。

グルコース

同様に、この寒天は発酵性炭水化物としてグルコースを含んでいます。腸内細菌科のすべての細菌は、ブドウ糖を発酵させることが知られています。

培地の酸性化に関与するため、このステップは非常に重要です。これは、酵素リジン脱炭酸酵素（存在する場合）が基質に作用するための必須条件です。

一部の細菌属では、グルコース発酵によるガス生成が観察されます。

ガスは、チューブ内の寒天の変位があり、チューブの底に空のスペースが残っている場合、または培地が2つ以上の部分に破壊されることによって示されます。

L-リジン

リジンが脱炭酸されると、ジアミン（カダベリン）と二酸化炭素が形成されます。

脱炭酸は、補酵素ピリドキサールリン酸の存在下で起こります。この反応は不可逆的です。

PHインジケーター（ブロモクレゾールパープル）

さまざまな反応によって媒体内で発生するすべてのpH変化は、紫色のブロモクレゾールpHインジケーターによって検出されます。

この意味で、酸性化すると培地は黄色に変わり、アルカリ化すると培地は元の紫色または紫色に戻ります。

リジン脱アミノ酵素が存在するためにリジン脱アミノ化が起こると、プロテウス属、プロビデンシア属、および一部のモルガネラ属に典型的な赤みがかった色が表面に形成されます。

これは、脱アミノ化プロセス中に、α-ケト炭酸が形成され、酸素の存在下でクエン酸アンモニウムと反応して、前述の色を引き起こすという事実によるものです。

クエン酸第二鉄アンモニウムとチオ硫酸ナトリウム

一方、硫化水素を生成する細菌は、チオ硫酸ナトリウム（硫黄源）とH ₂ Sの開発者であるクエン酸第二鉄アンモニウムの存在によって証明されます。

酵素チオ硫酸レダクターゼを持つ細菌は、存在するチオ硫酸ナトリウムを還元し、亜硫酸塩と硫化水素（H ₂ S）を形成することによって作用する能力があります。

後者は無色のガスですが、鉄塩と反応すると、不溶性の化合物（目に見える黒い沈殿物）である第一鉄硫化物を形成します。

しかし、Hを形成する能力₂いくつかのリジンがH産生できる陰性細菌デカルボキシラーゼため、この培地でSは、非常に信頼性がない₂ Sは、媒体が干渉の酸性度として、黒色の沈殿物を形成しません。したがって、鉄を含む他のメディアで確認することをお勧めします。

テストの解釈

リジンの脱炭酸

チューブは24時間のインキュベーション後に読み取る必要があります。そうしないと、反応が誤って解釈され、偽陰性が報告されるリスクがあります。

発生する最初の反応はグルコースの発酵であるため、10〜12時間後のすべてのチューブが黄色に変わることを忘れないでください。

インキュベーション時間の最後（24時間）に、表面が紫色または紫色の黄色の背景が観察される場合、反応は陰性です。表面の紫色は、ペプトンの使用による培地のアルカリ化に対応しています。

陽性反応とは、チューブの底と表面が完全に紫色、つまり元の色に戻る反応です。

したがって、テストの陽性を決定するのは、媒体のベースまたはバックグラウンドです。色に疑問がある場合は、接種していないLIAチューブと比較できます。

リジンの脱アミノ化

リジンの脱アミノ化を示すチューブは、赤みがかったあずき色の表面と黄色（酸性）の背景、またはチューブ全体が赤みがかったあずき色になります。

この反応は、リジンの脱炭酸反応では陰性、リジンの脱アミノ反応では陽性と解釈されます。

この反応は、ベゼルで定義および解釈されます。

硫化水素（H

陽性反応は、培地の全部または一部に黒い沈殿物が出現することにより観察されます。通常、ベベルのエッジとベースの間。

沈殿物がチューブ全体に発生した場合、それは中央で発生する他の反応を明らかにしません。

結果の記録

テストを解釈すると、結果は次のように記録されます。

最初にベベルが読み取られ、次に底部またはブロックが読み取られ、次にH ₂ Sが生成され、最後にガスが生成されます。

例：K / A +（-）。これの意味は：

• K：アルカリベゼル（紫）
• A：酸性の背景（黄色）、つまり、脱炭酸反応がマイナスであり、脱アミノ化がマイナスである。
• +：硫化水素の製造
• （-）：ガスなし。

準備

脱水鉄寒天リジン培地35 gを量り、1リットルの蒸留水に溶かす。

寒天が完全に溶けるまで加熱します。これを行うには、1分間沸騰させ、頻繁に攪拌します。4 mlの培地をコットンキャップ付きの13/100試験管に分配します。

121°Cのオートクレーブで15分間滅菌します。オートクレーブから外し、斜めに立って、底が深く、ベベルが短くなるようにします。

2-8°Cの冷蔵庫に保存します。菌株を播種する前に暖めます。

脱水後の培地の色はベージュ、調製した培地は赤紫です。

調製した培地の最終pHは6.7±0.2

培地はpH 5.2以下で黄色に変わり、pH 6.5以上で紫色になります。

用途

このテストは、他の生化学的テストとともに、腸内細菌科の桿菌の同定に使用されます。

培地にまっすぐなループまたは針を播種し、チューブの底に1つまたは2つの穴を開け、培地の表面をジグザグに切り込みを入れます。

好気性生物で35-37°Cで24時間インキュベートします。必要に応じて、さらに24時間インキュベートします。

これは主に、乳糖陰性のシトロバクター属をサルモネラ属から区別するのに役立ちます。

出典：Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。

参考文献

1. Mac Faddin J（2003）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的検査。第三版 社説パンアメリカーナ。ブエノスアイレス。アルゼンチン。
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3. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
4. ブリタニア研究所。リジン鉄寒天。2015.次で入手可能：britanialab.com
5. BD Laboratories。BBLリジン鉄寒天傾斜。2007.利用可能：bd.com
6. ヴァルテック研究所。中型LIA 2009. andinamedica.comで入手可能