マンニトール塩寒天またはマンニトール塩が固体培地の選択と差動文化です。これは、病原性グラム陽性球菌、特に黄色ブドウ球菌を分離するためにチャップマンによって作成されました。
しかし、日和見病原体として存在することもある表皮ブドウ球菌や、特に尿路病原菌として認められているブドウ球菌などを分離することも有用です。
A.塩味のあるマンニトール寒天培地を調製したフィオラ。B.発酵および非発酵マンニトール細菌株を播種した塩漬けマンニトール寒天プレート。出典：AおよびB：著者MScが撮影した写真。マリエルサ・ギル。
一部のEnterococcusは、この培地、および特定のグラム陽性胞子形成桿菌で成長することができます。
この媒体は、臨床サンプルの分析に非常に役立ちますが、食品の微生物学的研究や、特に化粧品、医薬品などの工業製品の品質管理にも使用されます。
塩味のあるマンニトール寒天は、牛肉、トリプテイン、マンニトール、塩化ナトリウム、フェノールレッド、寒天からの抽出物とペプトンで構成されています。
基礎
マンニトール寒天は、その高濃度の塩のおかげで選択的です。塩分は阻害物質として作用し、グラム陰性菌の増殖を防ぎます。
また、炭水化物マンニトールとフェノールレッドpHインジケーターの存在によっても異なります。これにより、マンニトールを発酵できる細菌は酸を生成し、培地を酸性化し、コロニーと培地を黄色にします。
一方、マンニトールを発酵させないコロニーは、肉抽出物とペプトンとトリプテインによって提供される栄養素を取り、培地で成長します。そこからバクテリアは、成長に必要な炭素、窒素、ビタミン、ミネラルを抽出します。
この場合のコロニーはピンク色が濃い場合と濃い場合があります。培地は同じ色のままか、フクシアに変わります。
寒天は、培地に一貫性を提供する物質です。
準備
1リットルの塩味のマンニトール寒天を調製するには、フラスコを使用して、好ましい商業会社からの111 gの脱水培地を計量し、1000 mlの蒸留水に溶解します。
溶解プロセスを改善するために、媒体を頻繁に攪拌しながら熱を加えます。少し沸騰させます。
フラスコを121℃のオートクレーブに15分間入れる。
時間の最後に、バイアルをオートクレーブから取り出し、それを静置し、温度が約50〜55°Cのときに滅菌ペトリ皿に15〜20 ml入れます。
それは固化することができ、プラケロスで逆に注文し、使用するまで冷蔵庫に保管します。サンプルを播種する前に、プレートが室温になるまで待ちます。
プレートは、ストリーキングによって、またはドリガルスキーへらで表面播種することによって播種されます。調製した培地の最終pHは7.4±0.2でなければなりません
脱水した培地の色はライトベージュ、調製した培地の色はオレンジレッドです。
用途
その選択性が高いため、この培地は、この属の主要な病原体としての黄色ブドウ球菌の存在が求められている混合フローラを含むサンプルの播種に最適です。
この意味で、その最も頻繁な用途の1つは、特に無症候性黄色ブドウ球菌保菌者を検出するための、咽頭滲出液および鼻汁サンプルの微生物学的分析です。
一部の国では、この分析を食品販売業者として働きたい人の必須要件として実装しています。
この管理により、黄色ブドウ球菌の保菌者が雇用されるのを防ぎ、ブドウ球菌のエンテロトキシンで汚染された食品の消費による大量の食中毒を回避します。
また、創傷感染、血液培養、CSF、気管支肺胞洗浄などの播種にも使用できます。
塩漬けマンニトール寒天は、グラム陽性の球菌がクラスター状になっているCLED寒天または血液寒天からの尿培養物からコロニーを再分離するのに役立ちます。
また、他のアプリケーションの中でも、食品、飲料水、土壌の微生物学的分析にも有効です。
QA
塩味のあるマンニトール寒天を含むプレートのバッチを準備したら、品質管理を行うことをお勧めします。コントロール株は、成長があるかどうかを示すために播種されます。
既知の黄色ブドウ球菌株を陽性対照として使用できます。黄色のコロニーを十分に発達させて増殖し、培地も同じ色になります。
同様に、Staphylococcus epidermidisの既知の株を含めると便利です。それはピンク色のコロニーを十分に発達させて成長するはずであり、培地は同じ色のままであるか、または濃いピンク色に暗くなる。
ネガティブコントロールとして、この培地で生育してはいけない株を使用します。例えば、エシェリヒア・コリまたはクレブシエラ・ニューモニエの既知の株を増殖させることができる。期待される結果は完全な抑制、つまり成長がないことです。
さらに、未接種のプレートをインキュベートする必要があります。その中で成長や色の変化があってはなりません。
汚れ、脱水、変色などの劣化の兆候がある場合は、プレートを使用しないことが重要です。
最終的な考え
塩辛いマンニトール寒天培地を使用する場合、考慮すべきいくつかの重要な側面があります：
-黄色のコロニーの成長を得ても、それが黄色ブドウ球菌であるとは限りません。エンテロコッカスのいくつかの株は、この培地で成長し、マンニトールを発酵することができ、特定の胞子を形成するグラム陽性桿菌であることを忘れないでください。
したがって、コロニーでグラムを実行し、カタラーゼのテストを行うことが重要です。
-一方、黄色ブドウ球菌以外の他のブドウ球菌種もマンニトールを発酵させることができることを考慮しなければなりません。したがって、コロニーを栄養ブロスに継代培養してそこから採取し、コアグラーゼテストを行うことが重要です。
マンニトールを発酵させる人間にとって臨床的に重要なブドウ球菌種には、S。aureus、S。simulans、S。capitis ssp capitis、S。capitis ssp urealyticus、S。xylosus、S。cohnii ssp urealyticumなどがあります。
他の人はさまざまな反応をすることができます。特に、S。saprophyticus、S。haemolyticus、S。warneri、S。intermediusなどがあります。
-培地中の高濃度の塩が結果を妨害する可能性があるため、コアグラーゼ試験を実施するためにマンニトール寒天から直接コロニーを採取することは推奨されません。
-最後に、塩味のあるマンニトールを播種したプレートを48時間までインキュベートすることをお勧めします。これは、黄色ブドウ球菌の一部の株がマンニトールをゆっくりと発酵できるためです。
参考文献
- ブリタニア研究所。塩辛いマンニトール寒天。2015.次で入手可能：britanialab.com
- 「塩味マンニトール寒天」。ウィキペディア、フリー百科事典。2018年10月31日19:08 UTC。2019年1月17日20：55、es.wikipedia.orgで入手可能。
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。（第5版）。アルゼンチン、Panamericana SA社
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed アルゼンチン。エディトリアルパナメリカーナSA
- BD Laboratories。BDマンニトール塩寒天。2013.入手可能：bd.com。