ラクトフェノールブルーまたはブルー綿は、単一染料特性を用いて調製されます。臨床検査室では、主に菌糸、胚芽、胞子などの真菌構造を着色するために使用されます。
特定の真菌の推定または予備診断に役立ちますが、生化学的または血清学的検査などのより具体的な検査で診断を強化することを常にお勧めします。
ラクトフェノールブルー染色、ラクトフェノールブルーで染色された塗抹標本、顕微鏡に取り付けられた標本のグラフィック表示。ソース：public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8
ラクトフェノールブルーは、乳酸、アニリンブルー、グリセリン、フェノール、および脱イオン水で構成されています。実験室で準備するか、すぐに使用できる状態で購入できます。準備ができたら使用する準備ができていますが、希釈しないでください。この操作を行うとひどい結果になります。
フェノールは付随する細菌の微生物叢を排除し、乳酸は真菌構造の周りに保護膜を生成するため、その成分の濃度は真菌構造の染色に理想的です。最後に、アニリンブルーは真菌の構造に付着する親和性を持っています。
基礎
ラクトフェノールブルーを使用すると、特定の菌類培養の真菌構造の単純な染色が実行されます。着色剤を1つだけ使用するため、単純と呼ばれます。
ラクトフェノールブルーは、染色とは別に、乳酸とフェノールの共同作用により、サンプルの清澄剤としても機能します。さらに、フェノールは媒染剤として機能し、同時に加水分解酵素を阻害することで微生物の溶解を防ぎます存在する可能性があります。
乳酸は菌類の構造の形態を保存します。
一方、アニリンブルーはキチン含有構造に付着または結合する性質を持っています。構造は水色に染色されています。
真菌微生物、特にカビの細胞壁にはキチンが含まれているため、この色素がこれらの微生物の染色に最適であることに注意してください。
特徴
ラクトフェノールブルーの溶液は、強酸性でわずかに濁った、淡い青色の水性染料です。15°Cから25°Cの間に保管すると、安定した状態を保ちます。ボトルは適切に閉じておく必要があります。皮膚や粘膜を刺激し、腐食性があります。
組成
ラクトフェノールブルー1リットルを調製する式は次のとおりです。
-250 g / L乳酸
-1.0 g / Lアニリンブルーまたはメチルブルー
-500 g / Lのグリセリン
-250 g / Lフェノール
-250 mlの脱イオン水または蒸留水。
フェノールは前に温めた水に溶解します。乳酸とグリセリンを加えてよく混ぜます。最後に、アニリンブルーが溶解します。それは再び混合し、使用する準備ができています。
80 mlのラクトフェノールブルー溶液を調製する部分は次のとおりです。
-20 gのフェノール結晶
乳酸-20ml
グリセリンまたはグリセロール-40 ml
-20mlの蒸留水。
使用する
真菌の構造を染色するために使用され、顕微鏡レベルで観察される形態学的特徴を通じて、真菌の推定診断を行うことができます。
処理する
培養物の真菌構造の染色
-構造が観察される真菌の純粋な培養物を取ります。
-ほとんどの金型は環境内に広がりやすく、したがって危険を表すため、バイオセキュリティ基準に準拠する必要があるため、マスクと手袋を使用して、層流フード内またはライターの下で作業することが望ましいオペレーターのために。
-ラクトフェノールブルーを1滴スライドに載せます。
-良質の粘着テープを小さな四角に切り、冷たい滅菌したプラチナハンドルの端に注意深く貼り付けます。
-プラチナハンドルを真菌コロニーの最も浅い部分に近づけ、粘着テープが貼られている場所の培養物に細心の注意を払って触れます。
-次に、それをスライドに取り、テープが完全に伸ばされて染料で滑らかになるように注意しながら、ラクトフェノールブルーの滴の上に直接置きます。プラチナのハンドルは非常に繊細に取り除かれています。
-もう1滴のラクトフェノールブルーをテープとカバースリップの上に置きます。菌類は非常に壊れやすいので、菌の構造を破壊しないように、力を入れすぎないでください。着色剤は、約3〜4分間作用させる必要があります。
-この時間が経過すると、標本を顕微鏡で10倍または40倍の倍率で観察できるようになります。100Xの観察が必要な場合は、液浸油を使用する必要があります。
-真菌の構造は、一般に青く染色されていますが、このタイプの真菌の特徴的な茶色を保持するケガはありません。
直接生物標本染色
痰、膿、滲出液、分泌物などの直接の生体サンプルを研究する必要がある場合、これらはサンプルの事前の除染手順が必要です。これには、NaOH溶液を使用します。
髪のサンプルの場合、これらは直接染色できます。
影響を受けた数本の髪の毛（合計10本）は、頭蓋白癬の推定病変（脱毛領域）から採取され、スライドに配置されます（スライドごとに3〜4本の髪）。数滴のラクトフェノールブルーを上に置き、すぐにカバーガラスで覆います。
ピンセットでスライドをつかみ、バーナーで軽く加熱します。これを行うには、炎を3〜4回すばやく通過させます。40Xで顕微鏡を観察し、髪の外側または内側の胞子を探します（それぞれ、外陰部または内毒素）。必要に応じてイマージョンオイルを追加し、100倍で観察します。
の識別における生殖管染色
カンジダアルビカンスの推定培養液をヒト血清中で2〜4時間37°Cでインキュベートした後、溶液の一部を採取し、ラクトフェノールブルーで染色します。標本を顕微鏡下で40倍で観察します。胚芽が存在し、胚盤胞子は明るい青色に染色されます。
ラクトフェノール安全データシート
全米防火協会（NFPA）は、さまざまな側面に従ってリスクの観点から化学物質の安全性データシートを確立します。これらは、色付きの菱形と0〜四。
健康被害は青で、可燃性は赤で、不安定性または反応性は黄色で、特別な危険は白で識別されます。
健康
NFPAによるラクトフェノールブルーの健康リスクはレベル3です。つまり、摂取したり、皮膚や粘膜に直接接触したりすると、物質が非常に危険になります。
腐食性が高く刺激性のある物質です。
皮膚や粘膜と接触すると、重度の火傷を引き起こします。
摂取すると、頭痛、混乱、嗜眠、意識喪失、呼吸停止、さらには死に至る可能性があります。
引火性
NFPAによると、ラクトフェノールブルーは可燃性のレベル1と評価されています。これは、94°C以上に加熱された場合にのみ燃焼することを意味します。
不安定
反応性のためにレベル0（ゼロ）でNFPAによってリストされています。つまり、反応性のリスクがない、つまり化学的に安定した物質です。
特別な危険
追加の特別な危険はありません。
参考文献
- SAR研究所。ラクトフェノールブルー。2010。labsar.comで入手可能。
- 応用臨床化学実験室。ラクトフェノールブルー。2015.次で入手可能：cromakit.es
- メルク研究所。溶液中のラクトフェノールブルー顕微鏡。2017.利用可能：ユーザー/ Equipo /ダウンロード
- 緊急カード。真菌染色用のラクトフェノールブルー溶液。コロンビア大学ボゴタポンテフィシアジャベリアナ校。2014.次で入手可能：javeriana.edu.co
- ゴンザレスM、ディアモントD、グティエレスB.非汚染代替品として植物染料で真菌構造を染色する手法。バイオアグロ、2011; 23（1）：65-68。で利用可能：Redalyc。
- 研究所Himedia。ラクトフェノールコットンブルー。2017.利用可能：himedialabs.com
- Wanger A、Chavez V、Huang R、Wahed A、Actor J、DasguptaA。微生物同定のための生化学的試験および染色技術。Science Direct、2017; 61-73。入手可能：Elsevier