サブロー寒天：基礎、準備および使用 - 生物学 - 2025

サブロー寒天サブロー寒天デキストロースなども知られ、そのような酵母、カビおよび皮膚糸状など特に真菌の単離および開発について富化固形培地、です。

したがって、この培地は、臨床または非臨床サンプルのいずれかから、病原菌または日和見菌の存在を調査するための微生物学研究室に欠けていることはありません。同様に、ストレプトミセスやノカルジアスなどの糸状菌の増殖にも最適です。それは人間、動物、植物および産業の真菌学で使用できるので、その使用は非常に広いです。

A.種なしサブロー寒天。B.酵母を播種したサブロー寒天。出典：著者MScが撮影した写真。マリエルサギル

この培地は1896年に著名な皮膚科医Raimond Sabouraudによって作成されました。

その作成は非常に重要であったため、変更が加えられていますが、それ以降も使用され、現在も残っています。

真菌にとっては特別ですが、細菌はこの培地で増殖する可能性があるため、混合フローラを含むサンプルの場合、存在する可能性のある細菌フローラの成長を抑制するために、準備に抗生物質を含める必要があります。

一部の物質は特定の物質の存在下で阻害されるため、抗生物質の選択は、回収する真菌のタイプを考慮して慎重に行う必要があります。

基礎

サブローデキストロース寒天培地は、その元の製剤では5.6±0.2の酸性pHのために選択性が弱い培地ですが、細菌は主に長時間のインキュベーションでまだ発生する可能性があります。

培地には、カゼインペプトンと動物組織の膵臓消化物が含まれ、微生物の成長に炭素と窒素の供給源を提供します。

また、高濃度のグルコースが含まれています。これはエネルギー源として機能し、細菌よりも真菌の成長を促進します。これらすべてに、適切な一貫性を与えるコンポーネントである寒天が含まれています。

一方、抗生物質を添加すると、サブローデキストロース寒天培地は選択的となります。

抗生物質を使用すると、創傷のサンプル、開いた潰瘍、または細菌による汚染が疑われるサンプルに特に役立ちます。

抗生物質とサブローデキストロース寒天の最も一般的に使用される組み合わせ

-クロラムフェニコールを含むサブロー寒天培地：酵母や糸状菌の回収に最適です。

-ゲンタマイシンとクロラムフェニコールを含むサブロー寒天：ほとんどすべての糸状菌と酵母がこの培地で成長し、腸内細菌、シュードモナス、ブドウ球菌などの多数の細菌を抑制します。

-シクロヘキシミドを含むサブロー寒天培地：疑いが二形性真菌である限り、皮膚または気道のサンプルに特に有用です。

シクロヘキシミドは注意して使用する必要があります。これは、サンプル中に汚染物質として存在する可能性のある非病原性または環境性の真菌および酵母の成長を阻害するために使用されますが、クリプトコッカスネオフォルマンス、アスペルギルスフミガーツス、アレシェリアボイディ、ペニシリウムspおよび他の日和見菌などの一部の真菌の成長も阻害します。

-クロラムフェニコールとシクロヘキシミドを加えたサブロー寒天：主に皮膚糸状菌と二形性真菌の分離に使用されます。カンジダアルビカンス、アスペルギルス、接合菌類、C。ネオフォルマンスなどの日和見菌の一部の種を阻害するという欠点があります。

-クロラムフェニコール、ストレプトマイシン、ペニシリンG、シクロヘキシミドを含むサブロー寒天：バクテリアや腐生菌で非常に汚染されたサンプルに最適ですが、上記の日和見菌に加えて放線菌やノカルジアの増殖を阻害するという欠点があります。

準備

別々に成分がある場合は、次のように準備できます：

サブローデキストロース寒天

計量する：

-40 gのブドウ糖

-ペプトン10 g

-15グラムの寒天

-蒸留水1000 mlを測定する

すべての成分を混合し、pHを5.6に調整します。溶質は沸騰により溶解され、20 mlの培地が25 x 150 mmのチューブに、縁なしで、できれば綿のキャップを付けて分配されます。

綿キャップ付きチューブ。出典：著者MScが撮影した写真。マリエルサギル

可用性に応じて、他のサイズのチューブも使用できます。

それらは、圧力（121°C）の雰囲気で10分間オートクレーブされます。オートクレーブ時間を超えないようにしてください。オートクレーブを出るとき、チューブはフルートのくちばしで固まるまでサポートの助けを借りて傾けられます。

別の方法は、沸騰するまで加熱して材料を溶かすことです。同じバイアルで10分間オートクレーブし、20 mlをペトリ皿に分配します。

すでにすべての成分が含まれているサブローデキストロース寒天培地をお持ちの場合は、1リットルの水について、会社が指定した量を量ることに進んでください。残りの手順は上記と同じです。

サブローデキストロース寒天（エモンズ改変）

計量する：

-20 gのブドウ糖

-ペプトン10 g

-17グラムの寒天

-蒸留水1000 mlを測定する

すべての成分を混合し、pHを6.9に調整します。前のケースと同じ方法で続行します。

すべての成分を含む培地を提供する商業住宅があります。この場合、インサートに記載されているように計量して準備します。

サブローデキストロース寒天（エモンズ修飾）とクロラムフェニコール

クロラムフェニコール原液

-500 mgのクロラムフェニコールベースの重さ

-95％エタノール100 mlを測定する

-ミックス

サブローデキストロース寒天培地（エモンズ）を前述のように準備し、さらに1リットルの培地にオートクレーブする前に10 mlのクロラムフェニコール原液を加えます。

サブローエモンズデキストロース寒天とシクロヘキシミド

シクロヘキシミド原液

-5グラムのシクロヘキシミドを計量します

-100 mlのアセトンを測定する

-ミックス

サブローデキストロース寒天培地（エモンズ）は既に説明したように準備され、さらに1リットルの培地に10 mlのシクロヘキシミド原液を加えてからオートクレーブにかけます。

サブローデキストロース寒天（エモンズ）、クロラムフェニコール、シクロヘキシミド

サブローデキストロース寒天培地（Emmons）は既に説明したように準備し、さらに1リットルの培地に10 mlのクロラムフェニコールストック溶液と10 mlのシクロヘキシミドストック溶液を加えてからオートクレーブにかけます。

加えることができる他の抗生物質

培地1リットルあたり20,000〜60,000単位のペニシリン。

培地1リットルあたり30mgのストレプトマイシン。

培地をオートクレーブにかけ、わずかに冷却（50-55°C）した後、両方を組み込む必要があります。

培地1リットルあたり0.04gのネオマイシン。

培地1リットルあたり0.04gのゲンタマイシン。

特別な考慮事項

安全のために、胞子の分散および吸入を避けるために、サブローデキストロース寒天をペトリ皿ではなく、くさび形のチューブ（フルートビークに傾けた）に播種することが好ましい。

セミ嫌気性条件では、いくつかの菌株、例えば、コクシジオイデスイミティスなどの胞子形成を阻害することが示されているため、サブロー寒天チューブをねじキャップではなく綿で覆うことが重要です。また、ほとんどの菌類は好気性です。

スクリューキャップを使用する場合は密閉しないでください。

QA

準備したメディアは、適切に機能することを確認するために品質管理を受ける必要があります。このために、特定の制御株が播種されています。

クロラムフェニコールを含むサブローデキストロース寒天の場合、カンジダアルビカンスのATCC株を使用できます。別のプレートには、完全に阻害されなければならない大腸菌株を接種します。

接種されていないプレートもインキュベートし、微生物が増殖しないようにします。

クロラムフェニコールとシクロヘキシミドを含むサブローデキストロース寒天の場合、Trichophyton mentagrophytesの菌株を使用できます。別のプレートには、アスペルギルス・フラバスの菌株が接種されており、増殖はほとんどまたはまったくないに違いありません。さらに、無菌プレートは、その無菌性を示すために培養されます。

シクロヘキシミドを含むサブローデキストロース寒天の場合、カンジダアルビカンス、Trichophyton rubrum、またはMicrosporum canisの株を使用します。

同様に、Aspergillus flavusの株も含まれており、ほとんどまたはまったく成長していません。最後に、無菌のプレートをインキュベートして無菌状態を制御します。

用途

初代文化

クラシックサブローデキストロース寒天は4グラムのデキストロースを含み、各菌類の特徴的な形態を示すため、主要な分離培地として優れています。

また、顔料の生産を実証するためにも優れています。しかし、それは胞子形成を観察する最良の方法ではありません。

また、存在する高濃度のグルコースにより阻害されるブラストミセス・デルマチディスの培養には推奨されません。

一方、耕作のために特定の考慮事項を考慮する必要があります。

カビなど、一部の菌類は室温で最もよく成長し、一部の酵母菌などは37°Cで正常に成長し、他の菌類は両方の温度で成長できます（二形性菌類）。

このため、同じサンプルに対して複数のサブロー寒天プレートを使用する必要がある場合があります。1つのプレートを室温で、もう1つのプレートを37°Cでインキュベートするために、2回の播種がしばしば行われるためです。

たとえば、Sporothrix schenckiiは2つのプレートに播種されます。1つは室温で培養してカビ期を取得し、もう1つは37°Cで培養して酵母期を取得しますが、後者では5％の血液を培地に添加する必要があります。

菌腫サンプルなどの他のケースでは、2つのサブロー寒天プレートに、1つはクロラムフェニコールを、もう1つはシクロヘキシミドを播種します。1つ目は、真菌起源の真菌腫の病原菌（真菌腫）の増殖を可能にし、2つ目は、放線菌類などの細菌起源の菌血症の原因菌の増殖を可能にします。

胞子形成

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agarには2グラムのデキストロースが含まれており、分離だけでなく、胞子形成や真菌の保存にも使用されます。

この培地では、Blastomyces dermatitidisの菌株を回収できます。

保全

キノコの培養を維持するために、それらは冷蔵庫（2-8°C）で保存できます。保存期間は2〜8週間です。この後、プロセスを繰り返すには、それらを継代培養する必要があります。

Epidermophyton foccosum、Trichophyton schoenleinnii、T。violaceum、Microsporum audouniiなど、一部の菌類は室温で最高の状態を保ちます。

寒天からデキストロースを完全に除去し、乾燥を避けるために培地中の寒天の量を減らす場合、多型を避けるために菌株の維持を延長することができます。

マイクロカルチャー

いくつかの糸状菌の同定のために、有性生殖および無性生殖の構造を観察するためにサブロー寒天または他の特別な手段を使用して微小培養を行う必要があります。

人間の真菌学では

主に真菌性疾患、特に皮膚とその付着物（髪と爪）に影響を与える疾患の診断に使用されます。

サンプルは分泌物、滲出液、皮膚、髪、爪、痰、CSF、または尿です。一般的に分離されている病原体は、皮膚糸状菌、皮下および全身の真菌症を引き起こす真菌です。

動物菌学

動物はしばしば真菌感染症の影響を受けます。したがって、サブロー寒天は、人間と同様に、動物菌学においても有用です。

たとえば、皮膚糸状菌は動物に影響を与えることがよくあります。Microsporum canis var distortumの場合は、犬、猫、馬、豚、猿に頻繁に感染します。同様に、Microsporum gypseumは犬、猫、家畜に感染します。

ニワトリ、オンドリ、ニワトリなどの鳥は、Microsporum gallinaeの影響を受けます。

Zymonema farciminosumなどの他の真菌も、主にウマ、ラバ、ロバなどの動物の病気の原因であり、リンパ管に重大な炎症を引き起こします。

Sporothrix schenkiiとHistoplasma capsulatumは家畜と人間に影響を与えます。

環境菌学

多くの病原性または日和見菌は、特定の環境、特に手術室やクリニックや病院の集中治療室（ICU）に、いつでも集中する可能性があります。したがって、それらの制御を実行する必要があります。

他の脆弱なスペースは図書館や古い建物で、環境菌の集中によって影響を受ける可能性があります。

環境研究では、サブローデキストロース寒天が菌類の分離に使用されています。

産業菌学

サブローデキストロース寒天は、とりわけ化粧品、食品、飲料、皮革、繊維製品の製造における汚染菌の研究に欠かせません。

植物菌学

植物はまた、真菌によって引き起こされる病気に苦しみ、植物のさまざまな部分に影響を及ぼし、収穫を停止することさえあり、農業に大きな損失をもたらします。

参考文献

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