コアグラーゼ試験は、酵素コアグラーゼの存在を明らかにするために使用される実験室技術です。この酵素は血漿を凝固させる性質を持っています。1903年のローブは、この酵素について最初に説明しました。
この試験はグラム陽性、カタラーゼ陽性球菌に対して行われ、黄色ブドウ球菌株を残りのブドウ球菌と区別することができます。
両方の画像は、コアグラーゼテストが陽性であることを示しています。出典：左の画像：Philippinjl。右の画像：著者MScが撮影した写真。マリエルサ・ギル。
この意味で、テスト陰性のブドウ球菌科のメンバーは、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌と呼ばれることが多い。
黄色ブドウ球菌以外にも、Staphylococcus schleiferi spp coagulans、S。hyicus、S。intermedius、S。delphiniなど、コアグラーゼを産生する菌株があります。
ただし、最初の3つは獣医レベルで臨床的に重要であり、ヒトの感染症の原因物質として発見されることは非常にまれですが、S。デルフィニは海洋環境でのみ発見されます。
さらに、S。hyicusとS. intermediusはマンニトールを発酵せず、S。schleiferi spp coagulansはマルトースまたはトレハロースを発酵しないため、S。aureusはこれらの炭水化物を発酵するため、それらは容易に区別されます。
コアグラーゼ酵素の存在は、菌株の病原性に関連しています。しかし、この理論はバラバラになっており、重大な感染を引き起こす可能性のある他の毒性コアグラーゼ陰性種が観察されています。
基礎
解釈
5-20秒以内の凝集（強い陽性テスト）。
20秒から1分の間に発生するさまざまな凝集（遅延陽性検査）。
1分後のある程度の凝集（疑わしい証拠）。試験を繰り返すか、チューブ法で確認することをお勧めします。
凝集はありません（陰性テスト）。
SSFの結果。テスト結果が自動的に正になる場合、テスト結果は無効になります。
-チューブコアグラーゼテスト
材料
-無菌試験管
-プラズマ
-37℃のメアリーのバス
技術
滅菌ピペットを使用して、0.5 mlの血漿を12 x 75試験管にピペットで入れます。2〜4個の純粋なコロニーをプラチナループにロードして、固体培養から18〜24時間研究し、血漿に溶解します。 37℃で4時間注意深く混合してインキュベートします。
最初の1時間で、振とうせずにチューブを調べ、静かに傾けます。それでも血栓が見られない場合は、4時間経過するまで30分ごとに血栓が観察され続けます。4時間後もまだ陰性である場合は、最大24時間放置できますが、室温で放置できます。結果を観察して報告します。
経験に基づいて、一部の微生物学者は、テストを実行するために液体培地で18時間培養した500 µlの細菌懸濁液を使用することを推奨しています。
特に血液バンクから得られたヒト血漿が使用されている場合は、固形培地からコロニーを乳化する場合よりも速くて信頼性の高い結果が得られるようです。
ブロスからの菌株の使用は、コアグラーゼの作用を阻害する可能性がある血漿中のヒト抗ブドウ球菌抗体の存在の可能性を希釈するのに役立ちます。
解釈
液体のすべてを含む血餅（完全な凝固）または残りの液体に何もない血餅（部分的な凝固）が見られる場合、それは陽性検査と見なされます。
血餅が形成されない場合、つまり、懸濁液が均質のままである場合、テストは陰性です。
-フィブリノーゲンを用いたコアグラーゼテスト
フィブリノーゲンは血漿と同じように使用され、スライドとチューブの両方のテストに使用されます。プラズマについて説明したように進め、同じように解釈します。
使用する
黄色ブドウ球菌をコアグラーゼ陰性ブドウ球菌と区別するために使用されます。
QA
陽性対照として使用できる黄色ブドウ球菌株の新鮮な培養物を用意してください。S. epidermidis株も陰性対照として利用できます。
制限事項
黄色ブドウ球菌は血餅を溶解するフィブリノライシンを産生するので、陽性検査は24時間のインキュベーションに残すべきではありません。
-信頼性の高いテストのために、新鮮なまたは新しく再構成された血漿を使用する必要があります。また、新鮮な細菌培養を使用することも重要です（18〜24時間）。これにより、偽陰性を回避できます。
-検査は、陰性対照および陽性対照と一緒に実施する必要があります。
-一部の固形培地はコアグラーゼテストを妨害する可能性があります。塩味のあるマンニトール寒天からのコロニーの使用は推奨されません。
-クエン酸血漿を使用する場合、偽陽性を避けるために、血漿1 mlあたり5ユニットのヘパリンを配置することをお勧めします。これは、黄色ブドウ球菌以外のいくつかの微生物がクエン酸塩を分解し、血漿を凝固させる可能性があるためです。この場合、グラムとカタラーゼのテストを行うことをお勧めします。
-高濃度のフィブリノライシンを生成し、新しく形成された血餅を迅速に希釈する黄色ブドウ球菌の菌株があるため、チューブテストでは、30分ごとに反応を監視することが重要です。偽陰性を避けます。
-テストを監視するときは、チューブを急に振らないようにしてください。これは、後で復元されない血餅形成の始まりを破壊し、偽陰性を引き起こす可能性があります。
参考文献
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Mac Faddin J（2003）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的検査。第三版 社説パンアメリカーナ。ブエノスアイレス。アルゼンチン。
- プロラボ研究所。ウサギは血漿を凝固させます。で利用可能：pro-lab.com
- 「コアグラーゼ」ウィキペディア、フリー百科事典。2019年2月12日、04：23 UTC。2019年4月22日、15：50 wikipedia.org。