ネガティブ染色は、いくつかの微生物におけるカプセルの存在強調するために特別な着色の方法で 、 臨床検体または純粋な培養物から、主としてストレプトコッカス・ニューモニエ、クレブシエラ・ニューモニエ及びクリプトコッカスneoformans-を。
ネガティブ染色を適用するために一般的に使用される直接的なサンプルは、脳脊髄液です。この手法は、髄膜炎、特にクリプトコッカスネオフォルマンスの推定診断の迅速な代替法です。
A.インドインクで染色された歯石。B。クリプトコッカスネオフォルマンスヴァーガッティは、ニグロシンを使用して自然界で発生するため、弱くカプセル化されています。C.クリプトコッカスネオフォルマンスヴァルガッティニグロシンを使用した寄生型で見られる厚いカプセル。D. Cryptococcus neoformansとインドのインクをわずかに希釈したもの。Gisell Quinde、ウィキメディアコモンズ/ CDC、ウィキメディアコモンズ経由/写真提供：コンテンツプロバイダー：CDC /博士 Leanor Haley、ウィキメディア・コモンズ経由
同様に、この染色剤は、一般的には痰および無菌液体、ならびに若い純粋な培養物から得られた株に適用できます。この手法では、ニグロシンまたはインディアインクを使用して実行します。したがって、優れた診断価値の情報を短時間で提供するのは、適用する非常にシンプルで安価な方法です。
この意味で、どの研究室でもこの染色を行うことができます。もちろん、研究室には、分離または出芽したクリプトコッカスネオフォルマンス酵母を認識し、それらをサンプルが示す可能性のある白血球や人工物と区別できる有能な人材が必要です。
基礎
ニグロシンとインドのインクは同じように機能します。したがって、2つの物質のどちらも同じ意味で使用できます。
この手法は、他の染色手法とは逆の働きをするため、ネガティブ染色と呼ばれます。この中で、染色されずに残っているのは、求められている構造、または見たい構造です。つまり、微生物です。
したがって、染色は塗抹標本の底を暗い色に染色することに基づいています。このシナリオでは、カプセル化された構造は明るい色または無色で目立ちます。
一般に、酵母は屈折性で、カプセルに対応する透明なハローに囲まれています。これは、墨汁とニグロシンが、生きている微生物のカプセルを構成する多糖類に浸透できない物質であるために発生します。
白血球や赤血球など、直接サンプルに存在する可能性のある他の構造が浸透しないことは注目に値します。
ただし、微生物が死んでいる場合、染料が微生物の内部に浸透する可能性があるため、この染色は微生物の生存率を評価するのにも役立ちます。
技術
材料
ニグロシン
ニグロシンは、その名前が黒い色に由来しています。これは、ニトロベンジン、アニリン、塩酸アニリンなどの有機化合物の混合物を、上記の反応で触媒（鉄または銅）を使用して加熱することにより得られる合成物質です。
墨汁
墨は、主にアジア人が筆記、芸術作品の制作、単色絵画に使用する物質です。中国の文化でとても人気があります。
これは、低樹脂の木を燃やした製品である微粉炭と混合したイカのインクから得られます。
炭化水素（植物油）の焼却からのすすから、炭素粒子の沈殿を回避するために適切な一貫性を与えるタンパク質ゼラチンと一緒にそれを調製することも可能です。
サンプリング仕様
-それは断食を必要としません。
-CSF、痰、または無菌の液体サンプルには、少なくとも1 mlの容量が含まれている必要があり、室温で直ちに検査室に移す必要があります。
-CSFと滅菌液のサンプルは専門の医師が採取する必要があります。
-また、前述の病原体に関連する疑わしい株の純粋な培養である場合もあります。
直接サンプルを使用した手法の実行
-サンプルを遠心分離する必要があります。その後、上澄みを廃棄し、沈殿物を採取します。
-遠心分離された材料（沈殿物）の一滴とインディアインクまたはニグロシンの一滴をきれいなスライドに置きます。
-よく混ぜてカバースリップシートで覆い、滴が縁を越えずに薄いフィルムとして広がるようにします。
-その後、プレパレーションを顕微鏡にマウントします。
-準備が暗すぎる場合は、水で薄めることができます。
培養菌株を用いた技術の実行
-非常に小さな部分が、播種針を使用して若い培養から採取され、以前にきれいなスライドに置かれたインドのインクの滴に溶解されます。
-カバースリップが上に配置されます。
-顕微鏡で10倍、次に40倍で観察されます。
コロニーの一部を蒸留水に溶かし、そこから一滴を取り、インディアインクと混ぜることもできます。このように、準備はそれほど厚くなく、構造を分離して観察することができます。人混みがあるとよく見えません。
別の方法論は次のとおりです。
-スライドの片端に懸濁培養液を1滴置きます。
-同じ端に一滴のニグロシンを置き、混ぜます。
-別のスライドの助けを借りて、血液塗抹標本を作るようにサンプルを広げます。
-乾燥させ、顕微鏡下で観察します。
顕微鏡観察
フィールドの広い視野を得るには、最初に10倍の対物レンズに焦点を合わせる必要があります。その後、明確なスペースがあるかどうかを調べる必要があります。ある場合は、40Xにフォーカスして詳細を確認します。
利点
-実行は簡単です。
-それは安価な技術です。
-この方法では、塗抹標本を熱や薬品で固定する必要はありません。したがって、微生物は歪みなく観察されます。
-新鮮な製剤は乾燥する必要がないため、すぐに観察でき、結果がすぐに出ます。
不利益
組み立てたら、新鮮な調製物をすぐに観察する必要があります。それらが乾燥することを許される場合、それらを観察することはもはや不可能であり、新しいものを設置しなければならない。
インドのインクによる組織染色
インドのインクが果たすことができるもう一つの機能は病理学の実験室です。これは、腫瘍の切除マージンをマークするために、外科的に抽出された組織サンプルに適用されます。
印を付けた組織に酢酸を噴霧します。これは媒染剤として機能し、組織が生検の準備のための日常的な処理を受けたときにインクが漏れることを防ぎます。
手順は、ティッシュをアルコールとキシレンに浸し、次にパラフィンワックスに浸します。このマーキングは、組織を観察するときに病理学者を導き、外科的切除マージンまたは他の関心のあるポイントがどこにあるかを示します。
参考文献
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