チョコレート寒天：基本、用途、準備 - 生物学 - 2025

チョコレート寒天固体培地で、濃縮された、非 - 選択的および非 - 差動。どんなタイプのバクテリアでも育つことができますが、それは主に栄養学的観点から要求の厳しい微生物の分離に使用されます。

このため、特にCSFや関節液など、通常は無菌であるサンプルの播種では、その有用性が高まります。それはまた、多菌サンプルを播種するために選択された手段に含まれていますが、これらの場合、付随するフローラを阻害する抗生物質を追加する必要があります。

細菌増殖を伴うチョコレート寒天

このミディアムはチョコレートに非常によく似た特徴的な茶色をしているため、その名前が付けられています。準備は血液寒天のそれと非常に似ています、この場合にのみ、赤血球が分解するために血液を加熱する必要があります。

血液寒天のように、簡単に汚染されるため、その準備は非常に繊細です。このため、多くの研究所は、品質を保証する商業企業がすでに準備しているこの媒体を入手することを好みます。

基礎

この培地は、栄養豊富な寒天ベースと加熱された血液で構成されています。赤血球の溶血は、Haemophilus属などのいくつかの微生物の成長に必要な第X因子（ヘミン）および第V因子（NAD）を提供します。また、ナイセリア属の分離にも非常に役立ちます。

血液寒天と同様に、必要に応じて異なる培地をベース寒天として使用できます。使用される培地には、脳心臓注入とトリプチカーゼ大豆寒天がありますが、最も推奨されるのは、コロンビア寒天、ミュラーヒントン、GC寒天、セイヤーマーティン寒天です。

チョコレート寒天のいくつかの変形には、IsovitalexまたはPolivitexと呼ばれる市販の強化サプリメントが含まれます。

これらのサプリメントには、ビタミンB ₁₂、L-グルタミン、アデニン、塩酸グアニン、p-アミノ安息香酸、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）、ピロリン酸チアミン、硝酸第二鉄、塩酸チアミン、システイン塩酸塩、L-シスチン、およびグルコースが含まれています。

チョコレート寒天は血液寒天よりも濃縮されているが、溶血パターンを観察できないことに注意することが重要です。

用途

出典：pixnio.com。著者：
ピート・サイデル、アマンダ・ムーア、モンタナ州、トッド・パーカー、博士、オードラ・マーシュ、USCDCP

コロンビア寒天で作ったチョコレート寒天

この培地には、カゼインと心臓の膵臓消化物、肉の消化消化物、塩化ナトリウム、寒天、酵母エキス、コーンスターチが含まれています。ビタミン、ミネラル、必須アミノ酸も豊富です。

この加熱された血液ベースは、ナイセリア属の細菌の分離に理想的です。一方、ブルセラのサプリメントを培地に追加すると、上記微生物を分離することができる。結果は馬の血を使用して改善されます。

GCベース寒天で作ったチョコレート寒天（淋菌用）

この培地には、ペプトン、コーンスターチ、一塩基性および二塩基性緩衝液、塩化ナトリウム、および寒天が含まれています。

ほとんどの商業的に準備されたチョコレート寒天のプレゼンテーションはこのベースに付属しており、加熱された血液は含まれていませんが、ヘミンと成長因子、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、第V因子、グルコースの化学サプリメントの合成混合物が含まれています。

ミュラーヒントン寒天で調製したチョコレート寒天

5％加熱羊血液を使用して、Streptococcus pneumoniaeなどの扱いにくい微生物の抗菌薬感受性をテストするために使用されます。

ナイセリアとヘモフィルスの一次分離にも使用されますが、ヘモフィルスの分離の特定のケースでは、第X因子と第V因子の豊富な供給源であるため、ウマ血液の使用が推奨されます。

一方、播種するサンプルが非滅菌エリアからのものである場合は、そのエリアの通常のフローラを抑制するために抗生物質を追加することをお勧めします。

ヘモフィルス属の細菌の存在が疑われる呼吸サンプルの例では、バシトラシンを使用してブドウ球菌、ミクロコッカス、連鎖球菌、および腐生性ナイセリアの増殖を阻害します。

Haemophilus ducreyiが疑われる性器下顎のサンプルの場合、次のように調製されたチョコレート寒天がうまく使用されています。 µg / mlバンコマイシン。

セイヤーマーティン寒天で調製したチョコレート寒天

この培地は、Neisseria gonorrhoeaeの分離に特別です。付随するフローラを抑制するために抗生物質を含んでいる必要があります。ラムの血が使われます。

準備

使用するベース寒天の準備の表示が表示されます。それらは脱水された媒体の容器の後ろにあります。彼らは一般に、培養液1リットルを調製するためにどれだけの重量が必要かを説明します。

必要な正確な量は実験室で準備することができます、それは1リットルより多くても少なくても構いません。

計算

3つのルールを使用して、目的の容量を準備するために計量する量を計算します。例：

1リットルのために40グラムの重さを量る必要があり、実験室が800 mlを必要とするならば、それは言われています：

1000 ml ----------- 40グラム

800 ml -----------– X

式は次のようになります。

X = 32 gr（800 mlの重量を量る）。

計量して溶解する

必要な量を計量し、水を入れたフラスコに入れる。

適度な熱で加熱し、脱水した培地が完全に溶解するまで回転運動で穏やかに混ぜ、1分間沸騰させます。

殺菌する

フラスコをオートクレーブに入れ、培地を121°Cで20分間滅菌します。

血液凝集

オートクレーブを離れるとき、培地の温度が約56〜70°Cになるまで静置して、血液を入れ、培地が褐色になるまで混合します。

あなたがサプリメントを追加している場合、これはそれを行う時です。続いて、各滅菌ペトリ皿に20 mlを混ぜて提供します。

手順全体は、層流フード内またはブンゼンバーナーの周りで行う必要があります。

彼らが固まるまで立ち、冷蔵庫で逆さまに保管します。

血を使わずにチョコレート寒天を作るもう一つの方法

上記のように基本培地を調製し、市販の脱水ヘモグロビンをオートクレーブで溶解・滅菌する。

両方の溶液を50°Cに冷却し、結合してサプリメントを追加します。無菌条件下で混合してから、滅菌ペトリ皿に入れます。

QA

血液を指定された温度に置くことが重要です。これは、赤血球を溶解し、同時に熱に敏感な第V因子を維持するのが理想的であるためです。

寒天の表面に気泡が残ってはいけません。100プレートの各バッチから、1枚または2枚のプレートを37°Cのオーブンで24時間インキュベートして、無菌性を確認する必要があります。

最良の結果を得るには、準備後すぐにチョコレート寒天を使用する必要があります。

対照細菌株は、臨床的に重要な主要な菌の増殖に対する新鮮培地の有効性を評価するために、実験室に保管する必要があります。

参考文献

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5. ウィキペディアの貢献者。チョコレート寒天。ウィキペディア、フリー百科事典。2018年12月17日19:54 UTC。en.wikipedia.orgで入手できます。