CLED寒天（シスチンラクトース電解質欠乏）は、尿路感染症の診断に用いられる固体培地の差、です。培地の組成は尿中病原菌の良好な増殖のために設計されており、コロニー形成単位（CFU）の定量化に理想的です。
グラム陰性およびグラム陽性微生物がその中で増殖する可能性があるため、CLED培地は非選択的です。しかし、ほとんどのUTIは1種類の微生物によってのみ引き起こされるため、これは問題ではありません。
CLED寒天
多菌感染症の場合、2つまたは3つの異なる細菌が得られますが、非常にまれで、ほとんどの場合、サンプルが汚染されています。
この培地で増殖できるグラム陰性菌の中には、腸内細菌科に属する桿菌および他の腸内桿菌があり、尿サンプルで最も頻繁に分離される尿路病原菌は、大腸菌、肺炎桿菌、プロテウスミラビリス、モルガネラモルガニ、とりわけ緑膿菌。
同様に、この培地で増殖できるグラム陽性菌の中には、黄色ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌、エンテロコッカスフェカリス、ストレプトコッカスアガラクティエ、コリネバクテリウム種、ラクトバシラス種、さらにはカンジダアルビカンス複合体などの酵母も増殖できます。
しかしながら、培地の化学組成のために、それは、とりわけ、ナイセリア・ゴノレー、ガードネレラ・ヴァギナリスなどのいくつかの要求の高い泌尿生殖器病原菌の増殖を許さない。
CLED寒天根拠
CLED培地は、エネルギー源として肉抽出物、カゼインの膵臓加水分解物およびゼラチンの加水分解物を持っています。それらは、要求の厳しくない細菌の発生のための栄養素を提供します。
また、サイズが小さいことで区別できる、大腸菌群の成長を可能にするアミノ酸であるシスチンも含まれています。
同様に、発酵可能な炭水化物としてラクトースを含んでいます。このため、この培地は差別的です。発酵菌と非乳糖発酵を区別することができます。
発酵細菌は酸の生成によって培地のpHを変化させ、黄色のコロニーを発達させますが、非発酵細菌は培地に変化を起こさないため、元の寒天の色である緑色になります。
発酵反応は、この培地ではブロモチモールブルーであるpH指示薬の存在により明らかにされています。
一方、培地の電解質濃度が低いと、スワーミング効果と呼ばれるプロテウス属の典型的な侵襲的成長が阻害されます。これは、プロテウス属が存在するかどうかを含め、CFUのカウントを可能にするため、他のメディアよりも優れています。
しかしながら、低濃度の電解質は、シゲラ属のいくつかの種の成長を阻害し、これは他の培地と比較して不利です。
CLED寒天の根拠（Bevis）
元の構成に酸性フクシン（アンドラーデの指標）を組み込んだBevisによって作られたこの媒体のバリアントまたは変更があります。ブロモチモールブルーと連動して、発酵と非発酵細菌を区別します。
従来の培地と改変培地の違いは、コロニーが呈する色です。乳糖発酵菌の場合、コロニーはピンクまたは赤のハローで赤みがかったオレンジ色に変わりますが、発酵していないものは青みがかった灰色になります。
用途
CLED寒天は、尿サンプルの播種にのみ使用されます。この培地の使用は、ヨーロッパの研究室では特に頻繁に行われますが、アメリカではあまり使用されていません。
信頼できる結果を得るには、サンプルの収集が特定のパラメーターを満たす必要があります。
- サンプリング前に抗生物質を服用していない。
- 侵襲的な方法でサンプルを採取できない場合は、尿がより濃縮されているため、朝一番に尿を採取することをお勧めします。
- サンプルを取る前に性器をよく洗ってください。
- 排尿の最初の流れを捨て、次に容器を置きます。
- ラベルの付いた無菌容器に25〜30 mlの尿を集めます。
- 氷に囲まれた実験室にすぐに連れて行ってください。
- 発行から2時間以内に処理するか、最大4時間、4°Cで冷蔵する必要があります。
尿サンプルの播種
尿サンプルは1:50に希釈する必要があります。
希釈するには、患者の尿0.5 mlを入れ、滅菌生理溶液24.5 mlで希釈します。
希釈した尿と表面の広がりの0.1 mlをCLED培地のdrigalskiスパチュラで測定します。これはコロニーを数えるための最良の播種方法です。結果はCFU / mlで表現する必要があるため、尿サンプルで使用されます。
得られたコロニーを定量化するには、次の手順に従います。プレート上のコロニーを数え、10を掛け、次に50を掛けます。これにより、CFUの量/尿のmlが得られます。
解釈
100,000 CFU / mlを超えるカウント-尿路感染症を示します
1000 CFU / ml未満にカウント-感染なし
1000〜10,000 CFU / mlの間でカウント-疑わしい、起こりうる汚染、サンプリングの繰り返し。
ID
CLED寒天上で成長したコロニーはグラムを持っている必要があり、微生物の形態特性に応じて、特定の継代培養が行われます。
たとえば、それがグラム陰性桿菌である場合、ラクトースの発酵の有無が確認されているマッコンキー寒天に播種されます。また、オキシダーゼテストを行うために栄養寒天を添付しています。
グラムがグラム陽性球菌を明らかにする場合、それは塩味のあるマンニトール寒天および栄養寒天上で継代培養することができます。後者では、カタラーゼ試験が行われます。最後に、酵母が観察された場合は、サブロー寒天に播種されます。
多くの研究室ではCLED培地の使用を避け、尿サンプルの播種には血液寒天、マッコンキー、栄養寒天のみを使用することを好んでいます。
準備
1リットルの蒸留水が入ったフラスコに、36.2 gのCLED寒天粉末を溶かします。5分間放置した後、再懸濁した寒天を加熱し、絶えず混合して1分間沸騰させます。
その後、オートクレーブで121°Cで15分間滅菌します。時間の最後に、それはオートクレーブから取り出され、45°Cの温度まで冷却されます。続いて、15〜20 mlを各滅菌ペトリ皿に入れます。
プレートの提供手順は、汚染を避けるために、層流フード内またはブンゼンバーナーの前で実行する必要があります。
提供されたプレートは固化するために放置され、逆さのラックに配置され、使用するまで冷蔵庫（2-8°C）に保管されます。
調製した培地の最終pHは7.3±0.2です。
参考文献
- 尿路感染症の微生物診断に関する推奨事項。子。インフェクトール。2001; 18（1）：57-63。入手可能：scielo.org。
- Panchi J.膀胱カテーテル検査を受けている入院患者で尿路感染症を引き起こす微生物の同定。2016.臨床研究所で学士号を取得するための学部生の仕事。アンバト工科大学。エクアドル。
- ブリタニア研究所。CLEDミディアム。入手可能：britanialab.com。
- Renylab Laboratories。使用説明書、CLED寒天。2013入手可能：es.renylab.ind.br。
- Cultimed Laboratories。微生物学の基本的なマニュアル。ictsl.netで入手できます。
- MuñozP、Cercenado E、Rodriguez-CréixemsM、DíazMD、Vicente T、BouzaE。尿培養ルーチンのCLED寒天オプション。将来の比較評価。微生物感染症の診断 1992; 15（4）：287-90。
- GarcíaP、Paredes F、Fernándezdel Barrio M.（1994）。実用的な臨床微生物学。カディス大学、第2版。UCA Publications Service。