標準カウント寒天は他の食品の中で飲料水、排水、乳製品飲料の試料中の好気性微生物負荷の存在の定量化のために設計された固体、非選択培地、です。この培地は英語版プレート寒天の頭字語でPCA寒天とも呼ばれます。1953年にブフビンダー、バリス、ゴールドスタインによって作成されました。
標準的なカウント寒天培地は、酵母エキス、トリプテイン、グルコース、寒天、および蒸留水で構成されています。この処方には、現在の好気性微生物負荷の発生を可能にする基本的な栄養素が含まれています。
標準的な寒天カウントでCFUをカウントするための10進希釈。ソース：クエンティンガイスマン
培地には阻害剤が含まれていないため、バクテリアは制限なく増殖でき、一般的なコロニーのカウントに理想的です。ただし、プレート定量化手法では、存在するすべての細菌が検出されるわけではなく、播種された標準カウント寒天がさらされる環境条件下で増殖可能な細菌のみが検出されます。
この意味で、プレート定量化手法は一般に、好気性中温性タイプの細菌、つまり25〜40°Cの温度で増殖し、最適な増殖温度が37°Cの細菌の量を決定しようとします。 。
この細菌群は非常に重要です。人間の病原菌のほとんどはそこで発見されているからです。
食品に存在する好冷菌の量を定量化することが興味深い場合があることに注意してください。これらの細菌は、低温（<20°C）で増殖し、冷蔵庫内でも食品の分解が速くなる細菌です。
同様に、50°Cから80°C以上の範囲で発生する好熱性細菌は、缶詰食品などの特定の種類の食品では重要です。
微生物の定量は、サンプルのグラムまたはミリリットルあたりのコロニー形成単位（CFU）で表されます。
基礎
標準的なカウント培地は、酵母エキス、トリプテイン、およびグルコースが良好な微生物の成長に必要な栄養素を提供するように、堅苦しくない好気性細菌の成功した成長を可能にするように設計されています。
一方、培地は薄い色と透明な外観を持っているため、ディープシード法（プレートに注ぐ）によって開発されたコロニーの視覚化に最適です。
ドリガルスキーへら表面播種法によるコロニーカウントも可能です。
微生物負荷が高い場合、CFUをカウントできるように、試験サンプルの10進希釈を行う必要があります。
この培地は、好気性中温菌の数のために米国公衆衛生協会（APHA）によって推奨されていることに注意してください。
準備
脱水した培地23.5 gを計量し、1リットルの蒸留水に溶かします。完全に溶解させるには、沸騰するまで頻繁に攪拌して加熱する必要があります。その後の手順は、使用するシード手法によって異なります。
注ぎプレート技術について
12〜15 mlを試験管に分注して分配します。その後、オートクレーブで121°Cで15分間滅菌します。ブロックの形で垂直に固化することができます。使用するまで冷蔵庫に保管してください。
使用するときはプラグを溶かしてください。溶解したら、サンプルを準備している間、44〜47°Cのウォーターバスで保管します。
表面播種用
121°Cのオートクレーブで培地を滅菌し、滅菌ペトリ皿に20 mlを分配します。固化させ、転倒させ、使用するまで冷蔵庫に保管します。
使用前にプレートをテンパーします。培地のpHは7.0±0.2でなければなりません。
使用する
標準カウント寒天培地は、水および食品の微生物学的分析の際に好気性中温性のカウント技術で使用されます。好気性中温菌の数は、調査中のサンプルの衛生品質を決定するため、必要です。
この手法を（この培地を使用して）適用すると、分離されたコロニーを肉眼で視覚化して定量化できます。
プレート流し込み技術（深度播種）
-処理する
この手法は次の要素で構成されています。
1）存在する細菌を再分布させるためにサンプルを均質化します。
2）最初の懸濁液は、90 mlの希釈液（10 -1）中の10 grまたは10 mlのサンプルの比率に従って、滅菌ボトルまたはバッグで作成されます。
3）最初の懸濁液から、サンプルの種類に応じて適切な10進数の希釈が行われます。例：（10 -2、10 -3、10 -4）。ペプトン水またはリン酸緩衝液で希釈します。
これを行うには、最初の懸濁液1 mlを取り、それを希釈液9 mlに入れ、必要に応じて希釈を続け、10 -2希釈液1 mlを加えます。
4）各希釈液を1 ml取り、空の滅菌ペトリ皿に入れます。
5）各プレートに、前もって溶かして44〜47°Cで静置した標準カウント寒天12〜15 mlを加えます。
6）プレートを静かに回転させて、サンプルを寒天に沿って均一に分散させ、固化させます。
7）プレートを逆さにして、好気性生物において37°Cで24〜48時間インキュベートします。
8）時間の終わりに、プレートを検査し、それを可能にする希釈でコロニーを数える。30から300 CFUのプレートがカウント用に選択されます。
カウントは手動で行うことも、コロニーカウンター機器を使用することもできます。
サンプル1 mlあたりの許容値は、規制の対象となる規制によって、国によって異なる場合があります。
-UFCの計算
一般的な計算は、次の式を使用して行われます。
CFUの定量化の一般的な計算式。出典：全米薬局、食品および医療技術（ANMAT）。食品の微生物学的分析、公式の分析方法論、指標微生物。2014 Volume3。入手可能な場所：anmat.gov.ar
結果を1桁または2桁で表現し、適切な底10を掛けます。例：結果が16,545の場合、3桁目を基にして17,000に丸められ、次のように表されます：1.7 x 10 4。ここで、結果が16,436の場合、16,000に丸めて、1.6 x 10 4を表現します。
表面播種技術
-処理する
直接サンプルを0.1 mlの-Inocularそれが液体である場合、初期サスペンション10 -1又は連続希釈10 -2、10 -3など、プレートの寒天標準カウントの中心です。
-DrigalskiへらまたはL字型のガラス棒でサンプルを均等に分散させ、10分間置きます。
-プレートを反転させ、37℃で24〜48時間好気的にインキュベートします。
-コロニーのカウントに進み、20〜250 CFUの範囲にあるプレートを選択します。
-UFCの計算
計算には、逆の希釈係数が適用されます。数値は2桁の有効数字に丸められ（3桁目で丸め）、10の累乗で表されます。たとえば、希釈なしのサンプルで224 CFUがカウントされた場合（10 -1）、22 x 10 1 CFUが報告されます、ただし図が225の場合、23 x 10 1 CFUが報告されます。
これで、10 -3希釈で199 CFUがカウントされる場合、20 x 10 4 CFUが報告されますが、同じ希釈で153 CFUがカウントされる場合、15 x 10 4 CFUが報告されます。
QA
標準カウント培地は、Escherichia coli ATCC 8739、Staphylococcus aureus ATCC 6538、Bacillus subtilis ATCC 6633、Lactobacillus fermentum ATCC 9338、Staphylococcus epidermidis ATCC 12228、Shigella flexneri ATCC 12022などの既知の認定株を使用して評価できます。
培養液が最適な条件にある場合、L。fermentumを除いて、すべてのケースで満足のいく成長が期待されます。
培地の無菌性を評価するには、準備した各バッチの1枚または2枚のプレート（接種なし）を、好気性生物内で37°Cで24時間インキュベートする必要があります。この時間の後、成長や色の変化は培地に観察されません。
制限事項
-寒天を2回以上溶かさないでください。
-準備した培地は、冷蔵庫に保存し、光から保護する限り、最長3か月間持続できます。
-この培地は、要求の厳しいまたは嫌気性微生物には適していません。
参考文献
- 医薬品、食品および医療技術の全米管理局（ANMAT）。食品の微生物学的分析、公式の分析方法論、指標微生物。2014 Volume3。入手可能な場所：anmat.gov.ar
- Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo、SAプレートカウント寒天。2009.利用可能：http://f-soria.es
- Conda Pronadisa Laboratories。APHAおよびISO 4833に準拠した標準メソッド寒天（PCA）。condalab.comで入手可能
- ブリタニア研究所。寒天プレート数。2015.次で入手可能：britanialab.com
- カマチョA、ジャイルズM、オルテゴンA、パラオM、セラーノB、ベラスケスO.2009。食品の微生物学的分析の手法。第二版化学部、UNAM。メキシコ。で利用可能：depa.fquim.unam