ミューラー・ヒントン寒天培地は、固体栄養培地は、肉注入、ペプトン酸カゼイン、澱粉、寒天および蒸留水で構成され、選択的ではありません。この培地は、ほとんどの急速に成長しているバクテリアの優れた微生物の成長を可能にします。
もともとは、John HowardMüellerとJane Hintonによって、Neisseria gonorrhoeaeやNeisseria meningitidisなどの栄養要求の高い細菌を分離するために作成されました。しかし、その特性により、抗生物質に対する感受性の研究に理想的であり、信頼性と再現性のある結果が得られます。
抗生物質（ミュラーヒントン寒天）。出典：en.wikipediaのDr Graham Beards
したがって、ミュラーヒントン寒天培地は、カービィディスク拡散法およびバウアー。
基礎
非選択的栄養培地であるため、ほとんどの病原菌の増殖に優れています。
一方、その単純な組成は物質をその上に容易に拡散させ、ディスク拡散法による感受性試験の本質的な特徴です。
その特徴のもう一つは、それがスルホンアミド、トリメトプリム、テトラサイクリンを効果的に評価することを可能にする阻害剤を少量含んでいることです。
ただし、メディアは、次のような適切な機能を確保するために特定の条件を満たす必要があることに注意してください。
pH、寒天の深さ、およびチミン、チミジン、Ca ++、Mg ++およびZn ++の適切な濃度の調整。
また、方法論は標準化されているため、次のようなすべてのパラメーターを満たす必要があることも知っておく必要があります。
接種材料の濃度、抗生物質ディスクの濃度と保存、寒天上への適切な数のディスクの配置、ディスク間の距離、特定の抗生物質の戦略的配置、雰囲気、温度、時間インキュベーション。
準備
37 gの脱水ミュラーヒントン培地を量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。溶解を助けるために攪拌しながら培地を加熱します。1分間沸騰させます。
121°Cで15分間滅菌するオートクレーブ。オートクレーブから取り出すときは、フラスコを50°Cのウォーターバスに入れて冷却します。25〜30 mlを滅菌済みの直径10 cmのペトリ皿に注ぎます。
プレートの平均厚さは4 mm（理想的）でなければならず、3〜5 mmの範囲が許容されます。
ミュラーヒントン寒天をベースにして血液寒天を調製したい場合は、プレートに提供する前に、5％の無菌で脱線維化した子羊の血液を注ぎます。
培地の最終pHは7.2から7.4の間でなければなりません。
投資し、使用するまで冷蔵庫に保管してください。使用前にプレートを室温に戻してください。
用意したメディウムの色はライトベージュです。
用途
ほとんどの急成長している非要求性病原体の抗生物質感受性テストまたは抗生物質感受性テストを実行するために使用されます。
寒天に血液が補充されている場合は、ストレプトコッカスニューモニア、ヘモフィルス属、髄膜炎菌などの要求の厳しい微生物の抗生物質を測定するために使用されます。Legionella pneumophilaの分離にも使用されています。
抗生物質のテクニック
アンチビオグラムを実行する前に、1.5 x 10 8細胞に相当する細菌溶液を準備する必要があります。
このために、純粋な培養の3〜4コロニーを取り、大豆トリプチカーゼブロスまたはミュラーヒントンブロスに懸濁し、2〜6時間インキュベートし、濃度を無菌食塩水で調整し、それをMac Farland標準と比較して0.5％。
微生物を必要とする場合は、コロニーを0.5％Mac Farlandの濃度まで直接浮遊させることができます。続いて、ミュラーヒントンプレートに、準備した細菌溶液を染み込ませた綿棒を播種します。
これを行うには、綿棒を溶液に浸し、チューブの壁を押して余分な液体を除去します。直後に、綿棒を表面全体に渡して、手つかずの場所を残さずに、プレートを少し回転させて、再度播種します。この操作がさらに2回繰り返されます。
10分間放置してから、抗生物質ディスクを滅菌ピンセットで挿入し、24 mmの隙間を空けます。各ディスクを寒天の上に置いた後、ピンセットで各ディスクを軽く押し、しっかりと接着することを確認します。
プロセスが終了したら、プレートを裏返し、好気性生物で35〜37°Cで16〜18時間インキュベートします。それが要求の厳しい微生物である場合、それは微好気症に値するかもしれません、そして、抗生物質がオキサシリンディスクを含んでいるならば、それは24時間後に読まれるべきです。
定規を使用して、各ハローの直径を測定します。結果はmm単位で記録する必要があります。その後、得られた値は、現在のCLSIマニュアルで公開されているカットオフポイントの表と関連付けられます。
阻害ハローの測定。出典：USCDCP、Pixnio.com
場合に応じて、敏感（S）、中級（I）、または耐性（R）として報告してください。
抗生物質は、分離された微生物とそれが生み出す感染のタイプに従って選択されます。
時々、抗生物質の戦略的配置を念頭に置いて、耐性の表現型パターンを明らかにする必要があります。
ミューラーヒントン寒天培地への戦略的なディスク配置
腸内細菌の場合、クラブラン酸ディスクは第3世代および第4世代のセファロスポリンに対して配置する必要があります。卵形の広がりは、その株が拡張スペクトルβ-ラクタマーゼ（ESBL）の生産者であることを示しています。これは、患者がセファロスポリンで治療されるべきではないことを意味します。
大腸菌株における拡張スペクトルβ-ラクタマーゼ（ESBL）産生の表現型の発現。出典：著者MScが撮影した写真。マリエルサギル
ブドウ球菌では、エリスロマイシンまたはアジスロマイシンディスクをクリンダマイシンディスクの前に配置することが重要です（D検定）。
エリスロマイシンの耐性ハローとクリンダマイシンのハローの平坦化は、株が株誘導性クリンダマイシン耐性（ICR）を持っていることを示します。これは、クリンダマイシン治療が効果的でないことを意味します。
腸内細菌科およびいくつかの非発酵グラム陰性桿菌の誘導性AMP C株を検索するには、27ミリの距離で、タゾバクタンのセフタジジム、セフォキシチン、またはピペラシリンディスクをイミペネムディスクに向けます。
イミペネムに面しているディスクの1つにある平らなハローは、誘導可能なAMP Cの存在を示しています。
構成的C-AMPの検索では、500 µgのクロキサシリンディスクを、25 mmの距離でセフタジジム（30 µg）およびセフォタキシム（30 µg）に直面させます。セファロスポリンのいずれかで広がったハローは陽性を示します。
クロキサシリンディスクは、18 mmの距離でフェニルホウ酸（400 µg）をしみ込ませたWhatman No. 6ろ紙の9 mmディスクで置き換えることもできます。それは前のものと同じように解釈されます。
最後に、特に緑膿菌におけるメタロベータラクタマーゼの産生を調査するために、10μlのエチレンジアミン四酢酸（EDTA 750μg）とチオグリコール酸（SMA 300μg）を含浸させたディスクを使用し、イミペネムとメロペネムのディスクに直面しました。 15mmの距離で。
EDTA / SMAディスクに向かってイミペネムまたはメロペネムのハローが広がる場合、テストは陽性です。この結果は、修正ホッジ検定で確認する必要があります。
この方法は、ミュラーヒントンプレートに大腸菌ATCC 25922株を接種することからなります。イミペネムディスクをプレートの中央に配置し、その後、緑膿菌の疑いがある菌株でディスクから周囲にストリークを作成します。プレートごとに最大4つの株をテストできます。
ストレッチマークの周りにイミペネムハローの歪みのゾーンがある場合、テストは陽性になります。
誤った結果の原因
-保存が不十分な抗生物質ディスクは、偽の耐性を生み出すことがあります。たとえば、オキサシリンディスクは温度変化に対して非常に脆弱です。
-指示された（酸性）を下回る培地のpHは、アミノグリコシドおよびマクロライドで小さなハロー（偽耐性のリスク）を生成し、ペニシリン、テトラサイクリン、およびノボビオシン（偽感度のリスク）で大きなハローを生成します。
-pHが示された（アルカリ性）を超える場合、上記の影響は元に戻ります。
-チミンとチミジンの濃度が高い培地が影響を及ぼし、スルホンアミドとトリメトプリムの阻害ハローが大幅に減少します。
-高濃度のカルシウムとマグネシウムは、緑膿菌の菌株に対するアミノグリコシド、ポリミキシンB、テトラサイクリンの偽耐性を生み出します。
-低濃度のカルシウムとマグネシウムは、緑膿菌の菌株に対してアミノグリコシド、ポリミキシンBおよびテトラサイクリンの誤った感受性を生み出します。
-亜鉛の存在は、カルバペネムディスク（イミペネム、メロペネム、エルタペネム）の結果に影響を与えます。
-メディアの厚さが3mm未満の場合は、感度の結果が誤って生成され、5を超えると、抵抗が誤って生成されます。
-抗生物質の放出が即座に行われるため、抗生物質のディスクを動員すると変形したハローが発生します。
-非常に弱い接種は結果に影響を及ぼします。寒天では均一または合流の増殖が起こらないため、ハローが通常よりも大きくなる可能性があることに加えて、阻害ハローを測定できるために必要な条件です。
-接種量が多すぎると、ハローが通常より小さくなります。
-ディスク間の距離を尊重しないと、あるハローが別のハローと重なり、正しく読み取ることができません。
-CO 2と共にインキュベートすると、テトラサイクリンとメチシリンの円板のハローのサイズが大きくなります。
-35°C未満の温度でインキュベートすると、より大きなハローが生成されます。
-血液を追加すると、サルファハローのサイズが小さくなります。
制限
抗生物質の抗生物質の微生物に対する感受性（in vitro）は、in vivoで機能することを保証するものではありません。
QA
培地に十分な量のチミンが含まれているかどうかを確認するには、Enterococcus faecalis ATCC 29212の株を植えて、トリメトプリムスルファメトキサゾール（SXT）に対する感受性をテストする必要があります。満足できるように、20 mm以上のハローを与える必要があります。
参考文献
- 「ミュラーヒントン寒天」ウィキペディア、フリー百科事典。2018年11月16日、12：23 UTC。2019年1月27日、04：22
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Cona E.寒天拡散試験による感受性試験の条件。2002年のChil Infect牧師。19（2）：77-81
- ディフコフランシスコソリアメルギゾラボ。5％羊の血液を含むミュラーヒントン寒天。2009.利用可能：http://f-soria.es
- BDミュラーヒントンII寒天研究所。2017.利用可能：.bd.com
- ブリタニア研究所。ミュラーヒントン寒天。2015.次で入手可能：britanialab.com
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Martínez-RojasD. AmpCタイプのベータラクタマーゼ：表現型検出の一般性と方法。牧師牧師 微生物。2009; 29（2）：78-83。入手可能：scielo.org。
- Perozo A、Castellano M、Ling E、ArraizN。緑膿菌の臨床分離株におけるメタロベータラクタマーゼの表現型の検出。カスメラ、2012; 40（2）：113-121。入手可能：scielo.org。