マッコンキー寒天：理論的根拠、準備、および使用 - 生物学 - 2025

マッコンキー寒天培地は、グラム陰性細菌の排他的な単離を可能にする固体培地です。このため、これは選択培地であり、乳糖発酵菌と非発酵菌を区別することもできます。これは、微生物学研究室で最も広く使用されている培地の1つです。

この培地は、日和見菌や腸管病原菌を含む腸内細菌科に属するグラム陰性桿菌の分離に主に使用されます。

2種類のバクテリアを播種したマッコンキー寒天。左側の乳糖発酵コロニー、右側の非乳糖発酵コロニー。

また、消化管に住む他の腸内桿菌を分離するために使用することもできますが、Aeromonas sp、Plesiomonas spなどの腸内細菌科には属していません。

最後に、環境、水、または土壌で見られる他の非グルコース発酵グラム陰性桿菌を分離できますが、Pseudomonas sp、Acinetobacter sp、Alcaligenes sp、Chromobacterium v​​iolaceum、Stenotrophomonas maltophiliaなどの日和見病原体である場合もあります。

基礎

マッコンキー寒天

この媒体の基礎は、そのそれぞれの特性を決定する目的を持っているので、そのコンポーネントの説明を通して説明できます。

胆汁酸塩とクリスタルバイオレット

この意味で、マッコンキー寒天は複雑な組成を持っています。まず、胆汁酸塩とクリスタルバイオレットが含まれています。

これらの要素は、グラム陽性菌といくつかの扱いにくいグラム陰性桿菌の増殖を阻害する原因となります。次に、これらの物質の影響を受けないグラム陰性桿菌の開発を支持します。したがって、選択培地です。

それはまたグラム陽性菌とほとんどのグラム陰性菌の成長を阻害する他の培地と比較してわずかに選択的であると言われています。

ペプトン、ポリペクトン、ラクトース

ペプトン、ポリペクトン、ラクトースなど、この環境で発生する微生物に必要な栄養素を提供する物質が含まれています。

乳糖を発酵させる能力を持つ微生物は強いピンク色のコロニーを形成するため、乳糖は培地が分化培地であることの重要なポイントです。

一部の細菌は乳糖をゆっくりまたは弱く発酵させ、淡いピンク色のコロニーを形成し、乳糖陽性を維持します。

ラクトースを発酵させないものはエネルギー源としてペプトンを使用し、アンモニアを生成し、培地をアルカリ化します。このため、発生したコロニーは無色または透明です。

PHインジケーター

色の変化は、マッコンキー寒天が持っているもう一つの必須化合物を通して達成されます。この化合物はpHインジケーターで、この場合はニュートラルレッドです。

乳糖の発酵により混合酸が生成されます。それらは培地を6.8未満のpHに酸性化します。

これにより、pHインジケーターが濃いピンク色に変わります。色の濃さは、最終的なpHによって異なります。

蒸留水、塩化ナトリウム、寒天

一方、中程度の水和と浸透圧のバランスを与える蒸留水と塩化ナトリウムが含まれています。最後に、培地には寒天が含まれています。寒天は、固形培地の一貫性を提供するベースです。

調製したマッコンキー寒天培地は、最終pHが7.1±0.2に調整されている必要があります。

準備

1リットルのマッコンキー寒天培地の場合、50 gの脱水培地を計量し、フラスコに入れて1リットルの蒸留水に溶解します。10分間放置した後、加熱し、1分間沸騰するまで常に混合します。

次に、フラスコをオートクレーブに入れ、121°Cで20分間滅菌します。時間の最後に、オートクレーブから取り出され、45°Cの温度に達するまで冷却され、後で層流フード内またはブンゼンバーナーの前で滅菌ペトリ皿に入れられます。

逆さまにしたプレートホルダーに固化して保管し、使用するまで2〜8°Cの冷蔵庫で冷蔵します。

プロテウス属によって生成される警告効果を抑制するマッコンキー寒天を得るために、低塩マッコンキー寒天が使用されます。

従来のMacConkey寒天の使用

マッコンキー寒天培地は、研究室で受け取った臨床サンプルの播種用に用意されたすべての培地セットに含まれています。また、食品微生物学や環境微生物学にも役立ちます。

この培地で成長するさまざまなグラム陰性桿菌は、問題の種の推定診断を行うのに役立つ表現型の特徴を表しています。たとえば、コロニーのサイズ、色、一貫性、匂いは、ガイドできる特性の一部です。

この培地では、Escherichia coli、Klebsiella sp、およびEnterobacter sp種が、沈殿した胆汁のゾーンに囲まれた強いピンク色のコロニーを生成します。

一方、Citrobacter sp、Providencia sp、Serratia sp、Hafnia spなどの細菌は、24時間後には無色、24〜48時間では淡いピンクに見えることがあります。

同様に、Proteus、Edwadsiella、SalmonellaおよびShigella属は無色または透明なコロニーを生成します。

MacConkey寒天の他の亜種

MacConkey Agarには、特定の目的を持つ他の亜種があります。それらは以下に述べられています：

マッコンキー寒天培地とソルビトール

この培地は、腸内病原性菌株（腸管出血性大腸菌O157：H7）を残りの大腸菌菌株と区別するために設計されました。

この培地は炭水化物の乳糖をソルビトールに交換します。腸管出血性大腸菌株O157：H7は、ソルビトールを発酵しないため透明なコロニーが得られ、残りの大腸菌株はソルビトールを発酵させ、コロニーは濃いピンク色になるため、他とは異なります。

クリスタルバイオレットも塩も含まないMacConkey寒天

この寒天は、紫色の結晶がなく、グラム陽性菌が増殖する可能性があるため、古典的なマッコンキー寒天とは大きく異なります。

一方、塩が存在しないと、プロテウス属などの一部の腸内細菌によって生成された寒天に群がって出現することが阻害され、グラム陽性菌を含むすべての細菌の分離が容易になります。

セフォペラゾン入りマッコンキー寒天

このMacConkey寒天のバリアントは、最初にLaribacter hongkongensisを分離するように設計され、後でArcobacter butzleriの分離に役立つことがわかりました。どちらもセフォペラゾンに耐性のあるわずかに湾曲したグラム陰性桿菌です。

これらの細菌は最近、2つの強力な新興病原体として浮上し、アジアとヨーロッパの個人で胃腸炎と後天性下痢を引き起こすとリンクされています。

抗生物質は、胃腸管に付随するフローラの抑制を可能にします。これは、これらの細菌の成長に有利に働き、増殖に72時間を要するため、気づかれないようにします。

10％v / vの海水で調製したMacConkey寒天

このバリアントは、総大腸菌群やレクリエーション用の塩水（ビーチや入り江）中の糞便大腸菌群を含む、糞便汚染の細菌衛生指標の評価に役立ちます。

2013年のCortez et alは、この方法で調製された培地が、蒸留水で調製されたMacConkey寒天の使用と比較して、生理食塩水環境でのこれらの微生物の回収率を大幅に高めることを示しました。

これは、改変培地が生理的に「生存可能だが培養不能」の潜伏状態にある細菌の増殖を刺激するため、従来の培地では回復できないという事実によるものです。

参考文献

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