ポテトデキストロース寒天：根拠、準備および使用 - 生物学 - 2025

寒天デキストロースジャガイモ媒体、固体非ある - 選択的栄養培地。細菌や真菌の種がその中で成長する可能性がありますが、その使用は、糸状菌や酵母の分離に特に適しています。英語表現のポテトデキストロース寒天のPDA培地としても知られています。

それは植物病原性真菌、すなわち植物に影響を与えるものの分離に特に有用です。感染した野菜からサンプルを播種するには、サブロー寒天やマルタ寒天などの他の手段を使用できますが、通常の使用では、より大きな胞子形成が得られるため、ジャガイモデキストロース寒天が好ましいです。

ジャガイモデキストロース寒天培地上のAspergillus nigerおよびSinemas。ソース：英語版ウィキペディアのAlextrevelian 006 / Joselrojas

また、化粧品、医薬品、一部の乳製品のサンプルに含まれる真菌コロニーのカウントにも使用されます。同様に、この培地で非常によく成長し、特徴的な色素を発育する皮膚糸状菌を探すために、皮膚擦過物のサンプルを播種するのに適しています。

ポテトデキストロース培地は、実験室で調製するための非常にシンプルで簡単な培地です。その名前が示すように、ジャガイモ、デキストロース、寒天の注入が含まれています。さらに、阻害物質を追加して、細菌の増殖を防ぎ、真菌種の選択性を高めることができます。

基礎

ジャガイモデキストロース寒天は、糸状菌や酵母の発生に必要な栄養素を提供する培地です。

ジャガイモの注入とグルコースの組み合わせは、真菌の満足のいく成長のための完全なエネルギー源を提供します。寒天は、培地に一貫性を提供するものです。

培地のみでは細菌の増殖を阻害しないため、非選択培地です。それを選択的にするために、酒石酸や抗生物質などの阻害物質を加える必要があります。

準備

-ジャガイモのブドウ糖寒天の自家製（非営利）準備

ペトリ皿

次のように準備されています。

第一に、ジャガイモは非常によく洗われて、彼らが持っている土壌を取り除く。彼らはすべてとシェルで薄いスライスにカットされます。200グラムのジャガイモの重さを量り、1リットルの蒸留水で30分煮沸します。

時間の終わりに、すべての準備をチーズクロスで濾過または濾します。

得られた液体は、1リットルまでの蒸留水で完成します。20 gの寒天と20 gのブドウ糖を注入液に加え、よく混ぜ、15ポンドの圧力で121°Cで15分間オートクレーブします。

50°Cに冷却し、滅菌ペトリ皿で提供します。準備したプレートは冷蔵庫に保管する。

厚切りポテト

ポテトデキストロース寒天ウェッジも準備できます。

この場合、オートクレーブで滅菌する前に、12〜15 mlの培地をチューブに入れ、後でオートクレーブし、固化するまで特別な支持台に置いておきます。冷蔵庫で保管してください。

培地のpHは5.6±0.2のままですが、一部の研究室では細菌の増殖を抑制するために10％酒石酸を添加してpHを3.1±0.1に下げています。

これと同じ意味で、他の研究所は、菌類の培養に選択性を持たせ、細菌の増殖を防ぐために抗生物質を加えることを好みます。

-ポテトデキストロース寒天の商業的準備

39 gの市販の脱水培地を量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。5分間そのままにします。

完全に溶解するまで、混合物を頻繁に攪拌しながら加熱する。その後、オートクレーブで121°Cで15分間滅菌します。

プレートまたはウェッジを準備できます。上記の手順に従ってください。

pHは5.6±0.2のままです。3.1のpHが必要な場合は、プレートに供給する前に、14 mlの滅菌20％酒石酸を追加する必要があります。

生の培地はベージュであり、準備された培地は淡い琥珀色で、わずかに曇ったり乳白色に見えます。

用途

ジャガイモブドウ糖寒天に植物サンプルを播種するためのプロセス

-シミの葉用

葉を細かく切る。

50 ccのアルコールが入った50 ccのグラスに、葉の部分（染色された健康な部分）を置き、表面を20〜30秒間消毒します。アルコールを捨て、葉が薄い場合は20％次亜塩素酸ナトリウムを40〜50秒間加え、樹皮や丸太の場合は時間を80秒に増やします。

次亜塩素酸ナトリウムを廃棄し、滅菌したピンセットで消毒した小片を取り、培地の表面に置きます（最大10個）。日付を設定し、20〜30°Cでインキュベートします。

-果物や塊茎用

果物が肉質である場合は、真菌の影響を受けた果物を開き、病気の部分と健康な部分の両方から滅菌メスで断片を取り、寒天の表面に置きます。

果物がレモンやオレンジなどの柑橘類である場合は、それを開いてその種子を播種する必要があります。

果物の表面が影響を受け、胞子が観察された場合、理想的なのはプレート上で格子法を使用することです。これは、滅菌され冷却された「L」字型のヘラで胞子に触れ、その後、寒天上でジグザグに2〜3回播種することで構成されます。

-穀物用

それらは葉に記載されているように消毒され、後で寒天に置かれます。

-枝と茎用

樹皮をこすり落とし、その後、健康で病気にかかった部分を切り取り、直接寒天にまきます。

播種されたプレートは、20〜30℃で72時間好気的に培養されます。

ジャガイモデキストロース寒天に皮膚、髪、爪のサンプルを播種するプロセス

サンプリングは、皮膚糸状菌を探すために、影響を受けた髪、皮膚のうろこ、または爪を切るために、No。11メスの刃を使用して行う必要があります。サンプルを採取する前に、その領域を70％アルコールで消毒する必要があります。

-肌サンプル

うろこ状病変では、真菌が見つかる可能性が高いため、病変の端を削る必要があります。

滲出性病変では、サンプルを乾いた綿棒または湿った綿棒で採取します。ポテトデキストロース寒天またはサブロー寒天にすぐに播種します。交通手段を避けてください。

別のサンプリング方法は、MariatとAdan Camposのカーペットスクエアテクニックによるものです。この場合、患部を滅菌ウールで5回こすり、次の培養を行います。

サンプルは培養液に直接入れることができます。

-髪のサンプル

病理学に応じて、影響を受けた部分は切り取られるか、根こそぎになります。サンプルを培養液に入れます。

-ネイルサンプル

影響を受けた爪の特定の部分は、削ったり、切ったりすることができます。けがの種類によって異なります。

菌と培地との接触の可能性を高めるために、播種前にサンプルを1 mmにカットします。

識別手順

プレートで得られたコロニーを、ポテトデキストロース寒天を含むチューブに分離し、コロニーの外観（外観、色、一貫性、発育の程度）を調べます。

顕微鏡による研究（構造とその形成の観察）は、マイクロカルチャーによって、またはスライドとスライドの間の顕微鏡下での直接観察によって行うことができます。

コロニー数

この培地は、植物、食品、化粧品、または薬物のサンプルに存在する真菌および酵母の負荷を決定するためにも使用できます。この目的のために、抗生物質が補充されたポテトデキストロース寒天が使用されます：（クロラムフェニコール、クロロテトラサイクリンまたはその両方など）。

1 mlのサンプル（できれば希釈済み）を無菌の空のペトリ皿に注ぎ、ジャガイモデキストロース寒天のパッドを溶かして45°Cまで冷ます。ペトリ皿に注ぎ、均質化されるまで回転させます。固まるまで休ませる。

求める菌の種類とサンプルの種類に応じて、5〜7日以上、20〜25°C（カビ）または30〜32°C（酵母）で好気的にインキュベートします。2つのプレートを使用して、両方の温度範囲でインキュベートできます。

食品サンプル中の真菌コロニーのカウント。抗生物質が補充されたポテトデキストロース寒天。ソース：Pxhere.com写真/ 777267

菌株の維持

ポテトデキストロース寒天は、数年間真菌株を維持するために使用できます。

このために、菌はジャガイモデキストロース寒天のくさびで成長し、菌が成長すると、鉱物油で覆われます。オイルはオートクレーブで45分間滅菌する必要があり、粘度は約300〜330セイボルトです。オイルはベベルの先端から1〜2 cm上にある必要があります。

QA

調製した各バッチから、1枚または2枚のプレートを取り、25°Cで48時間または20°Cで96時間インキュベートします。良好な無菌管理とは、コロニーの発達が観察されない管理です。

以下のような既知または認定されたコントロール株も使用できます。

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763、Candida albicans ATCC 10231、Aspergillus brasiliensis ATCC 16404、Trichophyton mentagrophytes ATCC9533。すべてのケースで良好な成長が期待されます。

参考文献

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