遠藤寒天または遠藤培地は固形培地、差動および選択培養ある程度です。オリジナルのフォーミュラは、乳糖発酵菌と非発酵菌を区別するために1904年に遠藤によって作成されました。当初はチフス菌の分離用に設計されましたが、後に培地の目的は大腸菌群の検索に移りました。
遠藤寒天の原理は変わりませんが、その製剤は長年にわたって無数の変化を遂げてきました。現在、培地は動物組織の消化消化物、乳糖、リン酸水素二カリウム、亜硫酸ナトリウム、塩基性フクシン、寒天で構成されています。
A：バージン遠藤寒天B：シード遠藤寒天、寒天の真ん中には、大腸菌株の金属的な輝きが見られます。出典：A：Strolch1983 / B：LenkaM
培地の主な用途は、腸内細菌科および他の近縁の家族に属するグラム陰性桿菌の分離および分化に関連しています。
長い間、水、乳製品、食品サンプル中の大腸菌群の検出に使用されていましたが、現在、この培地の使用は、同様の機能を持つ他の培地に取って代わられています。しかし、いくつかの微生物学研究所では、臨床由来のサンプルから腸内細菌科を分離するためにこの寒天を使用しています。
基礎
遠藤寒天は、要求の厳しい微生物の成長に必要なアミノ酸、窒素、炭素、エネルギーの供給源として機能するペプトンを含んでいます。
一方、寒天のわずかに選択的な特性は、亜硫酸ナトリウムと塩基性フクシンの添加によって提供されます。両方の成分は、ほとんどまたはほとんどのグラム陽性菌の増殖を部分的または完全に阻害します。
差別的な特徴は、この場合はラクトースと塩基性フクシンであり、pHインジケーターとしても機能する発酵性炭水化物の存在によって与えられます。
この寒天上で成長し、乳糖を発酵できるグラム陰性菌は、強いピンク色のコロニーを形成します。大腸菌の特徴的であり、虹色の緑がかった金属光沢のある暗赤色のコロニーの形成。これは、炭水化物発酵による酸の生産が高いためです。
コロニー周辺の培地も濃いピンク色に変わります。一方、非乳糖発酵グラム陰性桿菌は、中程度または無色の淡いピンクがかったコロニーを形成します。
リン酸水素二カリウムは培地のpHを調整し、寒天は固体の粘稠度を提供する成分です。
準備
遠藤寒天
41.5 gの脱水培地を量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。媒体が完全に溶解するまで、頻繁に攪拌しながら混合物を加熱します。121°C、15 lbの圧力で15分間オートクレーブで滅菌します。
オートクレーブから取り出すときは、約45〜50°Cの温度まで冷却し、混合物を振って均質化してから提供します。滅菌ペトリ皿に20 mlを注ぎます。
プレートを固化させ、反転させてプラケロに保管するか、または冷蔵庫に保管する前に暗い色の紙で包みます。準備した培地を直接光から保護することは非常に重要です。ベストプラクティスは、必要な正確な量を準備することです。
冷蔵庫に保管する場合は、使用前にプレートを温めてください。
培地のpHは7.2から7.6の間で、調製した培地の色は淡いピンクです。
M-Endo寒天バリアント
マッカーシー、デラニー、グラッソの公式に従う別のバージョンの遠藤寒天（m-Endo）があります。
このバリアントには、ラクトース、トリプトース、カゼインの酵素消化物、動物組織の酵素消化物、塩化ナトリウム、リン酸二カリウム、亜硫酸ナトリウム、酵母エキス、リン酸一カリウム、塩基性フクシン、デオキシコール酸ナトリウム、硫酸ラウリルが含まれます。ナトリウムと寒天。
この場合、５１ｇの脱水培地を秤量し、２０ｍｌのエタノールを含む１リットルの蒸留水に懸濁する。
培地が完全に溶解するまで攪拌しながら少し加熱します。過熱したり、オートクレーブしたりしないでください。混合物が均一になったら、滅菌ペトリ皿に入れて固化させます。
使用する
一部の国では、食品および水のサンプル中の大腸菌群の総数と糞便をカウントするために、特に糞便汚染の主な指標としての大腸菌の存在をカウントするために、まだ使用されています。
M-Endo Agarは、消毒および廃水処理プログラムの監視と制御、および飲料水の品質の評価のために、米国公衆衛生協会（APHA）により推奨されています。
最も広く使用されている方法は、サンプルをラウリル硫酸ブロスで2〜4時間濃縮した後の膜ろ過です。
また、EMB寒天培地の代用として、食品および水の微生物学的分析で最も可能性の高い数値手法（MPN）を使用して、特に完全な確認段階で、濁ったECブロスからの大腸菌の存在を確認できます。
QA
既知または認定されたコントロール株を播種して、調製した遠藤寒天バッチの品質を評価します。
この目的に使用できる株には、Escherichia coli ATCC 25922、Escherichia coli ATCC 11775、Enterobacter cloacae ATCC 13047、Klebsiella pneumoniae ATCC 13883、Salmonella typhimurium ATCC 14028、Shigella flexneri ATCC 12022、Proteus miracaliscus ATCC 11700 。
菌株は枯渇により播種され、好気性生物において37℃で24時間インキュベートされます。
期待される結果は次のとおりです。
- 大腸菌の場合：金属光沢のある強い赤いコロニー。
- E. cloacaeおよびK. pneumoniaeの場合、コロニーはピンク色のムコイドである必要があります。
- S. typhimurium、S。flexneriおよびP. mirabilisの場合、コロニーは通常淡いピンクまたは無色です。
- 最後に、E。faecalisは部分的に阻害されることが予想されるため、その増殖は非常に小さく、強いピンク色のコロニーが必要です。
制限事項
-遠藤培地は選択力が低いため、ブドウ球菌、腸球菌、さらには酵母などのグラム陽性菌が増殖する可能性があります。
-Pseudomonas spやAeromonas spなど、腸内細菌科に属さない他の桿菌がこの培地で発生する可能性があります。これらの株の特徴は、無色の不規則なコロニーです。
-この準備された媒体は光に非常に敏感であるため、それへの長期の露出はインジケーターシステムを劣化させ、不可逆的に媒体に損傷を与えます。
-培地の成分は発がん性があると考えられているため、直接の接触は避けてください。
-脱水された培地は非常に吸湿性が高く、元の容器に入れて室温で密閉し、乾燥した環境に保管する必要があります。
参考文献
- BD Laboratories。遠藤寒天。2013.利用可能：bd.com
- Neogen Laboratories。M遠藤寒天。で利用可能：foodsafety.neogen.com
- 遠藤寒天。ウィキペディア、フリー百科事典。2017年9月7日、08：27 UTC。2019年2月28日22:55。en.wikipediaで入手できます。
- MercK研究所。遠藤寒天。2019.利用可能：merckmillipore.com
- テクニカルシート研究所。M –遠藤寒天LES。2015.次で入手可能：liofilchem.net