ペプトン水は主に希釈食品試料または他の材料として使用される非選択的液体濃縮培地、です。化学的観点から見たこの培地は非常にシンプルで、肉のペプトン、塩化ナトリウム、水が含まれています。
栄養価が高く、サンプルを濃縮することができます。乱用された細菌がある場合、この培地は生存率を修復する力を持っています。腸内細菌科に属する細菌の回収に特に役立ちます。
ボトル入りペプトンウォーター。出典:修士号 マリエルサギル
サルモネラ菌の回復の場合、バフェットペプトン水バリアントの使用が推奨されます。これは、サンプルの前濃縮培地として機能します。この場合、リン酸二ナトリウムやリン酸二カリウムなどの他の元素が含まれています。
通常ペプトン水は中性pHで調製されますが、分離する細菌が好アルカリ性であるため、pHが8.5±0.2(アルカリ)である必要がある他のバリアントもあります。ビブリオコレラ。
さらに、この培地は、炭水化物発酵試験の基本培地として使用できます。
基礎
ペプトンは細菌の増殖に必要な栄養素、特に窒素と短鎖アミノ酸を提供し、塩化ナトリウムは浸透圧のバランスを維持します。
さらに、この培地は、工業プロセスによって損傷を受けた細菌細胞を分散、均質化、および修復することを可能にします。
希釈剤として理想的で、生理的溶液(SSF)またはリン酸緩衝液(PBS)を効果的に置き換えます。
細菌の増殖は、その濁度を観察することにより明らかです。
準備
自家製の準備(非営利)
1 gのペプトンと8.5 gの塩化ナトリウムを量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。pHは7.0に調整する必要があります。これには、1N塩化ナトリウムを使用できます。
市販の培地を使用した準備
脱水した培地15 gを量り、1リットルの蒸留水に溶かします。混合物を均質化します。必要に応じて、混合物を1分間煮沸して、完全に溶解させます。必要に応じて、100 mlボトルまたは10 mlチューブで提供します。121°Cで15分間オートクレーブします。
冷やして使用するか、冷蔵庫に保管してください。培地の最終pHは7.2±0.2です。
脱水した培地の色はライトベージュで、調製した培地はライトアンバーです。
発酵試験の準備
前の準備-滅菌前-に炭水化物を1%の最終濃度まで加え、Andradeインジケーター(酸性フクシン)またはフェノールレッド(0.018 g / L)を加える必要があります。ガスの形成を観察するには、チューブにダーラムベルを取り付ける必要があります。
ペプトン水の他の変形
緩衝または緩衝ペプトン水
カゼインの酵素加水分解物、塩化ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素ナトリウム十二水和物が含まれています。最終的なpHは7.0±0.2です。
その準備のために、20 gの脱水培地の重さを量り、1リットルの蒸留水に溶解します。約5分間休ませます。完全に溶解するまで1分間加熱します。
必要に応じて適切な瓶に注ぎます。121°Cで15分間オートクレーブを使用して滅菌します。
-アルカリ性ペプトン水
脱水した培地25 gを計量し、1リットルの水に溶解します。上記の手順に従ってください。pHは8.3から8.7の範囲です。
使用する
接種はサンプルを直接置くことによって行われます。
特に、バクテリアの損傷が疑われる場合に、サンプルを希釈するために使用されます。通常、希釈は1:10と1:100です。
35-37°Cの好気性生物で24時間インキュベートします。
便サンプル
サルモネラの便検体の場合、緩衝液または緩衝水の使用を前濃縮培地として推奨します。
これを行うには、次の手順に従います。
便ができた場合は、サンプルを1 g取ります。それらが液体の場合は、1 mlの糞を取り、10 mlのバフェットペプトン水を入れたチューブに懸濁します。直腸スワブの場合、スワブに含まれる材料を緩衝ペプトン水でチューブに排出します。
すべての場合において、サンプルをよく混合して均質化します。
37℃で18〜24時間インキュベートします。続いて、亜セレン酸シスチンブロスやテトラチオネートブロスなどの濃縮ブロスで37°Cで18〜24時間以上継代培養します。最後に、SS寒天、XLD寒天、ヘクトエン寒天などのサルモネラ菌の選択培地で培養します。
食品サンプル
ペプトン水は、濃縮培地または単純な希釈剤として使用されますが、サルモネラ種が求められている場合は、すでに説明したように、前濃縮培地として使用されます。
食品では次のように進めます:
固形食品の場合はサンプルの重量が25 g、液体食品の場合はサンプルの25 mlを測定します。この部分を225 mlのペプトン水を含むフラスコに入れる。サンプルを混合して均質化します。
微生物負荷が高いと思われる場合は、連続希釈または10進希釈を行って、コロニー形成単位(CFU)のカウントを容易にすることができます。
希釈回数は、サンプルのタイプと分析者の経験によって異なります。
逆に、微生物負荷が非常に低いと疑われる場合は、希釈を行う必要はありません。続いて、選択培地でのサブカルチャー。
貝、魚などの海からの食品の場合、ビブリオコレラ菌または他のビブリオ種を求めて、pH 8.5に調整されたペプトン水(アルカリペプトン水)を使用する必要があります。
QA
調製した各バッチから、1〜2本のチューブを接種せずに24時間、37℃のエアロビオシスでインキュベートする必要があります。時間の終わりには、濁りや色の変化は観察されません。
既知の対照株もその有効性を評価するために使用できます。
このために、次の細菌株を使用することができます:大腸菌ATCC 25922、大腸菌ATCC 8927、黄色ブドウ球菌ATCC 6538、緑膿菌ATCC 9027、ネズミチフス菌ATCC 1428、サルモネラエンテリティディスATCC 13076。
すべての場合において、培地の濁りによって観察される満足のいく微生物の発生が予想されます。
制限事項
-脱水された培地は非常に吸湿性が高いため、湿気を避けてください。
-何らかの劣化が見られる場合は、培地を使用しないでください。
-脱水された培養液は10〜35℃で保存してください
-準備した培地は冷蔵保存する必要があります(2-8°C)。
参考文献
- カマチョA、ジャイルズM、オルテゴンA、パラオM、セラーノB、ベラスケスO.食品の微生物分析手法。2009年、第2版。化学部、UNAM。メキシコ。UNAM 1のFaculty of ChemistryのManuals and Documents Administrator(AMyD)のバージョンです。http://depa.fquim.unam.mx
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