微生物の分離には、対象となる微生物の種を自然の生息地からインビトロの生息地に抽出および分離するために使用される一連の技術が含まれます。これらの技術は、微生物学研究のための多くの基本的かつ必要なツールのセットです。
知られている科学によって定義されている微生物のほとんどは、隔離され、容器内に保持され、一部には、微生物が住む場所の固有の状態をシミュレートすることができます。
ペトリ皿内の固体培地で分離された細菌のような微生物のコロニーの典型的な画像（www.pixabay.comのnadya_ilによる画像）
おそらく、微生物の分離を実践した最初の人の1人は、Anton Van Leeuwenhoek（1632-1723）でした。 。
しかし、19世紀の間に科学者のルイパスツールとロバートコッホの時代になって初めて、特定の微生物を詳細に研究できるようにするために、特定の微生物を分離するのに役立つ厳密な慣行が行われ始めました。 。
レーウェンフックとは異なり、これらの研究者は、環境内の他の微生物種から特定の種を分離することに焦点を当てていました。さらに、彼らは彼らを自然環境の外でできるだけ長く生かしておくことに興味がありました。
今日、生物圏のほとんどすべての環境から得られた多くの異なる微生物の分離と成長のための正確な技術が開発されました。
微生物分離技術
すべての微生物分離は、対象の微生物が見つかる野生のサンプルの収集から始まります。これらの場所は、動物や植物の組織の傷、土壌や基質、水たまり、海、皮膚などの表面などです。
サンプルは、分離が望まれる表面での微生物の成長のための適切な要件を備えた培地を有する容器に触れるかまたは支持することによって採取される。このコンテナでは、微生物の「培養」と呼ばれるものが得られます。
一般に、自然の生息地から最初に得られる作物は、間違いなく「混合作物」です。つまり、多数の異なる微生物種で構成されています。
しかし、微生物のほとんどの種は実験室で互いに分離することができ、目的の種のみが成長する微生物培養物を取得すること、つまり「純粋な培養物」を取得することが求められます。
本質的に、「純粋な培養」を得るために実行されるプロセスは、「微生物の分離」として知られているものです。
微生物を分離するための技術は多数あり、特定のタイプの微生物に特定の技術もいくつかあります。それ以外の場合は、自然環境からサンプルを採取するだけで、純粋な培養物を得ることができます。
混合培地で見られる対象種を分離するために最もよく使用される分離技術には、次のものがあります。
キズやスジ
おそらくこれは、微生物を分離するために最も広く使用されている方法です。この技術は、ペトリ皿などのガラス容器内で微生物の増殖に必要なすべての栄養成分を含む無菌固体培地を準備することから成ります。
一般的に指摘されている細かい器具を使用して、混合培養物で分離される微生物に触れ、次に、滅菌固体培地中で、微生物に触れた器具の先端を全体にわたって左右にスライドさせ始めますナンバープレート。
これは、あたかもジグザグであるかのように、固体または寒天培地の表面全体で前後に集中的に行われます。これは通常、プレート上の寒天の直径の約3分の1がカバーされるまで行われます。
メディアまたはコーティングとの融合
この方法では、収集された微生物が生息している培地の希釈は、それらが希釈された培地のミリリットルあたり数百の細胞しか残っていないところまで行われる。
この希釈液から数ミリリットルを取り、固化する前に容器に追加される培地と混合します。寒天培地と微生物が存在する液体培地との間で混合物が作られると、それらは培地に浸されたままであり、それらがコロニーとして増殖するまで見えるだけです。
それらはコロニーとして発達するので、例えば引っ掻きのような他の方法で残りの微生物からそれらを分離することはより簡単です。
連続希釈
この方法は、微生物が見つかる培地を段階希釈することから成ります。この例は、チーズとヨーグルトの生産に関与する細菌であるラクトコッカスラクティスまたはラクトバチルスアシドフィルスを精製するために行われる希釈です。
サワーミルクまたは以前に発酵させたヨーグルトが入っているチューブから約1ミリリットルを採取し、このミリリットルを微生物を含まない滅菌乳に接種します。その後、約１ミリリットルの前記牛乳が取り出され、プロセスが繰り返される。
これは、約3〜4回連続して繰り返されます。これにより、他の微生物を表す可能性のある汚染物質から分離された培地で、Lactococcus lactisまたはLactobacillus acidophilusが得られる可能性が非常に高くなります。
サイトの詳細写真と微生物を分離するための典型的な材料（www.pixabay.comのSintija Valuckaによる画像）
濃縮手順
この方法論は、目的の種の成長を刺激または促進する条件で、多くの場合、他の汚染微生物の成長を阻害する条件下で、培地で微生物を成長させることによって達成されます。
サルモネラ属の細菌は、亜セレン酸が豊富な培地で成長します。これは、これらの微生物が亜セレン酸をセレンに変換して代謝するためです。培地中の亜セレン酸塩は、サルモネラ以外の微生物の栄養素を吸収することを困難にします。
独自のまたは独占的な技術
これはおそらく、微生物を分離するための最も困難で最も効果の少ない手法です。これには、微生物が収容されている培地（サンプル）の液滴を滅菌カバースリップに置き、それを顕微鏡のステージに置きます。
その後、観察しながら、無菌のマイクロピペットを使用して単一の細胞を取り出します。液滴は、微生物の適切な温度でインキュベートされる別の滅菌カバースリップに配置されます。最後に、顕微鏡下で再び観察すると、成長が見られます。
再観察時に、採取した個々の細胞から新しい細胞が発生した場合は、これらを滅菌培地に加えて、完全に分離された純粋な培養物を取得します。
カスタムテクニック
地球上には、ほとんどすべての既知の生態系全体に散在する無数の異なる微生物があります。一部の微生物は極限環境微生物として知られており、その発生と成長には独特の条件が必要です。
これらの極端な条件は、これらの微生物の増殖のみを可能にするが、それらをインビトロで再現することは困難であり得るので、単離にとって有利でも不利でもある。
重要性
微生物の分離は、科学と医学の分野で最も重要な進歩の1つを表しています。これにより、人類はさまざまな微生物病原体に対する効果的な治療法を研究および開発することができました。
現在、微生物はすべての生態系の重要な部分を形成していることが確実に知られているため、人間にとって比較的重要な微生物の一部を分離することで、研究者は微生物を集中的に研究し、深く理解することができます各エコシステムにおけるその役割。
参考文献
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