ノイバウアー室、hematometer又は血球計、特殊厚のガラス板からなる実験用器具です。このカメラは、赤血球、白血球、血小板などの一部の細胞タイプのカウントに使用されますが、胞子、精子、寄生虫などのカウントにも使用できます。
これは、3つのゾーンで構成されているため、いくつかの非常に独特な特性を示します。カウント用の中央のゾーンと2つのサポートゾーンです。各チャンバーには、2つのカウントゾーンまたは十字線があり、1つは上部にあり、もう1つは下部にあります。
ノイバウアーチャンバー。出典：SantiBadia。編集された画像。
これらは、グリッド形式で複数の部門があります。カウント領域は、両方の経緯線の4つの角にある中程度の正方形と中央の正方形です。
細部は細胞数に影響を与えるため、カメラの組み立ては細心の注意を払って行う必要があります。犯す可能性のある多くの間違いがありますが、それらのいずれかが発生した場合は、カメラを分解、清掃、再組み立てする必要があります。主なエラーは次のとおりです。
チャンバーのオーバーフローまたはアンダーフィル、チャンバーの乾燥、ガーゼによる過剰な液体の除去の試み、輸送時にチャンバーを傾ける、汚れたまたは湿ったチャンバーを満たす、希釈やサンプルを十分に混合しない、など。これらのエラーはすべて、非現実的な値になります。
歴史
ノイバウアーチャンバーは精密機器であり、製造工程は厳格な品質管理を受けています。粒子や、さまざまな液体中の細胞など、形成された1 mm 3あたりの要素を正確にカウントするために作成されました。その繊細なグラフィックはダイヤモンド鉛筆で彫られています。
ノイバウアーチャンバーの特性
チャンバー全体は通常のスライドのサイズなので、顕微鏡のステージに配置できます。
チャンバーは、3つの中央の長方形の表面（a、b、c）で構成されています。ゾーン「b」には、Rゾーンまたはレチクルとも呼ばれるカウントゾーンがあります。カメラの両側に1つ、ゾーン「d」で区切られています。
ノイバウアーチャンバーの図解。出典：血液学の実践ガイド。ベネズエラのカラボボ大学の生物分析学部。
各経緯線は、刻印されたカウント領域を含む研磨領域です。これは、表面積が9 mm 2の正方形で構成されており、内部がそれぞれ1 mm 2の表面積を持つ9 つの正方形に分割されています。4つの角の正方形は、16個の小さな正方形に分割されます（面積は0.0625 mm 2）。
これらのグリッドは、互いに交差する一連のミリメートル線によって形成され、指定された測定値に区切られた完全にグラフ化されたグリッドを構成します。これらの線には、ダイヤモンドの先端が刻まれています。
ノイバウアーレティキュラムの改善。出典：ベネズエラ、カラボボ大学の生物分析学部の血液学の実践ガイド。
四辺はカウント領域に対応しています。大部分の細胞（赤血球および白血球）がカウントされるのは、これらの側面またはコーナーですが、血小板は中央領域でカウントされます。
中央ゾーンにはより多くの分割があり、1 mm 2の正方形が25個の正方形に分割されており、それぞれの表面積は0.04 mm 2です。これらは順番に、0.0025 mm 2の面積を持つ16のグリッドに分割されます。
改良されたノイバウアーレティキュラムの説明。a）角の正方形、b）中央の正方形、c）中央の正方形の中央値の正方形。出典：ベネズエラ、カラボボ大学の生物分析学部の血液学の実践ガイド。
ゾーン「a」と「c」は、血液測定スライドまたは血球計カバーと呼ばれる特別なカバーオブジェクトを配置するためのサポートとして機能します。
ホイルと計数面の間の高さは0.1 mmです。タリーボックスの表面積、チャンバーの高さ、およびサンプルの希釈の測定は、最終的な計算を行うために必要なデータです。
用途
細胞計数に使用します。3つの血球系列をカウントできるため、血液学分野で特に役立ちます。つまり、赤血球、白血球、血小板です。
ただし、サンプルの種類に応じて、精子、胞子、細菌、その他の重要なアイテムをカウントするなど、他の領域で使用できます。
使い方？
サンプル前処理
細胞カウントを行うには、通常、前回の希釈から開始します。例：白血球をカウントするには、タークの液体で1:20の希釈液を準備します。希釈液は、ピペットにロードしてノイバウアーチャンバーを取り付ける前によく混合されます。
1:20の希釈では数えられない場合があります。たとえば、特定のタイプの慢性白血病に罹患している患者。これらのケースでは、1：100などのより高い希釈を行う必要があります。
一方、重度の白血球減少症のように、数が非常に少ない場合は、サンプルを濃縮するために希釈を小さくすることができます。例：1:10に希釈できます。
行われた変更は計算に影響します。
ノイバウアーチャンバーの取り付け
ノイバウアーチャンバーは、中央領域に血液スライドを配置することによって組み立てられます。どちらも非常に清潔で乾燥している必要があります。ラメラを配置するには、ラメラを端で撮影し、カメラにそっと落とします。
これは、Thoma自動ピペットまたはピペットの先端をローディングゾーンの端に35°の角度で置くことで満たされます。液体がスムーズに排出され、ローディングエリアは毛細管現象で満たされます。これは、2つの十字線をロードするために両側から行われます。
レチクルは過負荷にしてはならず、また液体が拒否されるべきではありません。負荷は正確でなければなりません。充填が均一に行われることが重要です。つまり、気泡があってはなりません。
チャンバーが組み立てられたら、細胞が底に沈殿し、その視覚化とカウントが容易になるように、2分間静置します。
休憩後、光学顕微鏡のステージに取り付けて観察します。まず、10倍の目標に焦点を当て、必要に応じて40倍にします。
その視覚化を改善するために、顕微鏡からの光の通過が減少します。これを行うには、コンデンサーを下げ、ダイヤフラムを少し閉じます。
カウント
白血球または白血球を数えるには、4つの中央角の四角形の全表面と各細網の中央の四角形を数える必要があります。
カウントは左上隅の正方形から始まります。最初の行の最初の正方形から開始します。つまり、左から右に向かい、反対側の端に到達します。
そこで下に行き、反対側に到達するまで右から左に視線を戻します。各グリッド内のセルはジグザグにカウントされます。各中央値の正方形の16グリッドがカウントされます。
セルを2回数えることを避けるために、各グリッドの境界線にあるセルに関するルールがあります。左と上の行のセルはカウントされ、右と下の行のセルは無視されます。
オペレーターがデバイスのキーを何回でも観察する細胞を押すように、手動の細胞カウンターが利用可能でなければなりません。カウンターを使用することにより、オペレーターは顕微鏡の視野から見上げることなくカウントすることができます。カウントの最後に、カウントされたセルの総数が表示されます。
計算
計算にはいくつかの方法があります。単一の経緯線をカウントすることも、両方をカウントして両方を平均することもできます。これらの2つの状況では、カウントされたセルに係数（この場合は40）を掛ける必要があります。したがって、mm 3あたりの合計数が得られます。
ただし、2つのグリッドがカウントされ、平均が取られない場合は、別の係数（この場合は20）を掛ける必要があります。
-倍率
倍率は次のように計算されます。
希釈力価、チャンバーの高さ、カウントされた面積など、さまざまなデータが計算に考慮されます。
希釈
白血球数の標準希釈は1:20です。
チャンバー高さ
チャンバーと血球シートの間の高さは0.1mmです。
カウントされた面積
1mm 2の面積の5個の正方形を数えると、それは合計数の面積が5mm 2であることを意味します。このデータにチャンバーの高さを掛けると、カウントされた総体積が得られます。つまり、5mm 2 x 0.1mm = 0.5mm 3です。
数式と計算
私たちが持っているデータでそれは言われています：
0.5 mm 3の場合--あり---カウントされる細胞の数
1 mm 3に ---あります-X n°のセル
X細胞数=（細胞数x 1）/ 0.5 mm 3
ただし、希釈も考慮する必要があります。したがって、式は次のとおりです。
（数えた細胞数x 1）x 20 / 0.5 mm 3
最後に、要約すると、カウントされた細胞数に40を掛けることができます。したがって、mm 3あたりの白血球の値が得られます。
2つのレチクルがカウントされると、カウントされた領域のデータが変更されます。この場合、10平方、つまり10 mm 2になります。そして、カウントされた総体積は1 mm3です。式は次のようになります。
（数えた細胞数x 1）x 20/1 mm 3
したがって、この場合、乗算係数は20になります。
間違い
-カメラをロードするとき、それを超えるか、液体で超えると、カメラの高さが変化します。これにより、実際よりもカウントが高くなります。ガーゼや綿で余分なものを取り除こうとすると、これは大きな間違いです。この動作により、細胞が濃縮され、カウントが増加します。
-ロードが不十分な場合、カウントは実際のものより少なくなります。
・カメラを装着して乾燥させた場合、結果が悪くなりカウントできなくなります。
-チャンバーをロードする前にサンプル希釈液が十分に混合されていない場合、細胞が均一に分布されないため、読み取り値にエラーが発生するリスクがあります。したがって、サンプルが液体の表面から採取されたか、チューブの底から採取されたかに応じて、細胞の濃度は低くなります。
-気泡の存在により、細胞に入る必要のある液体の量が減少し、細胞の正しい視覚化と分布が妨げられます。これらすべてが結果に大きく影響します。
-カウント中は、迷子にならないように、大きな四角形が完成するまで顕微鏡から見ないでください。
-エラーの1つの理由は、取り付け後にカメラを傾けることです。このため、顕微鏡のステージを慎重に上げる必要があります。
勧告
何らかの理由でチャンバーの充填に異常を検出した場合は、その準備を分解し、チャンバーを清掃して、最初から組み立て直すことをお勧めします。
カメラを掃除するときは、十字線を傷つけないように十分に注意してください。一方、血液測定スライドは繊細で壊れやすいことに注意してください。取り扱いを誤ると破損する場合があります。
カウントを開始する前に、細胞が十分に分布していることを確認してください。細胞の不均一な分布は、サンプルの混合または希釈が不十分なために発生します。この場合、組み立てを繰り返す必要があります。
セルが適切に分散されているかどうかを確認する1つの方法は、大きな正方形の数を比較することです。各正方形でカウントされるセルの数は、極端に異なってはいけません。
-白血球数が50,000 mm 3を超える場合は、さらに希釈して、数を繰り返すことをお勧めします。
-希釈を変更する場合、これは式に影響を与えるため、乗算係数を再計算する必要があります。
参考文献
- Cardona-Maya W、Berdugo J、Cadavid A. MaklerのチャンバーとNeubauerのチャンバーを使用した精子濃度の比較。Actas Urol Esp 2008; 32（4）：443-445。で利用可能：scielo。
- ノイバウアーチャンバー。（2018年3月27日）。ウィキペディア、フリー百科事典。相談日：es.wikipedia.orgから2019年6月23日04:10
- メネセスA、ロハスL、シフォンテスS.トリコモナスヴァギナリスの濃度を決定するためのノイバウアーチャンバーでの代替カウント法の適用。カブ・メッド・トロップ牧師2001; 53（3）：180-8。入手可能：researchgate.net
- Gómez-PérezRoald E.精子の分析。ベネズ牧師。エンドクリノール。メタブ。2007; 5（2）：19-20。使用可能な場所：ve.scielo
- カラボボ大学の生物分析学部の血液学実践ガイド。ベネズエラ.1998