チオグリコレートブロス：理論的根拠、準備および使用 - 生物学 - 2025

チオグリコレート培地は、培地富化流体一貫性です。それは英語の流体チオグリコレート培地での頭字語で頭字語FTMによって知られています。それはブリューワーによって作成され、それにカゼインペプトンを加えたベラによって1944年に変更されました。

この培地は酸化還元電位が低いため、厳密な好気性細菌の開発にはお勧めできませんが、通性好気性、厳密な嫌気性、および要求の厳しい微好気性細菌の回収には理想的です。

インジケータなしのチオグリコレートブロス。膣分泌物を示します。ソース：Bobjgalindo

多種多様な微生物の分離と回収においてこの培地で観察された高い性能により、米国薬局方（USP）、農業化学者協会（AOAC）、および欧州薬局方（ EP）。

これらの組織は、医薬品の無菌管理試験や、さまざまな種類のサンプルの濃縮に推奨しています。

カドチオグリコレートは、酵母エキス、カゼインの膵臓消化物、無水デキストロース、L-シスチン、塩化ナトリウム、チオグリコレートナトリウム、レサズリン、および寒天で構成されています。

この培地にはいくつかのバージョンがあり、その中には、インジケーター付きのチオグリコール酸ブロス、インジケーターなしのチオグリコール酸ブロス、ヘミンとビタミンK _1が豊富なインジケーター付きのチオグリコール酸ブロス、および炭酸カルシウムを含むチオグリコール酸ブロスがあります。

特に、ヘミンとビタミンKが豊富なチオグリコレートブロスバリアントは、べとつく嫌気性菌の成長を促進し、炭酸カルシウムを含むチオグリコレートブロスバリアントは、微生物の成長中に生成される酸を中和するのに役立ちます。

基礎

Thioglycollat​​e brothは、ほとんどの堅苦しくない細菌の増殖を可能にするため、非選択的な濃縮培地と見なされます。栄養要件は、酵母エキス、膵臓消化物、グルコースによって提供されます。

一方、この培地は、培養液であるにもかかわらず、少量の寒天を含んでいます。これは、酸素がチューブの奥深くに入ると酸素が減少するように、酸素の流入を遅くするため、酸化還元電位が低いことを意味します。

このため、この培地は通性好気性、微好気性、および厳密な嫌気性細菌の開発に理想的であり、後者はこれらの条件下で培養する必要がありません。同じ媒体が媒体内の酸素の量を調節し、チューブの底部には存在せず、表面には十分な量です。

同様に、チオグリコレートとL-シスチンは還元剤として作用し、過酸化物などの細菌の発生に有害な物質の蓄積を防ぐのに役立ちます。さらに、これらの化合物はスルフヒドリル基（-SH-）を含み、他の重金属の中で水銀誘導体、ヒ素化合物の阻害作用を中和します。

その一部として、レサズリンは酸化物還元の指標です。還元すると無色、酸化するとピンクになります。インジケーターと非インジケーターのチオグリコール酸ブロスの変種があります。その使用は、サンプルの種類と実験室の好みによって異なります。

一方、塩化ナトリウムは、チオグリコール酸ブロスの浸透圧バランスを維持し、無水形態のグルコースの使用は、脱水された培地中の過剰な水分を防ぎます。

準備

インジケーター付きチオグリコレートブロス

29.75 gの脱水培地を量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。混合物を約5分間放置する。熱源に持ち込み、完全に溶解するまで頻繁に攪拌します。

培地を試験管に注ぎ、121℃で15分間オートクレーブします。使用前に冷ましてください。その保存のために商業家の挿入物を確認してください。室温の暗い場所での保管を推奨するものや、光から保護された冷蔵庫での保管を推奨するものもあります。

調製した培地のpHは7.1±0.2です。

脱水した培地の色はライトベージュで、調製した培地は淡い琥珀色で、多少の乳白色をしています。

ヘミンとビタミンKが豊富な指示薬を含むチオグリコレートブイヨン

特に嫌気性菌の培養のために、ヘミンとビタミンK ₁をすでに含んでいる市販の培地があります。

嫌気性菌の濃縮培地がない場合は、基本的なチオグリコール酸ブロスを調製できます。このために、培地1リットルあたり10 mgのヘミン塩酸塩と1 mgのビタミンK _1を加えます。ただし、チオグリコール酸ブロスに血液または血清を添加する場合は、ヘミンまたはビタミンKを添加する必要はありません。

炭酸カルシウムを含むチオグリコレートブロス

市販されており、付属の説明書に従って準備されます。

インジケーターなしのチオグリコレートブロス

これは基本的なチオグリコレートと同じ組成ですが、レサズリンは含まれていません。

脱水した培地30 gを計量し、1リットルの蒸留水に溶解します。残りの準備は、インジケーター付きチオグリコール酸ブロスに記載されているものと同じです。

使用する

チオグリコレートブロスは、臨床サンプル、特に無菌部位のサンプルの濃縮に役立ちます。また、化粧品、医薬品などの非臨床サンプルにも役立ちます。

液体サンプル（CSF、滑液など）の接種では、まずサンプルを遠心分離し、次に沈殿物を2滴採取して、チオグリコール酸培養液に入れます。35°Cで24時間インキュベートします。この時間内に増殖が見られない場合（濁度）、最大7日間まで培養されます。

綿棒でサンプルを採取する場合は、まず培地をプレートに接種し、最後に綿棒をブロスに入れ、突出部分を分割してチューブに蓋をし、綿棒を中に残します。35°Cで24時間、最大7日間インキュベートします。

固体サンプルの場合は、生理食塩水（SSF）でホモジナイズしてから、チオグリコール酸ブロスに2滴の懸濁液を接種します。

厳密な嫌気性菌が疑われるサンプルの輸送培地として、またはバックアップ濃縮ブロスとして使用できる場合があります。

炭酸カルシウムを含むチオグリコレートブロスバリアントは、グルコースの使用によって生成された酸を中和する能力があるため、制御菌株を長期間維持するために使用されます。これらの酸は特定の細菌に有毒です。

チオグリコレートブロスの増殖は、培地の濁りによって観察されます。サンプルの種類や疑われる微生物に応じて、グラム染色を行った後、非選択培地および選択培地で継代培養することをお勧めします。

QA

無菌制御のために、接種せずに1つまたは2つのブロスをインキュベートすることをお勧めします。予想される結果は、チューブの表面にわずかにピンク色が見られるのは普通ですが、色の変化がない透明なブロスです。

品質管理のために、Staphylococcus aureus ATCC 6538、Micrococcus luteus ATCC 9341、Bacillus subtilis ATCC 6633、Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027、Clostridium sporogenes ATCC 19404、Clostridium 11437 sporogenesなどの10〜100 CFUの認定管理株を接種する必要がありますバクテロイデスブルガタスATCC 8482。

これらの微生物は急速に成長しているため、好気性生物において30〜35°Cで24時間、最大3日間インキュベートします。

Micrococcus luteusとBacillus subtilisを除いて、適度な発育が見られる場合を除いて、すべてのケースで良好な発育が期待されます。

ヘミンとビタミンK _1を豊富に含むチオグリコレートブイヨンの品質管理には、管理菌であるBacteroides vulgatus ATCC 8482、Clostridium perfringens ATCC 13124およびBacteroides fragilis ATCC 25285を使用できます。期待される結果は、満足のいく成長です。

推奨事項

-インジケーター付きのチオグリコレートブロスの表面がピンク色になることが時々あります。これは、培地の酸化によるものです。ピンクがブロス全体の30％以上を占める場合は、ウォーターバスで5分間加熱し、再び冷却して使用できます。

これにより、吸収された酸素が除去され、培地が元の色に戻ります。この手順は一度だけ実行できます。

-好気性細菌の増殖を改善するには、蓋を少し緩めてインキュベートします。しかしながら、この目的のために、厳密な好気性菌の適切な発達のために脳心臓注入ブロスまたはトリプチカーゼ大豆ブロスを使用することが好ましい。

-両方の条件が媒体に損傷を与えるので、媒体の凍結または過熱は避けるべきです。

-直射日光は培地にダメージを与えます。光から保護して保管する必要があります。

参考文献

1. ブリタニア研究所。インジケーター付きのチオグリコレートUSP。2015.次で入手可能：labBritania.com。
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5. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。 12 edエディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。