MEDIO MIO：ファンデーション、準備、使用 - 生物学 - 2025

MIO媒体は、腸内細菌科に属する細菌の種の同定を助けるために使用される生化学的試験です。栄養価が高く、ブドウ糖、酵母エキス、ペプトン、トリプテイン、L-オルニチン塩酸塩、ブロモクレゾールパープル、寒天で構成されています。

その頭字語（MIO）の意味は、この媒体で観察できる各パラメーターを説明しています。運動性、インドール、オルニチン。運動性は、鞭毛の存在のために移動する微生物の能力です。この特性が観察されるためには、培地のコンシステンシーが半固体でなければならないので、調製物に含まれる寒天は少なくなります。

MIO媒体での結果の解釈の概要。出典：著者MScにより作成。マリエルサギル

インドールの生成は、アミノ酸トリプトファンに作用する酵素トリプトファナーゼの存在を示し、インドールの生成を可視化するために顕示試薬を使用する必要があります。

最後に、オルニチンは、細菌がアミノ酸を脱炭酸できるかどうか、つまり、酵素にオリニチン脱炭酸酵素があるかどうかを決定します。

基礎

ペプトン、酵母エキス、トリプテイン

これらの要素は、この培地の栄養力に貢献しています。それらは細菌の発達のための栄養素および必須アミノ酸の源として役立ちます。

さらに、トリプテインはトリプトファンの供給源であり、酵素トリプトファナーゼの存在を示します。これは、還元的脱アミノ化によってトリプトファンを分解し、インドール、ピルビン酸、アンモニア、およびエネルギーを放出します。

インドールは無色であり、したがって、その存在は、両方のp-ジメチルアミノベンズアルデヒドを含む5滴のエーリッヒ試薬またはコバックス試薬を加えることによって明らかになります。

この化合物のアルデヒド基はインドールと反応し、寒天の表面にリング状のフクシアレッド製品を生成します。

色の痕跡は、陽性の検査と見なされます。時間が経つにつれて色が劣化するため、校正刷りはすぐに読む必要があります。

さらに、このテストは、オルニチンの運動性と脱炭酸の結果が記録された後に明らかにする必要があります。

解釈

陽性試験：コバックス試薬を滴下するとフクシアの赤いリングが形成される。

陰性テスト：リング形成なし。

運動性

細菌が移動する能力は、濁った培地が観察される場合、または最初の接種の周りに拡大する厚い成長線がある場合に明らかです。

負の運動性テストは、成長の細い線を観察することによって証明され、その周りのすべてが成長なしになります。

試薬を加えると培地全体が曇るので、インドールが明らかになる前に運動性を読み取ることが重要です。

移動性はあるが成長が遅いバクテリアでは、この培地でそれらの運動性を示すことは困難です。この場合、中程度の運動性やドロップペンディング法など、他のテストや方法を使用することをお勧めします。

グルコース

グルコースは、エネルギーを提供することに加えて、環境を酸性化する発酵性炭水化物であり、アミノ酸オルニチンの脱炭酸が起こるために必要な条件です。

腸内細菌科に属するすべての細菌がグルコースを発酵させるという原則から出発して、グルコースの発酵は常に行われなければなりません。

L-オルニチン

細菌が酵素オルニチンデカルボキシラーゼを産生する場合、培地がグルコースの発酵によって酸性化されると、これは作用する可能性があります。

酵素オルニチンデカルボキシラーゼは、アミノ酸のカルボキシル基に作用して、媒体を再びアルカリ化するプトレシンと呼ばれるアミンを生成します。

このテストは、24時間のインキュベーション後に読み取る必要があります。前に読み取ろうとすると、テストが誤って陰性と誤解される可能性があるためです。

発生する最初の反応はグルコースの発酵であるため、初期段階（最初の10〜12時間）で培地が黄色に変わることに注意してください。その後、オルニチンの脱炭酸が起こると、培地は紫色になります。

Kovacs試薬の添加により培地の色が変化するため、インドールを明らかにする前にオルニチン脱炭酸テストを解釈することが重要です。

解釈

ネガティブテスト：黄色または背景が黄色の培地。

陽性テスト：培地は完全に紫色。

PHインジケーター

この場合、ブロモクレゾールパープルが使用されます。培地のpHに変化があったことを明らかにする担当。酸性化するとインジケーターは黄色に変わり、アルカリ化すると紫色に変わります。

播種および開発技術

MIO培地を播種するには、ストレートループまたは針を使用し、それを使用して調査対象のコロニーの一部を収集します。

真央の真ん中に一直線に深い穴を開けます。同じ場所で穿刺を行わないと、運動性の誤ったイメージを与える可能性があるため、二重穿刺を行うことはお勧めできません。

好気性生物で37°Cで24〜48時間インキュベートします。結果をこの順序で見てください：運動性、オルニチンの脱炭酸、そして最後にインドールを明らかにします。

培地2 mlを無菌的に除去し、滅菌チューブに移してインドールテストを行うことをお勧めします。陰性の場合は、元のチューブの残りをさらに24時間インキュベートして、インドールを再び明らかにすることができます。

インドールの開発は次のように行われます。3〜5滴のKovacs試薬がMIO培地に添加され、激しく攪拌されます。赤いフクシアのリングが現れるかどうかが観察されます。

準備

MIOミディアム

31 gのMIO培地を量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。

混合物が1分間沸騰するまで加熱し、寒天が完全に溶解するまで頻繁に振る。4 mlの培地をコットンキャップ付きの13/100試験管に分配します。

121°Cで15分間オートクレーブで滅菌します。オートクレーブから取り出し、半固体のブロックが形成されるように、ラック内にまっすぐに立ちます。

2-8°Cの冷蔵庫に保存します。菌株を播種する前に暖めます。

脱水後の培地の色はベージュ、調製後の培地の色はやや乳白色の紫色になります。

調製した培地の最終pHは6.5±0.2です。

培地は酸性pHで黄色に変わり、アルカリ性pHで紫色になります。

Kovacs Reagent（インドールテスト開発者）

この試薬は次のように調製されます。

アミル、イソアミル、またはブチルアルコール（3つのうちのいずれか）150 mlを測定します。その中に１０ｇのｐ－ジメチルアミノベンズアルデヒドが溶解している。続いて、濃塩酸50mlをゆっくりと加える。

調製した試薬は無色または淡黄色です。琥珀色のボトルに入れて冷蔵庫に保管してください。暗褐色は劣化を示します。

また、Ehrlich試薬の代わりにKovacs試薬を使用できます。後者はより感受性が高く、一部の非発酵グラム陰性桿菌や特定の嫌気性菌など、微量のインドールを産生する細菌のインドールを明らかにするのに適しています。

使用する

この培地は、腸内細菌科に属する細菌の同定のための一連の生化学的試験を補完する試験です。

オルニチン脱炭酸のデータは、陽性を示す赤痢菌、赤痢を示す赤痢菌、赤痢菌を区別するのに役立ちます。

また、陰性を示すクレブシエラ属と、ほとんどの種が陽性を示すエンテロバクター属とを区別しています。

出典：Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。

QA

MIO培地のバッチが準備されるたびに、コントロールテストを実行できます。このため、既知または認定された株を使用して、培地の挙動を観察します。

使用できる株は、大腸菌、モルガネラモルガニ、クレブシエラニューモニエ、エンテロバクターエアロゲネス、プロテウスミラビリスです。

予想される結果は、E。coliとM. morganiiです。ダンM：+、I：+およびO：+。

肺炎桿菌はすべて陰性です（M：-、I：-、O :-)。Proteus mirabilisおよびEnterobacter aerogenesは、M：+ I：-およびO：+を返します。

参考文献

1. Mac Faddin J（2003）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的検査。第三版 社説パンアメリカーナ。ブエノスアイレス。アルゼンチン。
2. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
3. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
4. ブリタニア研究所。MIO Medio 2015.利用可能：britanialab.com
5. BD Laboratories。BBL Motilityインドールオルニチン（MIO）ミディアム。2007.利用可能：bd.com
6. ヴァルテック研究所。ミディアムMIO運動性、インドール、オルニチン。2010.利用可能：andinamedica.com