CZAPEK寒天：理論的根拠、準備、使用および制限 - 生物学 - 2025

ツァペック（CZA）は、具体的に雑菌やカビの成長のために設計された選択固体培地です。植物学者のフリードリッヒヨハンフランツツァペックはポーランド出身で、アメリカの化学者アーサーウェイランドドックスが作成しました。このため、この寒天はCzapek-Dox培地としても知られています。

元の培地は液体でしたが、後に寒天を加えて固形培地にしました。Czapek培地は、硝酸ナトリウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、硫酸第一鉄、スクロース、寒天、および蒸留水で構成されています。

Czapek寒天A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus出典：A. Medmyco / B.写真：Dr. David Midgley。Wikipedia.com

Czapek寒天のpHは7.3ですが、10％の乳酸を加えた変種があり、そのpHは3.5のままです。この酸性培地は、好酸性微生物の培養に使用されます。

一方、一部の商業施設では、硫酸マグネシウムとリン酸二カリウムをグリセロリン酸に変更することにより、ザペック寒天の組成を変更しました。この変更により、従来の処方で観察されたリン酸マグネシウム沈殿物の形成が防止されます。同様に、酵母エキスが追加される別のバリ​​アントがあります。

最後に、Czapek寒天は放線菌種、アスペルギルス種、パエシロマイセス種、ペニシリウム種の研究のためにアメリカ公衆衛生協会APHAにより推奨されています。これらの種は、環境微生物および日和見病原体であることを特徴としています。

基礎

この培地にはスクロースが含まれています。この炭水化物は炭素源として機能し、硝酸ナトリウムは窒素源ですが、他の媒体とは異なり、提供される窒素は無機物です。

このため、唯一の窒素源として無機化合物を使用できる微生物しか増殖できないため、Czapek培地は選択的であると見なされます。

培地の浸透圧の調節物質として、リン酸二カリウムがあります。硫酸マグネシウム、塩化カリウム、硫酸第一鉄は、腐生性（自由生活）微生物の成長に不可欠なミネラルを提供します。この処方はリン酸マグネシウムの沈殿物を形成します。

最後に、寒天は培地に固体のコンシステンシーを提供する化合物であり、水はすべてのコンポーネントの溶媒です。

変更されたCzapek寒天処方では、沈殿物が形成されず、一部の菌類の成長性能が向上します。

アシッドザペック寒天は非常に酸性度が高いため、無機窒素を利用できる好酸性微生物の増殖のみを可能にするより選択的な培地になります。一方、ザペック酵母寒天は、特定のキノコの性能を向上させます。

準備

中程度のCzapek-Dox

脱水した培養液49gを量り取り、蒸留水に溶かします。沸騰するまで熱を加えます。完全に溶解するまで、混合物を頻繁に振ります。

-Czapek寒天ウェッジ

溶解した混合物をチューブに分配し、121°Cで15分間オートクレーブします。オートクレーブから取り出すときは、チューブを置く前に均質化し、固化させます。

-ザペック寒天プレート

溶解した混合物を121°Cで15分間オートクレーブし、50°Cに冷ましてから、ホモジナイズして20 mlを滅菌ペトリ皿に注ぎます。固化させ、転倒させ、使用するまで冷蔵庫に保管します。

pHは7.3±0.2のままである必要があります。脱水した培地の色は白で、調製した培地は淡い琥珀色で、凝集沈殿の存在によりわずかに曇っています。

酸性pHのCzapek培地

すでに説明したように準備しますが、準備した培地1リットルあたり滅菌10％乳酸10 mlを追加します。改変Czapek培地は、pH 3.5±0.2である必要があります。

変更されたCzapek Medium

脱水した培地45.4 gを量り取り、1リットルの水に溶解します。残りの準備は上記と同じです。脱水後の培地の色は白で、調製した培地は白っぽいです。培地の最終pHは6.8±0.2です。

ツァペック酵母培地

Czapek酵母エキス寒天（CYA）とも呼ばれます。それは古典的なザペック寒天と酵母エキスの要素が含まれています。

使用する

Czapek培地は、土壌、野菜、穀物、空気、昆虫などのサンプルから腐生微生物を検索するために使用されます。

酸性pHのCzapek寒天は、好酸性微生物の増殖に使用されますが、改変Czapek寒天は、Candida albicans複合体の種における厚膜胞子の形成に特に有用です。

最後に、ザペック酵母寒天培地は、アスペルギルスとペニシリウムの分離に非常に役立ちます。

播種

-ザペック寒天

土壌中の放線菌を検索するには、次の手順に従います。サンプルをフェノール処理水で30分間処理した後、懸濁液1 mLをCzapek寒天に播種します。28°Cで5〜7日間インキュベートします。

野菜、穀物、昆虫のサンプルの場合、それらは直接寒天上に置かれます。希釈して寒天表面に0.1 mlを播種することもできます。

-改変ザペック寒天

播種には、真っ直ぐなループまたは針を使用し、綿棒を含浸させ、プレートのベースに触れるまで寒天に穴をあけて接種します。28°Cで24時間インキュベートし、プレートの上下にある顕微鏡で調べて、厚膜胞子が形成されているかどうかを確認します。

インキュベーション温度と時間

培養温度と時間は、分離する微生物の種類によって異なります。プレートは通常、20〜25℃の温度範囲で1〜2週間インキュベートされます。

ただし、一部の株には特定の条件があります。たとえば、アスペルギルス属のほとんどの種は30°Cで最適に成長します。ただし、A。fumigatusは50°Cで成長します。

インキュベーション時間に関しては、1週間または2週間は正常ですが、Candida albicansは25°Cで24〜48時間で発育します。

この培地上のいくつかのコロニーの特徴

-Penicillium atrovenetum

27℃で12日間のインキュベーションで発現します。彼らのコロニーは小さい（25mm）。

コロニーはビロードのような外観で、明確な白い境界線と中央に青緑色の色合いがあり、年齢とともに灰色になります。コロニーの裏側はオレンジ色で、色素の生成により真ん中が同じ色になります。

-Aspergillus niger

それは白から黄色の菌糸体と黒い胞子で発生します。

-カンジダアルビカンス

クリーミーなライトベージュのコロニーが発達します。改変されたザペック寒天では、それは厚膜胞子を形成します。

-アスペルギルス寄生菌

濃い緑色の菌糸体が25℃で7日で発生します

QA

培地の品質を評価するために、以下のような認定されたコントロール株を植えることができます：Aspergillus niger MKTA 16404、Candida albicans MKTA 10231。

Aspergillus nigerは、白から黄色の菌糸と黒い胞子を約5日間で発生させますが、Candida albicansは、25°Cで24時間のインキュベーションで十分な増殖を示します。コロニーはクリーム色です。

制限事項

いくつかの研究では、放線菌の回収では、最高収量の寒天がジャガイモデキストロース寒天であり、ザペック寒天が2位でしたが、アスペルギルスとペニシリウムの回収では、ザペック寒天が最高の回収率を提供する寒天であることが明らかになりました。

参考文献

1. ダビラM、他 農業上重要な植物病原菌に対する拮抗性放線菌。メックス牧師 理科。Agríc2013、4（8）：1187-1196。入手可能：scielo.org。
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5. カルチャーメディアマイクロキット。Czapek-Dox寒天。Diosponible in：Medioscultivo.com