寒天MRSは、特にLactobacillus属、乳酸菌の単離および列挙するために使用される選択固体培地培養です。この寒天は1960年にMan、Rogosa、Sharpeによって同じ名前で作成されましたが、複雑なため、略語MRSがよく使用されます。
それは、プロテオースペプトン、肉エキス、酵母エキス、グルコース、モノオレイン酸ソルビタン、リン酸二カリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、および寒天で構成されています。
Lactobacillus sp。を播種したMan RogosaおよびSharpe Agar（MRS）。出典：著者がこの記事に寄付した写真：BáezE、GonzálezG、HernándezG、LópezE、MegaM。 。
この組成物は、糞便、膣分泌物、経口サンプル、母乳などの臨床サンプル、ならびに乳製品および肉食品からの乳酸菌の適切な発生を可能にします。
乳酸菌が疾患のプロセスに関与することはまれであるため、臨床検査室では日常的に使用されていません。しかし、食品微生物学の分野では、MRS寒天の使用がより頻繁です。
一方、この培地は、乳酸菌の研究を目的としたいくつかの研究センターで使用されています。
基礎
Man、Rogosa、Sharpeの寒天は、かなり複雑な組成をしています。各コンポーネントの機能を分解することにより、その基礎を説明できます。
プロテオースペプトン、肉エキス、酵母エキス、グルコースは、細菌の増殖に必要な炭素、窒素、ビタミン、ミネラルの供給源となる栄養素です。さらに、グルコースはほとんどの培地で使用される普遍的なエネルギー源です。
一方、乳酸菌の成長を促進するためには、乳酸菌と関連細菌の代謝に不可欠な補因子（カチオン）の存在が必要です。これらの化合物は、ナトリウム、マグネシウム、マンガンの塩です。
同様に、モノオレイン酸ソルビタンまたはポリソルベート80は、栄養素として吸収されるため、脂肪酸の重要な供給源です。
さらに、モノオレイン酸ソルビタンとクエン酸アンモニウムは、付随するフローラ、特にグラム陰性菌の発生を阻害することによって作用し、この寒天の選択的な特性を提供します。
最後に、寒天は、培地に固体の一貫性を提供するものです。
Man Rogosa Sharpe寒天には他にも変種があります。それらの1つには、他の微生物の中でもビフィズス菌の分離に非常に役立つシステイン（MRSc）が補充されています。一方、乳製品中のビフィズス菌を選択的にカウントするために特別にネオマイシン、パロモマイシン、ナリジクス酸、塩化リチウムを添加したMRS培地があります。
準備
68.25グラムの脱水した培地を量り取り、1リットルの蒸留水に溶解します。5分間放置します。完全に溶かすには、熱源に変えてよくかき混ぜ、1〜2分沸騰させます。121°Cのオートクレーブで15分間滅菌します。
オートクレーブを離れるとき、数分間放置し、滅菌ペトリ皿でまだ熱いうちに分散させます。
プレートを固化および反転させ、プレートラックで注文し、使用するまで冷蔵します。使用前にプレートを室温まで温めてください。
培地のpHは6.4±0.2です。一部の商業施設では、pH 5.5〜5.9を推奨しています。
脱水した培地はベージュ色で、濃い琥珀色です。
脱水培地と準備されたプレートの両方が2〜8℃で保存する必要があります。
用途
MRS寒天プレートは表面播種できます（枯渇またはDrigalskiスパチュラ）。深さによってもまきます。プレートは、37℃で微好気性（4％O 2および5-10％CO 2）で24〜72時間インキュベートする必要があります。
播種方法は、追求する目的（単離または計数）に応じて選択されます。
コロニーの特徴
Lactobacillusの推定コロニーは白っぽくなり、この寒天上では粘液様またはクリーム状の外観になります。それらは後で識別される必要があります。
乳酸菌の分離
これには、表面シードが使用されます。播種するサンプルには、事前の手順が必要です。
母乳サンプルの場合、脂肪層を除去するために、サンプル1 mlを14,000 rpmで10分間遠心分離することをお勧めします。900 µlを廃棄し、残りの100 µlに沈殿物を懸濁してMRS寒天の表面に注ぎ、ドリガルスキースパチュラで均等に分散させます。
便試料の場合、1グラムの便を秤量し、1/10希釈に相当する9 mLの0.1％滅菌ペプトン水で均質化します。次に、10 -4の最終希釈が得られるまで、段階希釈を行います。
最後に、100μlの10 -2、10 -3、10 -4希釈液を採取し、各希釈液をドリガルスキスパチュラで均一に分散する、寒天MRS上に播種されます。
乳酸菌数
この場合、播種は深さによって行われます。
母乳サンプルの場合、1 mLを取り、滅菌した円錐形のプラスチックチューブに入れます。MRS寒天をおよそ40°Cの温度で最終容量25 mLまで加え、均一な混合物を得る。その後、滅菌ペトリ皿に均一に注ぎ、重合するまで放置します。
便試料については、前述のように希釈が行われます。各希釈液を1 mL取り、滅菌した円錐形のプラスチックチューブに入れます。溶融MRS寒天を25 mLの容量まで加えます。
各希釈液の混合物を滅菌ペトリ皿に均等に注ぎます。最後に、重合するまで休ませる。
Man Rogosa and Sharpe（MRS）寒天のコロニー数。出典：この記事に寄付された写真。著者：バエスE、ゴンサレスG、エルナンデスG、ロペスE、メガM.題名のある研究中に撮影された写真：母乳と乳児の糞中にプロバイオティクスの可能性がある乳酸菌とビフィズス菌の評価。
研究レベル
乳酸菌の研究は毎日ますます関心を集めています。研究者は、特に、新しい株と、乳製品の製造における標準化のためのスターター発酵としてのそれらの可能性、その他の用途について学びたいと考えています。
この意味で、Alvarado et al。（2007）MRS寒天を使用して、職人のアンデス産スモークベネズエラチーズに存在する乳酸菌を分離、同定、および特徴づける研究を実施しました。
チーズでは、LactococcusおよびLactobacillus属の細菌の存在を発見し、分離した菌株の混合物が低温殺菌牛乳からのチーズの製造におけるスターター菌株として適していると結論付けました。
一方、サンチェスら。（2017）MRS寒天を使用して、子豚の消化管内の乳酸菌の存在を調査し、健康な子豚の生産性を高める天然のプロバイオティクスとして使用しました。
この培地を用いて、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus brevis、Enterococcus hiraeおよびPediococcus pentosaceusの4種を分離することができました。
同様に、バエズ等。（2019）MRS寒天を使用して、母乳と乳児の糞便中のプロバイオティクスの可能性を持つ乳酸菌（LAB）とビフィズス菌を評価しました。
彼らは、母乳中の11のBALと3つのビフィズス菌、および8つのBALと2つのビフィズス菌を分離することに成功しました。糞便で。すべてが、プロバイオティック活性を持つバクテリアであることを証明する特定のパラメーターに適合しました。
著者たちは、母乳と母乳だけで育てられた乳児の糞便の両方が、プロバイオティクス細菌の天然の供給源として役立つと結論付けました。
QA
MRS寒天の品質を評価するには、次のような株を管理します。
Lactobacillus fermentum ATCC 9338、Lactobacillus casei ATCC 393、Bifidobacterium bifidum ATCC 11863、Lactobacillus plantarum MKTA 8014、Lactobacillus lactis MKTA 19435、Pediococcus damnosus MKTA 29358、Escherichia coliおよびBacillus cerei。
予想される結果は、最初の6バクテリアの十分な増殖ですが、大腸菌とセレウス菌は完全に抑制されている必要があります。
参考文献
- アルバラドC、チャコンZ、オトニエルJ、ゲレーロB、ロペスG.ベネズエラのスモークしたアンデスの職人のチーズからの乳酸菌の分離、同定および特性評価。スターターカルチャーとしての使用。シエント。（マラカイボ）2007; 17（3）：301-308。入手可能：scielo.org。
- サンチェスH、ファビアンF、オチョアG、アルファロ豚の消化管からの乳酸菌の分離。牧師。獣医。ペルー2017; 28（3）：730-736。入手可能：scielo.org。
- BáezE、GonzálezG、HernándezG、LópezE、MegaM。Acevedo自治体、ミランダ2017で母乳および乳児の糞便にプロバイオティクスの可能性がある乳酸菌とビフィズス菌の評価。学部の学位を取得する学部課程バイオ分析。カラボボ大学、ベネズエラ。
- ブリタニア研究所。MRS寒天。2015.次で入手可能：britanialab.com
- ウィキペディアの貢献者。MRS寒天。ウィキペディア、フリー百科事典。2018年1月10日19:44 UTC。利用可能：wikipedia.org 2019年2月17日アクセス。
- Roy D.乳製品中のビフィズス菌の分離と計数のための培地。Int J Food Microbiol、200128; 69（3）：167-82。