血液寒天：根拠、使用および準備 - 生物学 - 2024

血液寒天固体培地富化差が、非選択的です。臨床サンプルからの多種多様な微生物の回収と増殖、または継代培養に使用されます。

実験室で受け取ったほとんどの臨床サンプルの播種には、クラシックな血液寒天培地を含める必要があります。一定の変更を加えて準備しない限り、便サンプルが役に立たない場合を除きます。

血液寒天プレート

この培地は基本的に濃縮されたベース寒天と5％の血液で構成されています。寒天基剤は必要に応じて変化しますが、主にペプトン、アミノ酸、ビタミン、肉エキス、塩化ナトリウム、寒天などで構成されます。

血液については、通常、羊、ウサギ、馬などの動物から血液を得るために、飼育室と接触する必要があります。ただし、これは常に可能であるとは限らず、人間の血液が使用されることもあります。

血液寒天培地は、実験室で調製するか、既製の専門会社から購入できます。この培地の調製は最もデリケートなものの1つであり、その調製に不注意があるとバッチが汚染されます。

そのため、考えられるすべての予防策を講じる必要があり、最終的には、準備された100個ごとに37°C 1プレートで培養することによって品質管理を実行する必要があります。

基礎

血液寒天培地で培養した黄色ブドウ球菌。ウィキメディア・コモンズを介してFlickrのネイサン・リーディング、Twitterでネイサン・R。これらの各プロパティの基礎を以下に説明します。

血液寒天は、主な添加物として寒天ベースで5-10％の血液を含むため、濃縮培地です。両方の化合物には多くの栄養素が含まれており、この特性により、ほとんどの培養可能な細菌がその中で成長することができます。

その成長は制限なく発生します。このため、非選択的です。しかし、いくつかの微生物の成長を防ぎ、他の微生物の成長を促進する化合物がこの培地に添加される場合、それは選択的になります。これは、特定の種類の抗生物質または抗真菌剤が追加された場合です。

同様に、血液寒天は、3種類のバクテリアを区別できるので、分化培地です。

ベータ溶血剤は、赤血球を完全に溶解または破壊する能力があり、コロニーの周囲に透明なハローを形成する能力があるため、βまたはβ溶血を引き起こし、微生物はβ溶血性と呼ばれます。

β溶血性細菌の例は、化膿連鎖球菌およびStreptococcus agalactiaeです。

アルファ溶血は、ヘモグロビンがメトヘモグロビンに酸化され、コロニーの周りに緑がかった色を生成する部分溶血を行うものです。この現象はαまたはα溶血として知られており、細菌はα溶血として分類されます。

α溶血性細菌の例は、肺炎連鎖球菌およびビリダンス群の連鎖球菌である。

最後に、いわゆるガンマ溶血性または非溶血性細菌があります。これらは、変化を生じることなく寒天上で成長し、γ-溶血として知られている効果であり、微生物はγ-溶血性です。

γ溶血性細菌の例：D群連鎖球菌のいくつかの株（Streptococcus bovisおよびEnterococcus faecalis）。

用途

血液寒天培地は、微生物学研究室で最も一般的に使用されている培地の1つです。

血液寒天培地上で増殖できる微生物には、厳密な好気性、通性、微好気性、嫌気性、グラム陽性菌またはグラム陰性菌、急速に増殖するまたはゆっくり増殖する細菌があります。

栄養価の高い、または扱いにくいバクテリア、真菌、酵母も成長します。同様に、代謝的に非常に弱い株を継代培養または再活性化するのに役立ちます。

しかし、血液型とベース寒天の選択は、回復が疑われる微生物の可能性と、プレートに与えられる使用法（培養または抗生物質）によって異なります。

血液型の選択

血液は、子羊、ウサギ、馬、または人間です。

いくつかの例外を除いて、最も推奨されるのは子羊の血です。たとえば、ラム血液には第V因子を阻害する酵素があるため、推奨される血液が馬またはウサギの血液であるヘモフィルス種を分離する場合。

最も推奨されないのは人間ですが、入手が最も簡単なためか、最も使用されています。

血液はデフィブリンを除去し、いかなる種類の添加物なしで、健康な動物から採取する必要があります。人間の血液を使用するには、いくつかの要因を考慮する必要があります。

血液が細菌感染症の人からのものである場合、それらは特異的な抗体を持っています。これらの条件下では、一部の細菌の増殖が阻害される可能性があります。

血液バンクから入手した場合、クエン酸塩が含まれており、特定の細菌はその存在下では成長しない可能性があります。一方、抗生物質を服用している患者から血液を採取すると、感受性の高い細菌の増殖を抑制することができます。

そして、血液が糖尿病の人からのものである場合、過剰なグルコースは溶血パターンの適切な発達を妨げます。

ベース寒天タイプの選択

血液寒天の調製に使用されるベース寒天は非常に幅広いことができます。その中には、栄養寒天、ブレインハートインフュージョン寒天、トリプチカーゼ大豆寒天、ミュラーヒントン寒天、セイヤーマーチン寒天、コロンビア寒天、ブルセラ寒天、カンピロバクター寒天などがあります。

その調製に使用される基本培地に応じた血液寒天の使用

栄養寒天

このベースは、主に腸内細菌、シュードモナス属、黄色ブドウ球菌、バチルス属などの非要求細菌を増殖させるため、最も使用頻度が低いです。連鎖球菌を分離することは推奨されません。

ブレインハートインフュージョンアガー（BHI）

これは、ストレプトコッカス種やその他の要求の厳しい細菌を含むほとんどの細菌の成長に必要な栄養素を含んでいるため、血液寒天培地のベースとして最も広く使用されているものの1つです。溶血のパターンを観察することは適切ではありませんが。

ラムの血液は、一般的にこのベースで使用されます。

特定の微生物を分離するために他の化合物を添加する血液寒天変異体も調製できます。たとえば、ウサギの血液、シスチン、ブドウ糖が補充されたブレインハートインフュージョン寒天を使用して、Francisella tularensisを分離できます。

一方、シスチンテルライトでは、Corynebacterium diphteriaeの分離に役立ちます。人間または羊の血液を使用できます。

最初のベータ溶血は狭いハローと見なされますが、2番目のベータ溶血ははるかに広くなります。

同様に、このベースは、バシトラシン、トウモロコシデンプ​​ン、馬の血液およびその他の強化サプリメント（IsoVitaleX）と一緒に、呼吸器サンプルからのHaemophilus sp属の分離に使用されます。

また、抗生物質クロラムフェニコール-ゲンタマイシンまたはペニシリン-ストレプトマイシンと馬の血液の組み合わせを追加すると、サブローグルコース寒天よりも収量が高くても、要求の厳しい病原菌の分離に理想的です。Histoplasma capsulatumの分離に特に有用です。

トリプチカーゼ大豆寒天

このベースは、溶血パターンをよりよく観察するため、およびオプトキン分類群やバシトラシンなどの診断テストを実行するために最も推奨されます。それは日常的に使用されている古典的な血液寒天です。

このベースを使用すると、シスチンテルライトと子羊の血液を含む、Corynebacterium diphteriae用の特別な血液寒天を準備することもできます。

同様に、この寒天と子羊の血液、およびカナマイシン-バンコマイシンの組み合わせは、嫌気性菌、特にバクテロイデス種の成長に理想的です。

ミュラーヒントン寒天

血液が補充されたこのベースは、Streptococcus sp。のような扱いにくい微生物の抗生物質を実行するために使用されます。

レジオネラ・ニューモフィラなどの細菌の分離にも役立ちます。

セイヤーマーティン寒天

この培地は、N。gonorrhoeaeが血液寒天上で成長しないため、ナイセリア属が疑われる場合、特に髄膜炎菌の血液寒天培地のベースとして理想的です。

また、髄膜炎菌に対する感受性の検査にも使用されます。

コロンビア寒天

このベースは、ヘリコバクターピロリの胃生検標本の播種に最適です。

培地は、抗生物質（バンコマイシン、トリメトプリム、アンホテリシンB、セフスロジン）でデフィブリン処理された7％のラム血液を加えて、存在する可能性のある他のタイプの細菌の増殖を制限することによって調製されます。

ヒトまたはラムの血液、ナリジクス酸、コリスチンが補充された同じベースは、Gardnerella vaginalisの分離に役立ちます。また、同じ微生物の抗生物質に対する抗菌薬感受性の評価にも理想的です。

さらに、アミノグリコシドとバンコマイシンを添加して、嫌気性菌の培養のための血液寒天の調製に使用されます。

このベースにより、溶血パターンを適切に観察できます。

ブルセラ寒天

血液寒天培地のベースとして使用されるこの培地は、ビタミンKの添加とともに嫌気性菌の培養に最適です。この場合、子羊の血を使用することをお勧めします。

カンピロバクター寒天

5％の羊の血液と5つの抗生物質（セファロチン、アムホテリシンB、トリメトプリム、ポリミキシンB、バンコマイシン）を添加したカンピロバクター寒天は、便試料中のカンピロバクタージェジュニを分離するために使用される培地です。

準備

各コマーシャルハウスには、容器の裏側に1リットルの培地を準備するための説明書が付いています。選択したベース寒天に応じて、対応する計算を行って、目的の量を準備できます。

計量して溶解する

ベース寒天は脱水（粉末）されているため、pH 7.3に調整した蒸留水に溶解する必要があります。

選択したベース寒天で示される量を計量し、フラスコ内の対応する量の水に溶解し、次に適度な熱で加熱し、すべての粉末が溶解するまで回転運動で混合します。

殺菌する

溶解したら、オートクレーブで121°Cで20分間滅菌します。

血液凝集

オートクレーブを離れるとき、フラスコは温度が40から50°Cの範囲になるまで冷却されます。人間の皮膚が支える温度であり、同時に寒天はまだ固まっていません。

これを行うには、バイアルを手で触れ、熱が耐えられる場合は、対応する量の線維素除去血液（寒天1リットルあたり50 ml）を加えるのが理想的な温度です。穏やかに混合して均質化します。

培地が非常に熱くなっているときに行われると赤血球が分解し、培地が溶血の観察に使用されないため、血液凝集の通過は重要です。

冷たすぎると、固まり、培地の表面が滑らかにならず、適切なスコアリングができなくなります。

ペトリ皿に注ぐ

血液を均質化した直後に滅菌ペトリ皿に出してください。各ペトリ皿に約20 mlを注ぎます。この手順は、層流フード内またはバーナーの近くで行われます。

ペトリ皿で血液寒天を提供するとき、気泡がプレートの表面に残ってはなりません。これが起こると、ブンゼンバーナーの炎がプレート上を素早く通過してそれらを排除します。

プレートを固化させ、使用するまで冷蔵庫（2-8°C）で保管します。血液寒天プレートを使用する前に、播種できるようにそれらを（室温に達することができるように）強化する必要があります。

準備したプレートは約1週間続きます。

参考文献

1. Bayona M. Helicobacter pyloriの培養のための微生物学的条件。Col Gastroenterol 2013改訂; 28（2）：94-99
2. GarcíaP、Paredes F、Fernándezdel Barrio M.（1994）。実用的な臨床微生物学。カディス大学、第2版。UCA Publications Service。
3. 「血液寒天」ウィキペディア、フリー百科事典。2018年12月10日、14：55 UTC。2018年12月27日、01：49 en.wikipedia.org。
4. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed アルゼンチン。エディトリアルパナメリカーナSA
5. CEDIVET研究所獣医診断センター。グアテマラ。利用可能な場所：trensa.com。
6. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。（第5版）。アルゼンチン、Panamericana SA社