TCBS寒天はこの種の主要な病原体としてビブリオ属、特にコレラ菌、腸炎ビブリオ及びビブリオ・バルニフィカスの細菌の単離および培養のために使用さ高度に選択的と差動固体培養の手段、です。
頭字語TCBSは、チオ硫酸クエン酸塩胆汁スクロースの略です。この寒天はビブリオの選択培地としても知られています。オリジナルのフォーミュラは中西が作成し、後に小林が修正しました。
ビブリオコレラを播種した市販のTCBS培地とTCBS寒天プレート。出典：写真1：著者MScが撮影。マリエルサギル/写真2：Microrao、JJMMC、ダバンゲレ、カルナータカ州、インド
それは、酵母エキス、肉ペプトン、トリプテイン、クエン酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、牛胆汁、ショ糖、塩化ナトリウム、クエン酸第二鉄、ブロモチモールブルー、チモールブルー、寒天で構成されています。
この組成により、水、食品、糞便のサンプルからビブリオ種を適切に開発できます。Vibrio hollisaeを除いて、この培地では生育しません。さらに、TCBS培地は、他の付随する細菌、特に大腸菌群の増殖を阻害することができます。
ビブリオ属のいくつかの種によって引き起こされる深刻な胃腸および腸外の問題のため、その診断は非常に重要です。人間は主に、海や汚染された水からの生または調理不足の食品を食べることによって感染しますが、創傷感染によっても感染します。
このため、臨床検査室では、液体の糞便サンプルの糞便培養試験にTCBS寒天を含める必要があります。特に患者が海水と接触した、または貝や魚を食べたと報告した場合。
基礎
酵母エキス、肉ペプトン、トリプテインは、この培地の栄養源です。ただし、TCBS寒天培地はほとんどの細菌にとって使いにくい培地です。
その高い選択性は、クエン酸ナトリウムと牛胆汁の添加により得られます。両方とも阻害剤であり、培地にアルカリ性のpHを提供し、他の種の中で、付随するフローラの成長を制限し、コレラ菌の成長を促進します。コレラ菌は酸性に非常に敏感であることに注意すべきです。
その一部として、塩化ナトリウムは浸透圧的に培地のバランスをとります。さらに、その濃度が高いため、好塩菌の増殖を促進する阻害剤としても作用します。
スクロースは、ブロモチモールブルーおよびチモールブルーpHインジケーターとともに、培地にその異なる特性を与える発酵性糖です。このため、この培地では、スクロース発酵菌株と非発酵菌株を区別することが可能です。
スクロース発酵菌株のコロニーは黄色に発色し、酸の生成により培地が緑から黄色に変わります。非発酵槽は半透明になり、培地は元の色（緑）のままです。
同様に、この培地には、硫黄源としてチオ硫酸ナトリウム、現像剤としてクエン酸第二鉄が含まれています。どちらも硫化水素（無色のガス）を生成できる細菌を示しています。H 2 Sはチオ硫酸塩から形成され、その後クエン酸第二鉄と反応すると目に見える黒い沈殿物が形成されます。
最後に、寒天は、培地にしっかりした一貫性を提供するものです。
準備
脱水した培地89 gを計量し、1リットルの蒸留水に溶解します。加熱と頻繁な攪拌により溶解を助けます。混合物は2分まで沸騰することができます。
この培地はオートクレーブされていません。溶解後、無菌プレートで直接提供されます。それらが固化すると、それらは血小板上に逆向きに配置され、使用するまで冷蔵庫（2-8°C）で保管されます。
調製後の培地はpH 8.6±0.2のままである必要があります。
脱水した培地の色はライトベージュまたはグリーンベージュで、培地の色はフォレストグリーンまたはブルーグリーンです。
サンプルを播種する前にプレートを暖めることが重要です。
使用する
ビブリオ分離のための最も一般的な標本は下痢便です。
糞便サンプルは、選択培地にすぐに播種できない場合は、Cary Blair培地で輸送する必要があります。
培養の感度を高めるために、糞便は濃縮培地としてpH 8.4のペプトン水を最大8時間通過させることができ、そこからTCBS培地に継代培養されます。
また、ビブリオの一部の株は、免疫抑制された患者に敗血症を引き起こす可能性があるため、血液培養から分離できることも考慮する必要があります。同様に、コレラ病の流行が発生した場合、海からの水と食物のサンプルを分析できます。
播種
研究サンプルの接種材料は目立つ必要があります、播種は枯渇による縞条法によって行われます。プレートは、37℃で24時間、好気性環境で培養されます。
コレラ菌の推定上のコロニーは中程度の大きさで、滑らかで不透明で、境界が細く、スクロースの発酵により色が黄色です。
V. alginolyticus、V。fluvialis、V。hareyi、V。cincinnatiensis、V。furnissii、V。metschnikovii、および一部のV. vulnificusの種も同様に成長します。腸炎ビブリオなどの臨床的に重要な他のビブリオ種はスクロースを発酵せず、オリーブグリーンのコロニーとして成長します。
腸炎ビブリオを播種したTCBS寒天プレート。ソース：isis325 Flickr
一方、オキシダーゼ（+）であるAeromonasおよびPlesiomonasの一部の株は、この培地で増殖し、臨床医を混乱させる可能性のある黄色のコロニーを形成する可能性があることを覚えておく必要があります。シュードモナス属のいくつかの株はまた、V。parahaemolyticusのような緑色のコロニーとしてオキシダーゼ（+）を成長させます。
制限
ビブリオ属に陽性であるオキシダーゼテストは、TCBS寒天から得られたコロニーから行われるべきではありません。得られた結果は偽陰性になるからです。真ん中の化合物はこのテストを強く妨害します。したがって、それは血液寒天培地のサブカルチャーから作らなければなりません。
QA
培地が良好な状態であることを証明するには、既知または認定されたコントロール株を播種し、増殖が期待される特性を満たしているかどうかを観察することをお勧めします。
これには、以下の株を使用できます。
-Vibrio cholerae-満足のいく成長（黄色のコロニー、半透明の境界）。
-腸炎ビブリオ--–満足な成長（緑色の中心と半透明の境界線を持つコロニー）。
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749-十分な成長（コロニーの周りに同じ色のハローがある黄色のコロニー）。
-Enterococcus faecalis ATCC 29212-完全または部分的な阻害（小さな黄色または半透明のコロニー）。
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-–部分的または全体的な阻害（青いコロニー）。
-Escherichia coli ATCC 25922-完全に抑制されました。
-Proteus mirabilis ATCC 43071-完全または部分的な阻害。（小さなコロニーの緑色の中心の半透明の境界）。
接種していない培地のインキュベーションは変更しないでください。
参考文献
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories。TCBS寒天。2009.利用可能：f-soria.es
- BDラボ。BD。TCBS寒天2003.bd.comで入手可能
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- Acumedia Laboratories。TCBS寒天。2016.次で入手可能：foodsafety.neogen.com
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。