ブリリアントグリーン寒天は、高度の選択性を有する固体培地です。サルモネラ属の菌株の分離にのみ使用されますが、この培地では増殖しないチフスやパラチフスなど、いくつかの例外があります。
サルモネラ属の検索は、便、水、または食品サンプルで頻繁に行われます。この意味で、この媒体は非常に有用です。この寒天は、1925年にクリステンセン、レスター、ユルゲンスによって作成され、後にカウフマンによって修正されました。
明るい緑色の寒天。発酵および非発酵コロニー。出典：MJ Richardson / Invisible Worlds展-2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License。
それは、動物組織の消化消化物およびカゼインの膵臓消化物からのプルリペプトンで構成され、酵母エキス、塩化ナトリウム、ラクトース、スクロース、フェノールレッド、明るい緑、および寒天も含まれています。
ほとんどのバクテリアにとっては住みにくい環境であることが特徴で、サルモネラ菌の増殖を促進しますが、一部の大腸菌群はその中で生存し、弱く成長することができます。
赤痢菌属はこの培地では成長せず、ネズミチフス菌もパラチフス菌も成長しないことに注意することが重要です。したがって、これらの微生物を分離する場合は、XLD寒天などの他の培地を使用する必要があります。
基礎
明るい緑の寒天
培地を構成する各成分は、寒天の特性と特性を決定する特定の機能を果たします。
プルリペプトンと酵母エキスは、微生物がその発生に必要な窒素とミネラルを吸収する栄養源です。ラクトースとスクロースは、それらを発酵できる微生物のエネルギー源です。
明るい緑色は、グラム陽性菌と多数のグラム陰性菌の増殖を妨げる阻害物質です。
塩化ナトリウムは、培地に浸透圧安定性を提供します。フェノールレッドはpHインジケーターですが、炭水化物発酵による酸の生成を検出すると色が変わります。
この培地では、乳糖とショ糖の非発酵コロニーがピンク色または透明な白色で、赤の背景に成長します。たとえば、サルモネラ属の細菌。
この培地で成長することができる乳糖またはショ糖発酵細菌は、緑がかった黄色の背景に黄緑色または黄緑色のコロニーを発達させます。たとえば、Escherichia coliやKlebsiella pneumoniaeなどです。
明るい緑の寒天（BGA）バリアント
明るい緑色の寒天の他の変種があります。ノボビオシンブリリアントグリーングルコース（NBG）寒天およびノボビオシンブリリアントグリーングリセロールラクトース（NBGL）寒天。
ノボビオシンブライトグリーングルコース寒天
トリプチカーゼ大豆寒天、クエン酸第二鉄アンモニウム、チオ硫酸ナトリウム五水和物、フェノールレッド、グルコース、ブライトグリーン、ノボビオシン、蒸留水が含まれています。
糞便サンプルからサルモネラ菌コロニーを分離するために使用されます。
この場合、明るい緑色とノボビオシンは、グラム陽性菌と一部のグラム陰性菌の成長を妨げる阻害物質です。
チオ硫酸ナトリウムは硫化物の供給源であり、クエン酸第二鉄は鉄の供給源です。どちらも黒色の硫化第二鉄沈殿物の形成を通じて硫化水素の生成を明らかにするために必要です。
グルコースは発酵性炭水化物であり、フェノールレッドはpHインジケーターです。
この培地では、サルモネラコロニーは大きく発達し、中央が赤みを帯びたハローに囲まれ、その後にはっきりとした可視領域が続きます。Citrobacter freundiiのいくつかの株は、サルモネラと同じコロニーを作ります。
ノボビオシンブリリアントグリーングリセロールラクトース寒天（NBGL）
この培地には、トリプチカーゼ大豆寒天、クエン酸第二鉄アンモニウム、チオ硫酸ナトリウム、乳糖、グリセロール、明るい緑色、ノボビオシン、蒸留水が含まれています。
この培地と以前の培地との違いは、グルコースがラクトースとグリセロールに置き換えられ、フェノールレッドが使用されないことです。
培地はサルモネラ種を分離するためにも使用され、コロニーは硫化水素の生成により黒色に発達します。
低pHはH 2 Sの形成を妨害するため、グリセロールまたはラクトースから酸を生成しないコロニーのみが十分なH 2 Sの生成を達成します。プロテウスとシトロバクター。
準備
-58グラムの市販の脱水培地を計量します。再蒸留水1リットルに加えます。混合し、数分放置し、完全に溶解するまで熱源の上に置きます。
-オートクレーブを121°Cで15分間、滅菌時間を超えないようにします。
-滅菌ペトリ皿で熱いうちに休ませて出してください。最終的なpHは6.9±0.2です。
-固化させ、使用するまで冷蔵庫に保管します。プレートを播種する前に、室温にする必要があります。
-粉末培地は緑色で、pHと事業会社に応じてオレンジブラウンまたは赤みがかった緑色になります。非常に茶色の色は、寒天が過熱されたことを示しています。
-寒天が固まったら、培地が劣化するため、リキャストはお勧めしません。
用途・用途
この培地は、特に糞便サンプルや乳製品からサルモネラ属の菌株を検索するために使用されます。
それはやさしくない環境であるため、直接サンプルを使用する場合は、豊富な接種材料を播種することをお勧めします。それ以外の場合は、この培地に播種する前に、標本の前濃縮と濃縮を行う必要があります。
サルモネラのいくつかの菌株は阻害または増殖が困難であるため、この培地にサルモネラの他の選択的寒天を加えることをお勧めします。
典型的なサルモネラ菌の特徴を持つすべてのコロニーは、その確定的な同定のために生化学的試験にかけられなければなりません。
QA
明るい緑色の寒天培地の優れた性能をテストするために、ATCC株を使用して培地上での発育を観察できます。
品質管理に使用される最も頻繁な株は、サルモネラエンテリティディスATCC 13076、サルモネラチフィムリウムATCC 14028、プロテウスミラビリスATCC 43071、クレブシエラニューモニエATCC 700603、大腸菌ATCC 25922、シゲラフレックスネリATCC 12022、黄色ブドウ球菌ATCC 6538です。
最初の3つは赤い背景にピンクがかったまたは透明な白いコロニーを与えるはずです。発育が良好なサルモネラ菌と、ほとんどまたは定期的に増殖するプロテウス。
クレブシェラとエシェリヒアの場合、背景が黄色の黄緑色のコロニーが予想され、赤痢菌とブドウ球菌の場合はそれらを阻害する必要があります。
脱水した培地は非常に吸湿性が高いため、乾燥した場所で室温で保存する必要があります。
参考文献
- Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SAブリリアントグリーン寒天。2009年
- ブリタニア研究所。明るい緑色の寒天。2015。
- BDラボ。BDブリリアントグリーン寒天。2013。
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。（第5版）。アルゼンチン、Panamericana SA社
- フォーブスB、サームD、ワイスフェルトA.2009。ベイリー&スコット微生物学的診断。12 ed アルゼンチン。エディトリアルパナメリカーナSA