リン酸緩衝液、リン酸緩衝化生理食塩水またはBPSその機能で等張緩衝液、であるために天然の生物学的環境（生理学的）に近いようなpH及び浸透圧を維持します。頭字語PBSは、リン酸緩衝生理食塩水を表します。
PHおよび浸透圧は、特定の実験室プロトコルで制御する必要がある2つの非常に重要な側面です。pHの場合、特に生化学反応では、反応物質が不適切なpHにあると変化するか、実行されない可能性があるため、制御することが不可欠です。
2つの異なるpHのPBSリン酸緩衝生理食塩水。出典：Pixinio.com
一方、細胞の原形質膜は、それらが含まれる溶質の濃度に応じて反応するため、浸透圧の制御は、特に生細胞を扱う場合に不可欠です。
細胞が高張培地に移されると、水勾配が溶質濃度の高い側に輸送されるため、細胞は脱水状態になります。一方、細胞を低張培地に入れると、細胞は溶解するまで液体を吸収します。
そのため、PBSバッファーは、インビトロでの細胞の維持を必要とする実験プロトコルに使用されます。このようにして、細胞は損傷しません。
PBSは、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムなどの塩の組み合わせで構成されています。PBSの構成は、プロトコルによって異なります。
基礎
基本的にリン酸緩衝液の機能は、体内の電解質濃度と同様の電解質濃度とともに一定の生理的pHを維持することです。
この環境では、生理学的条件が可能な限りシミュレートされるため、細胞は安定した状態を保つことができます。
必要に応じて、他の化合物を元のPBS製剤に追加できます。たとえば、バッファーへのEDTAの追加は、交差非互換性テストで赤血球を洗浄するのに役立ちます。
EDTAは、血清に存在する補体C1の一部が切断されて赤血球に溶解するのを防ぎます。つまり、誤った非互換性の結果を回避します。さらに、EDTAは細胞の分離を助けます。
準備
PBSリン酸緩衝生理食塩水の調製のために秤量しなければならない塩の量は、調製する必要がある量に依存します：
-リン酸緩衝生理食塩水原液（10X PBS）
1リットルの溶液の場合：
計量する：
NaCl 80.6 g、
2.2 gのKCl、
11.5 gのNa 2 HPO 4、
2.0 g KH 2 HPO 4
準備テクニック
重い塩をビーカーに入れ、十分な水（80％）を加え、塩が溶解するまでマグネチックバーを備えた攪拌プレート上で混合します。
マグネチックバー付きの攪拌プレートを使用したPBSの調製。ソース：ユーザー：Ruhrfisch、ウィキペディア。com
溶解していない粒子を取り除くためにろ過します。孔径0.45 µmのフィルターを使用してください。オートクレーブし、蓋付きのガラス瓶の層流フード内で無菌的に分配します。
10X溶液（濃縮）はpHを調整しません。1X PBSバッファー濃度（1:10希釈）に希釈すると、調整が行われます。
-リン酸緩衝生理食塩水（1X PBS）
1X PBSは、対応する量の各塩を計量して直接調製するか、または原液（1:10）を滅菌蒸留水で希釈して調製できます。
-1リットルの1X PBSリン酸緩衝生理食塩水を直接調製するには、以下の重量を量ります：
NaCl 8.06 g、
0.22 gのKCl、
1.15 gのNa 2 HPO 4、
0.20 gのKH 2 HPO 4
準備テクニック
濃縮液の説明に従ってください。その後、pHを調整する必要があります。これを行うには、pHを測定し、結果に応じて、酸（HCl）または塩基（NaOH）を使用して、必要に応じてそれぞれ7.4になるまでpHを下げたり上げたりします。
酸または塩基は、pHメーターを使用して溶液のpH値を監視しながら、1滴ずつ追加されます。必要に応じて、ろ過、オートクレーブ、および無菌的にコニカルチューブまたはジャーに分配します。
-10Xストック溶液から1X PBSを調製するには：
1:10希釈します。たとえば、1リットルの1X PBSを準備するには、100 mlのストック溶液を測定し、700 mlの滅菌蒸留水を追加します。pHを調整し、1000mlまでの水の量を満たします。
調製したPBSバッファーは無色透明です。
毎日のPBSは室温で、残りは冷蔵庫で保存できます。
pH調整のためのソリューション
HCl
1モルのHCL（塩酸）100 mlの場合。
91 mLの蒸留水を測定し、250 mLビーカーに入れます。
8.62 mLの濃HClを測定し、水を入れたビーカーにゆっくりと追加します（逆にしないでください）。強酸（腐食性の強い物質）を取り扱う場合は、適切な生物安全対策を講じてください。
ガラス内部に磁気バーが付いた攪拌プレートを使用して、5分間混合します。100ミリリットルのフラスコに移し、で100mlに作る蒸留H 2 O.
水酸化ナトリウム
100 mlのNaOH（水酸化ナトリウム）10モル。
40 mLの蒸留水を測定し、250 mLビーカーに入れます。40 gのNaOHを測定し、水に加える。ガラス内の磁気バーで攪拌プレートを使用して混合します。
100mlのメスフラスコに移し、蒸留水でマークまで埋めます。この反応は発熱性である（それは熱の形でエネルギーを放出する）ので、バイオセーフティ規制に準拠してください。
他の量のリン酸生理食塩水を準備する場合は、次の表を参照してください。
出典：«UASLP医学部、ウイルスおよびヒトゲノミクス研究所»
用途
主に細胞生物学、免疫学、免疫組織化学、細菌学、ウイルス学、および研究室で使用されます。
間接免疫蛍光法の洗浄液として、遠心分離（赤血球）による細胞洗浄、分光偏光解析法、細菌バイオフィルムの定量化、ウイルスの細胞培養の維持における細胞単層洗浄に最適です。モノクローナル抗体の特性評価のための技術。
また、細胞や組織の輸送、細胞計数用希釈剤、細胞酵素（トリプシン）の調製、生体分子乾燥法用希釈剤、その他の試薬の調製にも使用されます。
一方、Martinらは2006年に、PBSが科学捜査研究所、特に膣塗抹標本からの精子の回収、または陰茎塗抹標本からの膣細胞の回収に役立つことを実証しました。このようにして、性的関係があった場合に確立することができます。
制限事項
-一部のPBSバッファーには、防腐剤としてアジ化ナトリウムと呼ばれる物質が含まれています。この化合物は、鉛や銅と接触すると爆発性物質を生成する可能性があります。このため、この試薬を排水管に廃棄する場合は、特別な注意が必要です。この方法で廃棄する場合は、できるだけ希釈するために大量の水を追加する必要があります。
-亜鉛はリン酸塩緩衝液に添加しないでください。塩が沈殿するためです。
-Wangenと2018年の共同研究者は、PBSの使用は、末梢血から抽出された急性骨髄性白血病（AML）の初代細胞の洗浄には適していないと判断しました。タンパク質。
したがって、彼らは、初代AML細胞は液体窒素での保存後にPBSで洗浄すべきではないと決定しました。
参考文献
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