- 基礎
- Voges-Proskauerのテスト基準
- 証拠開示と解釈の根拠
- 準備
- ミディアムMR / VP
- Voges A試薬
- Voges B試薬
- Voges-Proskauerテスト手順
- テスト開発
- 使用する
- QA
- 参考文献
フォゲス-Proskauerの試験は、腸内細菌科に属する細菌の同定を助けるために使用される生化学的試験です。特に、大腸菌の菌株をクレブシェラやエンテロバクターと区別するのに特に役立ちます。
テストは、頭字語RM / VPでよく知られているMethyl Red – Voges Proskauerと呼ばれる液体培地で行われます。この培地は、緩衝化ポリペプトン、グルコース、リン酸二カリウム、および蒸留水で構成されています。
Methyl Red-Voges Proskauer（RM / VP）商用培地/ VPテストはそれぞれ陽性と陰性です。出典：著者MScが撮影した写真。Marielsa Gil / Sudipta.nov15、ウィキメディア・コモンズ
現在のRM / VP培地は、元々は低濃度のペプトンとグルコースを含んでいたクラークとラブスの培地を変更したものです。したがって、ポジティブなVoges-Proskauer反応に必要な水素イオンはほとんど生成されませんでした。
この試験は、微生物がブチレングリコール経路を介してグルコースを使用し、酸素とアルカリ性pHの存在下でアセトインと呼ばれる中性の最終生成物を形成する能力に基づいています。
RM / VP媒体では、Voges-Proskauerテストを明らかにできることに加えて、メチルレッドテストも明らかにできます。
基礎
Voges-Proskauerのテスト基準
培地中に存在するプルリペプトンは、細菌の増殖に不可欠な栄養要件を提供します。その一部として、グルコースが主な化合物です。多くの細菌は、グルコースを代謝してピルビン酸を形成する能力を持っています。
ピルビン酸はグルコース代謝の中間点であり、そこから各微生物は異なる経路をとることができます。乳酸、酢酸、ギ酸、コハク酸などの混合酸を形成するものもあれば、2,3-ブタンジオールなどの中性生成物を形成するものもあります。
Voges-Proskauerテストは、好気性条件下で2,3-ブタンジオールの中間生成物であるアセチルメチルカルビノール（アセトイン）を形成する微生物の能力を明らかにします。
アセトインは還元され、2,3-ブタンジオールを形成しますが、この反応は可逆的であるため、2,3-ブタンジオールが酸化されると、アセトインが形成されます。したがって、酸素は不可欠です。
リン酸二カリウムは、pH 6.9±0.2で混合物を緩衝する緩衝液です。
証拠開示と解釈の根拠
反応を実証するには、開発は、Voges AとVoges Bとして知られている2つの試薬（Barrit試薬）を使用して実行する必要があります。
ヴォージュAはα-ナフトールの5％溶液であり、ヴォージュBは40％水酸化カリウム製剤です。水酸化カリウムが利用できない場合は、40％水酸化ナトリウムで置き換えることができます。
Α-ナフトールは、反応色の強度を高め、テストの感度を高める触媒です。培地が酸素と接触するようにチューブを振とうしながら、常にα-ナフトールを最初に追加する必要があります。このようにして、存在するアセトインは酸化されてジアセチルになり、2,3-ブタンジオールは酸化されてアセトインを形成し、これをジアセチルに渡します。
これは、α-ナフトールがジアセチルに結合する方法であり、ジアセチルは次に、アミノ酸アルギニンに存在するグアニジン核に加わり、後者はプルリペプトンに由来します。
水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウムは、CO 2を吸収し、ペプトンと反応します。この反応により、サーモンピンク色が形成されます。チューブをよく振ると、はっきりと見えます。
色がすぐに出るようにするには、適切な量のジアセチル、ペプトン、α-ナフトールを混合する必要があります。これが起こらない場合は、解釈する前にチューブを15分間休ませます。
テストは通常、淡いピンク色が見える2〜5分後に陽性になります。30分〜1時間放置すると、色の濃さが最大になります（濃い赤）。
スープが黄色に変わると、陰性のテストが表示されます。1時間後、テストが陰性の場合、水酸化カリウムとα-ナフトールの反応の結果として銅色が形成されることがあります。
準備
ミディアムMR / VP
脱水した培養液17 gを量り、1リットルの蒸留水に溶かします。5分間放置します。沸騰するまで加熱して完全に溶かします。3〜4 mlをチューブに入れ、オートクレーブで121°Cで15分間滅菌します。
脱水された培地はベージュ色で、準備された培地は薄い琥珀色です。
培地の最終pHは6.9±0.2です。
Voges A試薬
α-ナフトール5 gを量り取り、エチルアルコール（絶対）50 mlに溶解します。次にエチルアルコールを100 mlに達するまで追加し続けます。
Voges B試薬
水酸化カリウム40 gを量り取り、ビーカー内の蒸留水50 mlに溶解します。調合物が溶解すると温度が急激に上昇するため、ガラスを冷水浴に入れて温度を制御する必要があります。
溶液が冷めたら、メスフラスコに移し、蒸留水で100 mLにします。
Voges-Proskauerテスト手順
Voges-Proskauerテストを実行するには、RM / VPブロスに、研究対象の微生物を純粋培養から18〜24時間接種します。
接種材料は非常に濃密であってはなりません。35-37°Cで24〜48時間インキュベートしますが、数日間のインキュベーションが必要になる場合があります。CowanとSteelは、腸内細菌科のすべての陽性Voges-Proskauer（VP）種を検出するのに必要な最短のインキュベーション時間は5日であるとの見解を示しています。
テスト開発
1 mLのアリコートをチューブに分け、次のように展開します。12滴（0.6 mL）のVoges A試薬と4滴（0.2 mL）のVoges Bを置きます。混合して通気し、沈殿させます。通訳する前に5〜10分間。ただし、それでも検査結果が陰性の場合は、30分から1時間後にチューブを静置して観察します。
ピンクがかった赤色の外観は、Voges-Proskauer反応が陽性であることを示します。培地が黄色のままである場合、反応は陰性です。
示されている順序と数量で開発者を追加することは、偽陰性を回避するために不可欠です。
使用する
Voges-Proskauer検定は、VP陰性である、特にクレブシエラ属、エンテロバクター属、セラチア属などのVP陰性である大腸菌株を区別するのに役立ちます。
出典：Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
QA
コントロール株は、大腸菌ATCC 25922、クレブシエラニューモニエATCC 700603、プロテウスミラビリスATCC 43071、サルモネラチフィムリウムおよびエンテロバクタークロアカエATCC 13047を含む、調製した培地の品質をテストするために使用できます。
予想される結果は、K。pneumoniaeとE. cloacaeに対してのみポジティブなVoges-Proskauer反応です。残りは否定的な反応を与えます。
参考文献
- ブリタニア研究所。MR-VP中。2015.次で入手可能：www.britanialab.com
- Microkit Laboratories。M-Ident Voges Proskauer。2014.利用可能：http://www.medioscultivo.com
- Mac Faddin J（2003）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的検査。第三版 社説パンアメリカーナ。ブエノスアイレス。アルゼンチン。
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断。第5版 エディトリアルPanamericana SAアルゼンチン。