染色カプセルは、カプセルと呼ばれるある種の細菌および酵母を囲む応力多糖構造の性質を有する差動染色技術です。カプセル化された微生物によって引き起こされる特定の病理の診断を支援するために臨床検査室で使用されます。
また、医学、生物分析、看護、細胞工学などの健康科学のキャリアの学生にこの形態学的構造を実証するための研究所の教育にも使用されます。
Klebsiella pneumoniaeの塗抹標本は、カプセル染色で染色されています。サフラニンによるインドのインク法。出典：А.А.В
それを持っている微生物のカプセルの存在を示すためのいくつかの簡単な技術があります、それらは：陰性染色、Anthony染色、および前の2つを組み合わせたバリアントです。
酵母Cryptococcus neoformansの存在が疑われる場合、ネガティブ染色は主にCSFサンプルで使用されます。この酵母は髄膜炎の一般的な原因です。
この技術は、ニグロシンまたはインドのインクを使用し、製剤の背景と微生物の侵入できないカプセルとのコントラストを作成することに基づいています。背景が暗くなり、カプセルは無色になります。このようにして、この構造が明らかになります。
アンソニー法に関しては、クレボシエラ・ニューモニエ、ストレプトコッカス・ニューモニエ、ナイセリア・メニンギティディスなどの細菌の多糖構造を実証するために、教育研究室で主に使用されていると言えます。
これらの微生物の同定を可能にする他の日常的なテストがあるので、診断目的でこの技術を使用することは非常にまれです。
基礎
カプセルは多糖類の性質の強力な構造です。これは微生物を食作用から保護するため、侵入が難しい構造です。
そのため、カプセルの染みはコントラストに基づいています。カプセルは無色のままですが、着色剤は製剤の底を汚します。
したがって、これらのテクニックを使用すると、カプセルを簡単に認識できます。微生物がカプセルを持たない場合、すべてが同じ色に染色されるため、このタイプの着色では区別できません。
カプセルを着色するために使用されるすべての技術は、異なる染料や手順を使用しているにもかかわらず、同じ理論的根拠を持っています。
テクニックパー
-アンソニー染色
アンソニーの染みはクリスタルバイオレットを染みとして使用しています。これは、細菌の体と背景を紫色に染色します。
一方、20％硫酸銅を使用しています。これは洗浄液として機能します。つまり、プレパラートから余分な紫色の結晶を取り除き、カプセルを透明にしますが、細菌の体や背景の色は失われません。
材料
-虹色のミルク。
- 滑り台。
-1％バイオレットクリスタル。
-20％硫酸銅。
-光学顕微鏡。
-液浸油。
処理する
この手法は次の要素で構成されています。
- 玉虫色のミルクで微生物を36時間培養します。
- スライドの最後に培養液を1滴置き、その隣にすみれ色のガラスを1滴置き、別のスライドの端と混ぜて広げます。
- 風乾し、熱にさらさないでください。
- 20％硫酸銅溶液で洗浄し、自然乾燥させます。
- 液浸対物レンズを備えた顕微鏡で観察します。スプレッドの終わりに向かって検索します。
カプセルを損傷するため、固定や乾燥のために熱を使用しないことが重要です。また、水で洗わないでください。
解釈
虹色の牛乳は、微生物が顕著なカプセルを発達させるために必要な栄養素を提供するので、優れた培地です。
一方、虹色のミルクは、バクテリアの体と一緒に紫色に染まる厚くてコンパクトな底を形成しますが、微生物を囲むカプセルは無色のままです。そのため、菌体の周囲にハローがはっきりと見えます。
アンソニー染色で染色された肺炎桿菌塗抹標本の顕微鏡観察のグラフィック表現。出典：著者MScにより作成。マリエルサ・ギル。
利点
それは実行する簡単なテクニックです。固定する必要はありません。
また、他の培養培地を使用することもできるが、より目立つカプセルを提供するという利点があるため、乳培地が好ましいことに留意されたい。
短所
これはネガティブ染色よりも労働集約的な手法であり、その視覚化は準備が完全に乾燥するのを待つ必要があります。
-ネガティブ染色
材料
-スライドをスライドさせます。
-微生物を含む培地。
-墨汁またはニグロシン。
-光学顕微鏡。
-生理食塩水。
処理する
カバースリップの上に生理食塩水のドロップを置き、微生物培養のごく一部を溶解します。準備が厚すぎないことが重要です。次に、中国のインクまたはニグロシンを一滴置き、混ぜます。
カバースリップシートは、液体をオーバーフローせずに準備の上に配置されます。顕微鏡下で、まず10倍の対物レンズに焦点を合わせ、次に40倍に移動して観察します。
この手法は、CSFサンプルに直接使用することもできます。つまり、微生物培養液を1滴置く代わりに、CSFを1滴置きます。
利点
これは、実行するのに簡単な方法であり、同時に安価です。製剤の固定や乾燥は必要ありません。
短所
欠点は、準備が乾く前に顕微鏡で観察する必要があることです。これが起こると、微生物が収縮し、視覚化が困難になります。
一方、白血球はしばしば酵母と混同されるため、分析者が経験の浅い場合、偽陽性が発生する可能性があります。
チャイニーズインクまたはニグロシン法によるイーストカプセルの観察は、培養で示されるまで、クリプトコッカスネオフォルマンスの推定診断と見なす必要があります。
これは、カンジダ属やロドトルラ属などのクリプトコッカスネオフォルマンスだけでなく、他の種のクリプトコッカスなど、髄膜炎の原因となる可能性のある他の酵母があるためです。
解釈
カプセル化された微生物がある場合、暗い背景が観察され、透明な物体が液体に浮かんでおり、カプセルの存在を強調しています。
墨で染色されたクリプトコッカスネオフォルマンスカプセル。ソース：写真クレジット：コンテンツプロバイダー（秒）：CDC /博士 リーナー・ヘイリー
-インドのインク技法
この手法は、ニグロシンでも実行できます。これは、前に説明した手法の組み合わせです。この技法では、クリスタルバイオレットとインディアンインクまたはニグロシンを使用します。
細菌の体は負に帯電しているため、クリスタルバイオレットから紫に変わりますが、ニグロシンは塗抹標本の底を着色します。細菌がカプセルを持っている場合、それは微生物の周りの透明なハローとして表示されます。
クリスタルバイオレットは、サフラニン、ベーシックフクシン、メチレンブルーのいずれかの色に置き換えることができます。
材料
-バイオレットグラス。
-ニグロシンまたはインディアンインク。
-スライドをスライドさせます。
-顕微鏡。
処理する
-培地で微生物を培養します。
-スライドの最後に培養液を1滴置き、その隣にインディアンインクまたはニグロシン結晶を1滴置き、別のスライドの最後に混ぜて広げます。
-空気乾燥し、熱に固定しないでください。
-紫色の結晶溶液で1分間覆い、蒸留水で洗浄しますが、非常に繊細に（ソフトジェット）、戸外で乾燥させます。
-液浸対物レンズを顕微鏡で観察します。スプレッドの終わりに向かって検索します。
解釈
紫色の菌体と暗い背景が見られます。カプセルが存在する場合、細菌の周りは無色に見えます。
参考文献
- コバドンガA、シロニズM、セラーノS。微生物学の基本的な技術。細菌の観察。Reduca（生物学）。微生物学シリーズ。2010; 3（5）：15-38。D
- López-JácomeL、Hernández-DuránM、Colín-CastroC、Ortega-PeñaS、Cerón-GonzálezG、Franco-Cendejas R.微生物学研究所の基本的な汚れ。Mediagraphic.org。2014; 3（1）：10-18。入手可能：medigraphic.com
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