寒天ベアードパーカーは固体培地の選択と差動文化です。これは、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌（黄色ブドウ球菌）の検出とカウントのために1962年に作成されました。
カゼインの膵臓加水分解物、肉エキス、酵母エキス、塩化リチウム、グリシン、ピルビン酸ナトリウム、テルル酸カリウム、寒天、卵黄の乳液で構成されています。
ベアードパーカー寒天上の典型的な黄色ブドウ球菌のコロニー。ソース：デイジージョン
ベアードパーカー寒天は、テルライトを減らし、レシチナーゼを生成する黄色ブドウ球菌の能力に基づいています。両方のプロパティは、この種の特定の特性を持つコロニーを生成します。したがって、この微生物の検出に非常に効果的です。
黄色ブドウ球菌の典型的なコロニーは黒色または濃い灰色で、無色の境界線とそれらを囲む明るいハローがあり、他の微生物と区別されます。この病原菌は、臨床サンプル、水、化粧品、および生または調理済み食品に含まれています。
その診断または検出は、とりわけ食中毒、熱傷性皮膚症候群、トキシックショック症候群、膿瘍、髄膜炎、敗血症、心内膜炎など、さまざまな病状のために最も重要です。
基礎
栄養力
カゼイン、肉エキス、酵母エキスの膵臓加水分解物は、一般的な微生物の発生に必要な栄養素、ビタミン、ミネラルの供給源であり、ピルビン酸とグリシンは、黄色ブドウ球菌の特定の成長を促進する化合物です。
選択的
ベアードパーカー寒天は、黄色ブドウ球菌の発生を促進しながら、付随する植物相の成長を阻害する物質を含んでいるため、選択的です。阻害化合物は、塩化リチウムとテルル酸カリウムです。
微分
この培地は、黄色ブドウ球菌をコアグラーゼ陰性ブドウ球菌の残りから区別することを可能にします。黄色ブドウ球菌はテルライトを還元して金属黒色テルルを遊離させ、黒色または濃い灰色のコロニーを形成する能力があります。
同様に、卵黄は酵素レシチナーゼとリパーゼの存在を示す基質を提供します。黄色ブドウ球菌はレシチナーゼ陽性であり、したがってコロニーの周りに明確なハローが観察され、レシチンが加水分解されたことを示します。
この意味で、この寒天上に光沢のある黒色または濃い灰色のコロニーが出現し、周囲に明るいハローが見られる場合は、黄色ブドウ球菌の存在を示しています。
沈殿領域が形成される場合、それはリパーゼ活性を示しています。黄色ブドウ球菌のいくつかの株はリパーゼ陽性で、他は陰性です。
黄色ブドウ球菌がリパーゼ陽性である場合、黒色または濃い灰色のコロニーの周りに不透明な領域が観察され、次にレシチナーゼの作用により明るいハローが観察されます。
この培地で増殖可能な黄色ブドウ球菌以外の細菌のコロニーは、周囲のハローのない無色または茶色のコロニーを形成します。
非定型の黒いコロニーは、無色の境界線がある場合とない場合がありますが、明るいハローはありません。これらのコロニーは考慮に入れるべきではありません、それらは黄色ブドウ球菌に対応していません。
準備
卵黄乳剤
新鮮な鶏の卵を取ってよく洗い、70％アルコールに2〜3時間入れます。次に、卵を無菌状態で開き、白を卵黄から注意深く分離します。その後、50 mlの卵黄を取り、50 mlの滅菌生理溶液と混合します。
テルライトカリウム1％w / v
一部の商業施設では、すぐに使用できる1％テルル酸カリウムを販売しています。培地が固まる前に培地に加えます。
実験室でこの溶液を調製するために、1.0 gの亜テルル酸カリウムを計量し、水の一部に溶解します。その後、水量は100mlに達するまで完了する。溶液はろ過法で滅菌する必要があります。
培地の調製
60 gの脱水培地を量り取り、940 mlの蒸留水に溶解します。混合物を約5〜10分間放置します。
溶解プロセスを改善するために、培地を頻繁に攪拌して熱を加えます。少し沸騰させます。121°Cで15分間オートクレーブで滅菌します。
45°Cの温度に達するまで放置し、50 mlの卵黄エマルジョンと10 mlの1％テルライトを加えます。よく混ぜ、15-20 mlを滅菌ペトリ皿に注ぎます。
固化させ、プラークで裏返して注文し、使用するまで冷蔵庫に保管します。
調製した培地の最終pHは6.8±0.2でなければなりません。
サンプルを播種する前に、プレートが室温になるまで待ちます。筋を付けるか、Drigalskiヘラで表面を播種して、プレートをシードします。
脱水した培地の色は薄い黄褐色で、調製した培地の色は薄い琥珀色です。
使用する
臨床サンプル
臨床サンプルは直接播種され、プレートの一端で材料の一部が排出され、そこから消耗によって縞が出ます。35〜37℃で24〜48時間インキュベートします。
食品サンプル
10 grの食品サンプルの重さを量り、90 mlの0.1％ペプトン水で均質化します。必要に応じて、そこから希釈液を調製します。0.3 mlの調製済み溶液を3回プレートに接種し、Drigalskiスパチュラで表面に播種します。35〜37℃で24〜48時間インキュベートします。
この方法論は、得られた典型的なコロニーを数えることを可能にし、黄色ブドウ球菌の存在がサンプルの1 g / mlあたり10 CFUを超えると疑われる場合に理想的です。
黄色ブドウ球菌の量が少ないと思われる場合、または付随するフローラが多い場合は、サンプルを10％NaClおよび1％ピルビン酸ナトリウムを含むトリプチカーゼ大豆ブロスで濃縮することをお勧めします。これは黄色ブドウ球菌の成長を促進し、付随するフローラの発達を阻害します。濁ったチューブがベアードパーカー寒天に播種されます。
水サンプル
滅菌された真空ろ過システムで、100 mlの研究水がろ過され、続いて0.4ミクロンの微多孔膜が滅菌ピンセットで取り除かれ、ベアードパーカープレート上に置かれます。35〜37℃で24〜48時間インキュベートします。この手法は、典型的な黄色ブドウ球菌のコロニーのカウントを可能にします。
QA
Staphylococcus aureus ATCC 25923、Staphylococcus aureus ATCC 6538、Staphylococcus epidermidis ATCC 12228、Escherichia coli ATCC 25922、またはProteus mirabilis ATCC 43071などの既知の株を使用して、ベアードパーカー寒天の品質を評価できます。
黄色ブドウ球菌ATCC株の場合、テルライトを低減することが知られており、それらはリパーゼおよびレシチナーゼ陽性です。したがって、満足のいく開発があり、中心が黒で境界が無色で、不透明なハローと最も外側のハローが明るい凸状のコロニーが成長しているはずです。
S. epidermidisは、この培地上では発育が悪く、明るい灰色のない茶色がかった灰色から黒色のコロニーが見られます。
大腸菌およびP.ミラビリスについては、完全にまたは部分的に阻害されると予想される。成長した場合、茶色のコロニーは不透明な領域や明るいハローなしで発達します。
推奨事項
-テルライトと卵黄を加えた後、培地を加熱しないでください。
-卵黄乳剤の調製とその途中での追加は、汚染の非常に脆弱なステップです。細心の注意を払う必要があります。
-黄色ブドウ球菌の典型的なコロニーが存在する場合は、その株にコアグラーゼ試験を実施して確認する必要があります。
-コアグラーゼで疑わしい結果が出た場合は、他の確認テストを行う必要があります。
-典型的な黄色ブドウ球菌のコロニーの存在を非典型的な黒いコロニーと混同しないように注意してください。
参考文献
- ウィキペディアの貢献者。ベアードパーカー寒天。ウィキペディア、フリー百科事典。2017年3月15日19:36 UTC。利用可能：wikipedia.org/ 2019年2月18日アクセス。
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