ECブロスまたはブロス大腸菌は、選択的液体培地です。この培地は、総大腸菌群と糞便大腸菌群をカウントするための標準メソッドで、主な病原体が大腸菌である水と食品のサンプルで最も可能性の高い手法（MPN）で推奨されています。
ECブロスは、トリプテイン、乳糖、胆汁酸塩、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、塩化ナトリウム、および水で構成されています。その処方は、総および糞便性大腸菌群の成長を促進し、他の付随する微生物の発生を防ぐように戦略的に設計されています。
ECブイヨンの準備の比喩的な表現。出典：Pixabay.com
Escherichia coliバクテリアは、水や食物源に汚染物質として存在する主な糞便性大腸菌であり、重要な胃腸障害の原因となっています。
Escherchia coliには多くの血清型があることに注意してください。それらの中で、我々は腸管出血性（EHEC）、腸内侵襲性（EIEC）、腸病原性（EPEC）、腸毒素原性（ETEC）、および腸内凝集性（EAEC）に言及することができます。
この媒体には、それらすべての開発を可能にする機能がありますが、それらを互いに区別することはできません。これには追加のテストが必要です。
総および糞便性大腸菌群を検索するための最も可能性の高い数（MPN）による水および食品の微生物学的研究は、いくつかのフェーズで構成されるプロトコルです。推定段階、確認段階、完了段階。ECブイヨンは確認段階で使用されます。
基礎
ECブロス
EC培地は、大腸菌群が含まれる総および糞便性大腸菌群の最適な発達に必要な栄養素を提供することに基づいています。
これらの栄養要素は、ペプチドとアミノ酸の優れた供給源であるトリプテインによって提供されます。さらに、エネルギーを提供し、細菌がガスを生成するかどうかを示すことができる発酵性炭水化物であるラクトースも含まれています。
一方、培地は、サンプルに存在する可能性のあるグラム陽性微生物の増殖を阻害するため、選択的な特性を提供する胆汁酸塩を含んでいます。
同様に、リン酸二カリウムとリン酸一カリウムは、pHバランスシステムとして機能します。ブロスに含まれる乳糖が微生物によって発酵されるときに培地を酸性化する傾向があるため、このシステムが必要ですが、これはリン酸塩によって補われます。
したがって、制御されていない酸性度は、求められる微生物の適切な発生に影響を与える可能性があるため、これらの要素は不可欠です。
塩化ナトリウムは媒体を浸透圧的に安定化しますが、水は存在する溶質の溶媒であり、媒体に液体コンシステンシーを提供します。
ノボビオシン修飾ECブロス
OkrendとRoseは、ノボビオシン修飾ECブロスと呼ばれるさまざまなECブロスを作成しました。変更は、胆汁酸塩の濃度を減らし、20 mg / dlのノボビオシンを加えることでした。
この変更は、腸管出血性大腸菌株の回復を促進します（O157：H7）。
この細菌血清型は、溶血性尿毒症症候群（HUS）につながる可能性のある重度の出血性大腸炎を引き起こします。これは、急性腎不全を引き起こす可能性があり、高齢者では死亡率が最大50％に達する可能性があります。
汚染された食物の消費のためにこの細菌によって毎年引き起こされる罹患率と死亡率のため、米国農務省（USDA）はこの培地の使用を強く推奨しています。
準備
ECブロス
脱水した培地37.4 gを計量し、1リットルの蒸留水に溶かします。混合物を5分間放置する必要があります。その後、熱源では、頻繁に攪拌することで溶解を終了します。
溶解すると、ダーラム管を内部に備えた前処理済み試験管に分配されます。121°Cで15分間オートクレーブで滅菌します。
培地のpHは6.9±0.2です。脱水後の培地の色はベージュで、調製した培地は淡い琥珀色です。
ブロスは使用するまで冷蔵庫に保管されます。使用時には、ブロスは室温である必要があります。
一方、ECブロスは2倍の濃度で調製することもできます。
ノボビオシン修飾ECブロス
36.7 gの脱水培地を量り取り、1リットルの水に溶解します。残りの準備は上記と同じです。
使用する
総および糞便性大腸菌分析
ECブロスは、NMP法による大腸菌群の研究の確認段階に理想的です。水サンプルだけでなく、医薬品や食品でも同様です。
推定段階で得られた混濁したガス生成乳糖ブロスは、2％胆汁ブライトグリーンブロスとECブロスに再播種する必要があります。
全大腸菌群の場合、ECブイヨンは37°Cで24〜48時間好気的に培養され、糞便の大腸菌群の場合は44°Cで24〜48時間好気的に培養されます。
どちらの場合も、次のように解釈されます。ガス生成を伴う混濁チューブは陽性と見なされます。24時間以内にガスが発生しない場合、インキュベーションは最大48時間続きます。
EC陽性培養液は、Mac Conkey寒天、EMB寒天、遠藤寒天などの選択培地への再播種で構成される完全確認フェーズに移行します。
使用する培養液がノボビオシン修飾ECである場合、陽性チューブをソルビトールを含むMac Conkey寒天に再播種することをお勧めします。
QA
調製した培地の各バッチは品質管理されている必要があります。まず、培地の無菌性を評価する必要があります。この意味で、1つまたは2つのブロスは、接種なしで好気性菌に37℃で24時間インキュベートされます。期待される結果は、濁りや色の変化がない透明な培養液です。
次に、既知の菌株の増殖を評価する必要があります。これには、大腸菌、ATCC 8739、大腸菌ATCC 25922、ネズミチフス菌ATCC 14028を使用できます。
すべての場合において、大腸菌のガス産生を伴う曇りのある培養液を観察し、サルモネラ菌のガスは観察しないことで、満足のいく微生物の発生が期待されます。
コントロールに含めることができる他の株は次のとおりです。Staphylococcusaureus ATCC 25923、Enterococcus faecalis ATCC29212。これらの株は完全に阻害されている必要があります。
推奨事項
-大腸菌群の研究には、ダーラム管の配置が不可欠です。
-滅菌前に培地を試験管に分配します。滅菌後は使用しないでください。
・培地が生後3ヶ月以上の場合は使用しないでください。
・培地の通常の特性に変化が見られる場合は使用しないでください。
参考文献
- ブリタニア研究所。ECミディアム。2015.次で入手可能：britanialab.com
- 腸管出血性大腸菌。食糧安全保障と公衆衛生センター。2010.次で入手可能：cfsph.iastate.edu
- ネオジェン株式会社。EC媒体。で利用可能：foodsafety.neogen.com
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- Jure M、CondoríS、Leotta G、Chinen I、Miliwebsky E、Allori C、Auret O、de Castillo M.コンセプシオン州の肉屋の新鮮なひき肉から志賀毒素を産生する大腸菌の検出、分離、特性評価トゥクマンから。 Microbiol Rev Arg; 2010、42（4）：284-287。 www.scielo.orgで入手できます。