大豆ブロストリプトンを非選択液体培地、栄養価の高い、です。汎用性が高いため、微生物学研究室で最も広く使用されている液体培地の1つです。
これは、トリプティックソイブロスまたはダイジェストカゼインソイの名前でも知られており、英語のトリプティックソイブロスの略語はTSB、スペイン語の略語はCSTです。その組成のため、その用途は非常にさまざまです。トリプテイン、大豆ペプトン、塩化ナトリウム、リン酸二カリウム、ブドウ糖で構成されています。
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853株を播種したトリプチカゼイン大豆ブロスで、色素産生が観察されます。出典：著者MScが撮影した写真。マリエルサ・ギル。
栄養学的に要求の多い嫌気性菌を含む、臨床的に重要な病原菌を繁殖させることができます。日和見的で汚染性のある菌類もこの環境で発生する可能性があります。
栄養力が高いため、微生物汚染を検出する感度が高いため、ワクチンの微生物学的分析のためにUSDA動植物健康検査サービスによって選択されました。
同様に、トリプチカセイン大豆ブロスは、化粧品や食品などの工業レベルでの製品の微生物学的研究のためのさまざまな薬局方（ヨーロッパEP、日本JP、北米USP）の要件を満たしています。
一方、その有用性は非常に高いにもかかわらず、この培地は比較的安価であり、ほとんどの微生物学研究室にとって手頃な価格であることに言及する価値があります。準備もとても簡単です。
基礎
トリプテイン、ペプトン、およびグルコースは、微生物を迅速に増殖させるための理想的な培地にするために不可欠な栄養特性を提供します。
インキュベーションの約6〜8時間で、ほとんどの微生物ですでに増殖が見られます。ただし、成長するのに数日かかることがあるゆっくりと成長している株があります。
塩化ナトリウムとリン酸二カリウムは、それぞれ浸透圧バランスとpH調整剤として機能します。成長の存在は、培地の濁りの出現によって証明されます。成長がない場合、培地は半透明のままです。
その明るい色のため、記事の最初の画像に示されているような、緑膿菌によって生成される色素に対応する色素の生成を観察することが可能です。
準備
-トリプティセイン大豆スープ
トリプシン大豆ブロスを調製するには、脱水した市販の培地30 gをデジタルスケールで計量する必要があります。次に、フラスコに入っている1リットルの蒸留水に溶かします。
混合物を5分間静置し、次に熱源に運んで媒体の溶解を助けます。1分間煮沸しながら頻繁に攪拌します。
溶解したら、必要に応じて適切なサイズのチューブに分配します。綿栓付きチューブまたはベークライトキャップ付きチューブを使用できます。続いて、チューブをオートクレーブ内の培地で121°Cで15分間滅菌します。
培地のpHは7.3±0.2に維持する必要があります
乾燥した培養液の色はライトベージュで、乾燥した場所で10〜35℃で保存する必要があることに注意してください。準備されたスープは淡い琥珀色で、冷蔵庫（2〜8℃）で保管する必要があります。
-トリプチカゼイン大豆ブロスの変種
改変トリプチカゼイン大豆ブロスは、胆汁酸塩とノボビオシンを加えて大腸菌の分離に選択的にすることで調製できます。同じ目的のための別のオプションは、バンコマイシン、セフィキシム、テルライト（2.5 µg / ml）を添加したトリプチカーゼ大豆ブロスを準備することです。
一方、目的がバイオフィルムの形成を刺激することである場合、より多くのグルコース（0.25％）をトリプシン大豆ブロスに追加できます。
使用する
これは、血液や血清を補充する必要なく、肺炎球菌、連鎖球菌種、ブルセラ種などの菌の増殖を許容するのに十分な栄養価があります。
同様に、カンジダアルビカンスコンプレックス、アスペルギルス種、ヒストプラズマカプセルタムなど、一部の菌類がこのブロスで発生する可能性があります。
さらに、嫌気性条件下のこの培地は、クロストリジウム属に属する細菌、ならびに臨床的に重要な非胞子化嫌気性細菌の回収に理想的です。
6.5％の塩化ナトリウムを追加すると、Enterococcusおよびその他のグループD連鎖球菌の増殖に使用できます。
研究レベルでは、特にバイオフィルムまたはバイオフィルム形成細菌の研究において、さまざまなプロトコルで非常に有用です。また、Kirby and Bauer法による抗生物質の測定に必要な0.5％Mac Farland細菌懸濁液の調製にも使用されます。
この場合、3〜5個の同様の外見のコロニーを採取し、4〜5 mlのトリプチカセイン大豆ブロスに乳化させます。次に35〜37℃で2〜6時間インキュベートし、その後滅菌生理食塩水を使用して所望の濃度に調整します。トリプチカゼイン大豆ブロスは、18〜24時間のインキュベーションでは使用しないでください。
播種
サンプルを直接播種するか、選択培地から採取した純粋なコロニーを継代培養できます。接種前は、培養前に培地を曇らせないように少量にする必要があります。
通常、それは好気性生物内で37°Cで24時間インキュベートされますが、これらの条件は、探している微生物によって異なります。必要に応じて、37℃の嫌気性条件下で数日間インキュベートすることもできます。たとえば、急速に成長する微生物や厄介な微生物は、最長7日間培養できます。
ワクチンなどの医薬品の微生物学的分析では、プロトコルはより厳密です。これらの場合、増殖のない培養液は、14日間の連続培養に達するまで廃棄されません。
QA
準備された各バッチから、1つまたは2つの非接種チューブを無菌状態にするためにインキュベートする必要があります。変更しないでください。
既知の株を植え、その行動を評価することもできます。使用できる株には以下のものがあります。
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604、Candida albicans ATCC 10231、Bacillus subtilis ATCC 6633、Staphylococcus aureus ATCC 6538または25923、Escherichia coli ATCC 8739、Streptococcus pyogenes ATCC 19615、Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305、CCneumoniae肺炎球菌
すべての場合において、各微生物の適切な雰囲気および温度条件下での増殖は満足のいくものでなければなりません。
制限事項
-グルコースの発酵により、酸の生成により培地のpHが低下します。これは、酸性に敏感な一部の微生物の生存には好ましくない場合があります。
-菌株は、酸性度に加えて、数日後に栄養素を枯渇させ、結果として環境を住みにくくする毒性物質が蓄積するため、菌株の維持にはお勧めできません。
-ブロスは簡単に汚染されるため、すべての無菌プロトコルに注意して作業する必要があります。
-このタイプの操作は汚染に対して非常に脆弱であるため、トリプチカセイン大豆ブロスを準備した後、ブロスを別の滅菌チューブに移そうとしないでください。
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