血液塗抹標本：特徴、種類、技術、組織学 - 生物学 - 2025

血液塗抹標本があり、末梢血塗抹血液循環中に存在する成分を分析するために使用されます。血液塗抹標本の観察は、多くの病状の診断と追跡に非常に役立つ血液学的データを提供します。

血液塗抹標本を使用すると、白血球のさまざまなタイプ（白血球式）の数を定量化できるだけでなく、赤血球、白血球、血小板の形態や形状を分析できます。

血液塗抹標本の準備。ソース：実験室のガラスの血液。Public DomainPictures.net

その中で、白血球増加症または白血球減少症、リンパ球増加症またはリンパ球減少症、好中球増加症または好中球減少症、血小板増加症または血小板減少症および好酸球増加症などの細胞数の異常を検出できます。細胞の大きさや形の異常も見られることがあります。

さらに、さまざまなタイプの貧血、白血病、細菌や血液の寄生虫感染を検出することが可能です。

このため、研究の目的に応じて実行されるさまざまな種類の塗抹標本があります。薄いスミアと厚いスミアがあります。これらの塗抹標本は、実施手法と研究の目的が異なります。

細かい滴のあるものは、血液学を完了するための補助として使用されます。これにより、血液を構成する3つの細胞系列（赤色系列、白色系列、および血小板）の形状および形態の分析に加えて、白血球の式に関するデータが提供されます。彼らはまた、厚い血液膜の研究を補完するものとして機能します。

厚膜は、マラリアやマラリア、トキソプラズマ症、リーシュマニア症、シャーガス病、バベシア症、ミクロフィラリア症などの血液寄生虫によって引き起こされる疾患の診断に使用されます。

血液塗抹標本の特徴

良好な血液塗抹標本は、特定の特性を満たす必要があります。それらの中で私たちは言及することができます：

-サンプルは、代表となるための最低品質要件を満たしている必要があります。

-サンプリングは適切に実行する必要があります。

-塗抹標本のタイムリーな実行。

-静脈血で行う場合は、細胞を変形させない抗凝固剤を使用し、チューブを混ぜてから塗抹してください。

-毛細血管血で行われた場合、最初の一滴を捨てる。

-スプレッドは均一でなければなりません。これにより、細胞が均一に分布し、血球の形状と数を適切に分析できます。

-塗抹標本の側面は最初から最後まで滑らかでなければなりません。

-塗抹標本は、スライドの側面に対して1〜2 mmのマージンを尊重する必要があります。

-スプレッド層は、最初から最後まで徐々に薄くなります（スライド法による細かいしみの汚れ）。

-サンプルの混乱を避けるため、適切にラベルを付ける必要があります。

-血液成分を明確に観察するために適切に固定および染色します。

-標本を顕微鏡下に取り付ける前に、塗抹標本をよく乾かします。ウェットスミアにイマージョンオイルを塗ると、細胞が見えないようにするミセルが形成されます。

血液塗抹標本の種類

末梢血塗抹標本は、薄い塗抹標本と厚い塗抹標本に分類できます。薄層のものは白血球調合の研究や血球の形態観察に用いられます。特に、ボレリアなどの細胞外細菌や、マラリア原虫などの細胞内血液寄生虫も見られます。

細かいブロブでは、寄生虫の種を識別できるため、厚いブロブよりも特定の手法ですが、細胞外血液寄生虫の徹底的な検索に使用される濃縮手法であるため、厚いブロブの方が感度が高くなります。

細かい液滴の塗抹標本には2種類あります。顕微鏡のスライドで実行されるものと、カバーガラスで実行されるものです。厚い塗抹標本はスライドで実行されます。

血液サンプルを採取するためのテクニック

血液塗抹標本は、毛細血管穿刺または抗凝固剤で採取した静脈サンプルから作成できます。抗凝固剤を使用して血液から行う場合は、サンプルを採取してから最大2時間で塗抹標本を作成できます。

血球を変形させない抗凝固剤の使用には注意が必要です。最良のオプションはEDTAです。逆に、クエン酸三ナトリウムなどの抗凝固剤の使用は避けてください。

毛細管穿刺でサンプルを採取した場合、塗抹標本は、血栓ができる前に、すぐに塗ってください。

最初の滴は廃棄し、次の滴を自然に逃がして、サンプルが組織液で希釈されないようにします。血液には添加物がないため、細胞形態の観察に最も推奨される手法です。

血液寄生虫を観察するために、Solari et al。は彼らの研究において、両方の技術（静脈穿刺と毛細血管）が同等に効率的であると結論付けました。

採血の種類：A.毛細血管穿刺。B.静脈穿刺。出典：A. Flickr.com B. Pxhere.com

血液塗抹標本を準備するためのテクニック

血液塗抹標本は、顕微鏡のスライド上、またはカバーガラスまたはスライド上で手動で実行できます。自動化された装置によっても可能です。

-塗抹標本

取り扱いが簡単なため、ほとんどのラボで好まれている手法です。

パスツールピペットを使用して、清潔なスライドの一端の中央に、それほど厚くないか、または非常に細かい血液の滴を置きます。

塗抹標本は、グラウンドエンドのある別のスライドを使用して作成されます。すりガラスのスライドは、ドロップが配置されている場所の反対側の端に対して垂直に配置されます。

それは30-45°の間の角度に傾き、落下に向かって滑空します。触れると、地面のスライドの端に沿って直線的に広がり、シートは一定の定義された動きで戻ります。最後に到達する前に、スライドが持ち上げられます。

このようにして、均質な層が受容スライドの表面に広がる。

塗抹標本を乾燥させます。次に、それを修正し、好みの染色剤で染色します。顕微鏡で見る前によく乾かします。塗抹標本を示す顔に油滴を置き、光学顕微鏡で観察します。

スライドの血液塗抹標本。上の画像：汚れのないスミア。下の画像：染色された汚れ。ソース：コインマック

スライドに塗られた塗抹標本の一部

このタイプの塗抹標本では、3つの定義された領域を区別できます：頭、体、尾。頭部は塗抹標本が始まる領域に対応します。これは最も厚い領域であり、観察するのはよくありません。

体は塗抹標本の中央または中間部分であり、細胞が均一に分布し、その形態が維持されるため、顕微鏡下で観察するのに最適な領域です。

尾は塗抹標本の最後の部分に対応します。ここでは分布はもはや均一ではなく、赤血球の形態は失われる傾向があります。

スライド技術の品質管理

この手法では、基本的な役割を果たします。

-スライドのクリーニングと脱脂：サンプルの良好なスライドを保証します。

-ドロップのサイズ：非常に大きなドロップでは、より濃く長いスミアが得られます。非常に小さなドロップでは、広がりはより短く、非常に細かくなります。

-エクステンションに適用される速度：塗抹標本が薄くなる速度が遅いほど、塗抹標本が厚くなる速度は高くなります。

-実行の角度：角度が小さいほど、スミアが細かいほど、角度が大きいほど厚くなります。

-カバースリップのステップ

壊れやすいカバーガラスの取り扱いが煩雑であるため、広く使用されていませんが、塗抹標本全体で細胞のより良い分布が得られるため、大きな利点があります。

カバースリップの中央に、あまり厚くなく、あまり細かくない滴を置きます。すぐに別のカバースリップがこの上に配置され、両方のカバースリップの先端が突出して星を形成します。

ドロップは、両方のカバースリップの表面に自然に広がります。エクステンションの端で、各スライドを互いに反対側に（1つは右に、もう1つは左に）すばやくスライドさせます。

この手法では、1つではなく2つの塗抹標本が提供されます。

広げた面を上にして乾燥させます。乾燥したら、固定し、選択した手法で染色します。乾かします。一滴の液浸油をスライドに置き、塗抹標本を下にして塗抹標本を置き、顕微鏡で観察します。

カバースリップ技術の品質管理

この手法で適切な塗抹標本を取得するには、次のことが重要です。

-カバーガラスのクリーニング（サンプルのスムーズなスライドに役立ちます）。

-ドロップのサイズ（スミアの厚さに影響します）。

-カバースリップが分離される速度（広がりの均一性に影響します）。

-自動化装置を使って

これらは、SpinnerとAutoslideのどのチームからでも実行できます。

スピナーは、特殊な遠心プレートに一滴の血液の入ったスライドを置くことから成ります。サンプルは高速で遠心分離されます。このようにして、サンプルの均一で細かいスメアが形成されます。サンプルの溶血の可能性があるという欠点があります。

Autoslideは、スライドに塗抹標本を実行するための動きを機械的に実行する機器です。塗抹標本を修正して染色することもできます。いくつかの自動血液学カウンターに適応させることもできます。

濃い塗抹テクニック

血液寄生虫を検索するには、2つの塗抹標本が推奨されます。

毛細血管穿刺を行い、最初の滴をきれいにします。前に説明したように、スライドの上に細かい一滴を置き、塗抹します。厚いビーズの場合、別のスライドに大きなビーズを置き、1.55mmの正方形に広げます。2つの塗抹標本を乾かします。

スミア染色

とりわけ、ギムザまたはライト染色は、細かい滴に使用できます。濃い塗抹標本には、ギムザ染色またはメイグルンワルドギムザ染色が推奨されます。

ギムザ染色

塗抹標本をメタノールで3分間固定し、水気を切り、再度乾燥させます。次に、塗抹標本をギムザ染色液で10〜15分間覆います。蒸留水で洗浄し、乾燥させます。顕微鏡下で観察するために、一滴の液浸油が置かれます。

ライトの染み

塗抹標本はライト染色で5分間覆われています。緩衝液を捨て、pH 6.8で6分間置きます。均質化するために準備を吹きます。蒸留水で洗浄し、乾燥させます。顕微鏡で観察します。

欠陥のある塗抹標本の種類

これは、スライドを使用した細かいドロップテクニックで研修生に起こります。

さまざまな厚さの領域を持つ塗抹標本（薄いものと厚いものが散在している）

スプレッド中に実行された動きが一定ではなく、停止と再開を行ったためです。

非常に短い塗抹標本

それらには2つの原因があります。1つは、スライドのもう一方の端に到達する前にグラウンドスライドが持ち上げられたことが原因です。この場合、それは非常に厚くて短いです。

一方、塗抹標本が短いが薄い場合は、液滴のサイズが非常に小さかったためです。

塗抹標本の終わりに向かって掻き集められた領域がある塗抹標本

これにはいくつかの原因があります。1つは、地面の端に欠陥があること、散布時に受け側のスライドに加えられる圧力が増加すること、またはスライドの地面の端が摩耗していることです。

液胞形成を伴うスミアまたは明確な丸いまたは楕円形の領域

それらは、脂っこい塗抹標本（不十分に洗浄され脱脂された）の使用によるものです。

非常に厚いまたは非常に薄いスミア

液滴が大きすぎると、最初から最後まで非常に濃いスメアが生成され、非常に小さい液滴では、非常に細かいスメアが生成されます。

組織学

血液細胞は、血液塗抹標本で見ることができます。それらの中には：

-赤血球または赤血球

人間の血液、赤血球または赤血球と2つの白血球。撮影および編集元：Viascos。あなたの観察は最も重要です。このレベルでは、貧血、サラセミア、骨髄疾患などを検出できます。

赤血球または赤血球の数は、男性で約5 x 10 ⁶ mm3、女性で4.5 x 10 ⁶です。赤血球は両凹の円盤のような形をしており、中央に生理的な蒼白があります。それらは別々に見ることができ（正常）、またはルーロースタックを形成する（異常）。

スミアはまた、多核球症（さまざまな形状の赤血球）、異赤血球症（さまざまなサイズの赤血球）、異等赤血球異常症（さまざまな形状とサイズ）、異色症（異なる色）、赤芽球（未熟赤血球）、小赤血球症（小さな赤血球）を示します）および巨核球（より大きな赤血球）。

彼らはヘモグロビンの量の不足を示し、中央蒼白が増加するとき、低色症があると言われています。通常の赤い系列が観察されると、正球性および正色素性として報告されます。

-白血球または白血球

白血球

通常の量は5,000から10,000 mm ^3の範囲です。それらは感染過程、アレルギーおよび白血病で変化します。以下に説明するように、血液塗抹標本ではいくつかのタイプを区別できます。

セグメント化された好中球

それらは白血球全体の55〜65％を占めます。それらは10-15μmの間で測定します。彼らは、さまざまな形態を採用するセグメント化または葉状の核を持っているため、多形核と呼ばれます。

彼らは、細胞質といくつかのアズール好中球に豊富な好中球顆粒を持っています。それらは細菌感染（好中球増加症）で増加し、ウイルス感染（好中球減少症）で減少します。

多核球症（超分節核）、弓状（未熟細胞）、または巨視的ポリス（楕円形および大型）などの形態異常を観察できます。

その他の変更：

-有毒な顆粒

-Pseudo Pelger好中球（核が分葉を示さないか、二葉性である）。

-デーレ体：濃い青の細胞質封入体。

-細胞質の好塩基球増加。

-細胞質内液胞。

-細胞性ピクノーシス（核間ブリッジの喪失）。

セグメント化された好酸球

白血球全体の1〜3％を占めます。それらは9-10μmを測定します。それらは、豊富な好酸性細胞質顆粒および少数のアズール親和性物質の存在によって特徴付けられます。その核には2つの分葉があります。それらの数は、寄生虫起源のアレルギーおよび疾患で増加します。

セグメント化された好塩基球

それらは非常にまれで、白血球の0〜1％を占めます。彼らは10-12μmを測定します。核は通常、縁が不規則で二葉状である場合がありますが、その細胞質には好塩基性の粗い顆粒が多数あるため観察されません。ごくまれに、好塩基球が見られることがあります。

リンパ球

それらは好塩基性の細胞質を備えた小さな細胞であり、核は明確で丸く、クロマチンが凝縮されています。核は細胞のほぼ全体を囲んでいます。それらは、血液白血球の26〜40％を占めます。それらはウイルス感染症（リンパ球増加症）で増加します。反応性リンパ球が見られます。

単球

リンパ球より大きく、細胞質が大きく、楕円形の緩やかなクロマチン核をもつ細胞。それらは9-12μmを測定します。細胞質は豊富で、通常の染色技術では淡い灰色がかった青色に見えます。変化の間に空胞化単球および単球増加症が観察され得る。

-血小板

それらは1.5-3μmの間で測定します。その形状は円形または楕円形です。正常値の範囲は、150,000〜350,000血小板/ mm3です。一部のウイルス感染症では減少することがあります。彼らは核を持たず、紫色に着色されています。このシリーズでは、マクロ血小板またはミクロ血小板、血小板増加症または血小板減少症、血小板断片などの異常が見られる場合があります。

病理学的要素

血液寄生虫

マラリアまたはマラリアの原因物質（プラスモディウム属の寄生虫）などの血液寄生虫は、血液塗抹標本で見られる場合があります。このため、自動化された装置はこの所見を見逃すため、塗抹標本を手動で分析することが重要です。

バクテリア

再発熱やライム病などの病態では、その原因物質を観察することができます。この場合、それは血液塗抹標本におけるボレリア・リカレント・スピロヘータとボレリア・バーグドルフェリに対応します。

未熟な細胞

白血病、白血病反応、白血球性赤芽球反応などで重篤な症例が見られます。細菌感染症では、左側にわずかなずれがある場合があります（詐欺師の存在）。赤芽球は、一部の貧血でも見られることがあります。

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