ヘマトキシリン-エオシン染色：特性、用途、技術 - 化学 - 2025

ヘマトキシリン-エオシン染料ヘマトキシリンおよびエオシンの組み合わせを使用して染色技術です。ヘマトキシリンが塩基性染料として機能し、エオシンが酸性染料であるため、この染料のペアは完璧なデュオを作ります。

塩基性または酸性染料の指定は、溶液中で得られるpHを指すのではなく、それらが有するアニオン性またはカチオン性電荷または発色団基の位置によって支配的な割合を表します。

ヘマトキシリン-エオシン（HE）染色繊毛円柱上皮出典：トッドシュトラウスおよびウラジミールオシポフ

この意味で、ヘマトキシリンは塩基性（カチオン性）色素と考えられているため、細胞の核などの酸性構造に対して親和性があります。エオシンは酸性（陰イオン）染料ですが、細胞質などのアルカリ性または基本的な構造に親和性があります。

このため、核と細胞質を明確に区別できるため、この色素の組み合わせは組織染色に広く使用されています。核は濃い青または紫に染色され、細胞質はピンクに染色されます。

ヘマトキシリン-エオシン染色は、取り扱いが簡単で低コストであるため、組織学および細胞学の分野で最も広く使用されている染色技術の1つです。細胞、太い神経線維、組織内の特定の微生物（寄生虫、真菌、バクテリアなど）の存在を視覚化するために使用されます。

特徴

ヘマトキシリン

ヘマトキシリンは中性染料です。ただし、色を提供するコンポーネント（発色団）は、分子のカチオン中心または基本中心にあります。したがって、その酸構造への親和性。その化学式はC ₁₆ H ₁₄ O _6で、その学名は7,11b-ジヒドロインデノクロメン-3、4,6a、9,10（6 H）-ペントールです。

それらは核酸が非常に豊富であるため、主に細胞の核を染色します。また、ウイルス起源の細胞質封入体を染色することもできます。

ヘマトキシリンが染色されるためには、ヘマトキシリンが酸化状態にあり、金属に結合している必要があります。後者は組織に固定する働きをします。つまり、それは媒染剤として働きます。

ヘマトキシリンが酸化されると、ヘマテインと呼ばれます。酸化は、試薬の酸素への暴露（老化）またはその酸化（化学的酸化）を助ける物質によって達成されます。

エオシン

エオシンは赤やピンクに染まる染料です。水溶性のものもありますが、水に溶けません。一般的に、エオシンはアルコール（95°エタノール）に溶解して調製されます。

細胞質、筋線維、細胞質オルガネラ、コラーゲンを染色しますが、細胞核は染色しません。これは、負に帯電しているため、正に帯電した構造に対して親和性があるためです。

エオシンには「Y」と「B」の2種類があります。エオシン「Y」は黄色のエオシンとして知られています。その学名はテトラブロモフルオレセインであり、その化学式はC ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅です。

一方、エオシン「B」は青みがかったエリスロシンBと呼ばれることもあります。その学名はジブロモジニトロフルオレセインであり、式はC ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉です。どちらも非常によく似ており、どちらを使用するかの違いはあまり目立ちません。ただし、最も人気があるのはエオシン「Y」です。

エオシンは生きている細胞と死んだ細胞を区別する性質を持っています。なぜなら、細胞が死んでいるときだけ膜を通過してその細胞質を染色し、生きていると細胞の細胞質を無色のままにすることができるからです。

用途

神経線維染色

太い神経線維はヘマトキシリン-エオシンで染色および識別できます。ただし、神経線維を可視化するには銀染色が必要であるため、細い神経線維の染色には役立ちません。

組織学的皮膚切片のしみ

皮膚の角質層の染色では、このレベルでは細胞に核がないため、作用する色素はエオシンです。

皮膚の顆粒層では、ヘマトキシリンが顆粒細胞内のケラトヒアリン顆粒を強く染色します。逆に、皮膚の棘層はヘマトキシリンで弱く染色されていますが、基底層や胚層はかなり染色されています。

エオシンはすべての細胞の細胞質を染色し、色の強度は層ごとに異なります。

便検体のヘマトキシリン-エオシン染色

Gómezet al。、2005は、急性下痢性疾患の患者では、新鮮な視覚化法（生理食塩水およびルゴール）よりも、ヘマトキシリン-エオシン染色が、赤痢アメーバとアメーバディスパーによるアメーバ症の症例の特定に効果的であることを示しました。

また、赤血球貪食症（赤血球を飲み込んだアメーバ）の検出においても高感度であることが示されています。

感染症の診断のための組織切片の染色

Walwyn et al。、2004は、感染を引き起こす微生物を検出するための組織学的染色の使用を提案しました。

彼らはヘマトキシリン-エオシン染色を使用して、クロストリジウム、放線菌、スピリラまたはカンジダによって引き起こされる感染を視覚化することができました。彼らはまた、皮膚切片における寄生虫Sarcoptes escabieiの存在と、さまざまな組織の切片におけるサイトメガロウイルスおよびヘルペスによるウイルス封入体を観察することができました。

テクニック

組織サンプル用

組織切片染色は一連のステップを経ます。最初に、組織切片を取得します。これは、後でミクロトームでカット（超微細）を得るためにワックスをかけなければなりません。この手法は、次のステップで構成されています。

1-過剰なパラフィンの除去：これには、キシロールまたはヘムDを使用して、3〜5分間浸します。

サンプルの2再水和：これは、サンプルをさまざまな濃度のアルコール（エタノール）に降順（100°、90°、70°）で浸漬することによって実現されます。すべての場合で7分間。

3-余分なアルコールの除去：このため、水に7分間浸します。

ヘマトキシリンによる4染色：サンプルは、ヘマトキシリンを含むトレイに6〜10分間浸漬されます。露出時間は、サンプルのサイズと厚さによって異なります。

5-過剰なヘマトキシリンの除去：水で5分間洗浄した後、酸アルコールを介して迅速に通過（10〜20秒）します。その後、再び水で5分間洗浄します。次に、96°のエタノールに1分間浸します。

エオシンによる6染色：この場合、サンプルはエオシントレイに5分間浸されます。

サンプルの7脱水：これを行うには、アルコールトレイ（エタノール）を通過しますが、今回は昇順です。（70°、90°、100°）。（それぞれ5秒、5秒、1分）。

サンプルの8の明確化：このため、キシロールに5〜10分間曝露し、乾燥させて、カナダのバルサムまたは他の同様の材料で恒久的に密閉します。

お探しの便検体について

塗抹標本を患者の便でスライドに作成し、80％アルコールで5分間固定します。シートをヘマトキシリンに5分間浸し、すぐに水で洗浄します。

続いて、それを酸性アルコールにすばやく浸し、次にアンモニア水に浸します。水洗いします。エオシンで5分間着色されます。従来技術で説明されているようにサンプルを脱水し、最後にキシレンですすぐ。

試薬の準備

-ヘマトキシリン

1リットルの蒸留水に50グラムの硫酸カリウムまたはアンモニウムアルミニウムを溶解します。完全に溶解したら、結晶化したヘマトキシリン1グラムを加えます。完全に溶解したら、クエン酸1 gを抱水クロラール50 gおよびヨウ素酸ナトリウム0.2 gと一緒に加えます。

混合物を５分間煮沸し、その後放置して冷却し、濾過して残っている固体粒子を除去する。このようにして調製した試薬は、すぐに使用できます。

-エオシン

アルコールベースまたは水ベースで調製できます。

アルコールエオシン

95°で100 mlのエタノールに0.5グラムのエオシン "Y"を溶解します。次に、氷酢酸を数滴加えます。

2％水性エオシン

1250 mlの蒸留水に25グラムの水溶性エオシン「Y」を溶解します。次に、氷酢酸を数滴加えます。

酸性アルコール

濃塩酸0.5mlを測定し、無水アルコールで100mlにする。

アンモニア水

濃アンモニア0.5 mLを測定し、蒸留水で100 mLにします。

参考文献

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