5月GRÜNWALD-GIEMSA染色：理論的根拠、技術および使用 - 生物学 - 2025

月グリュンワルド・ギムザ又はPappenheim 染色は差動染色技法その混合ギムザ5月グリュンワルド試薬です。末梢血や骨髄塗抹標本の正常な血球と異常な血球の識別、および組織切片や細胞学的サンプルの染色に使用されます。

両方の試薬-ギムザとメイグリュンワルド-は、酸性染料と塩基性染料の組み合わせに基づく手法であるロマノウスキー型染色に由来します。

MayGrünwaldGiemsa染色で染色された慢性骨髄性白血病の場合の、セグメント化された好中球とMilleocyteを示す塗抹標本。Wikipedia.orgを通じてRamon Simon-Lopez博士（https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG）。

ギムザは、エオシン、メチレンブルー、およびそれらの誘導体の混合物をグリセロールで安定化することにより、この技術を改善しました。代わりに、MayGrünwaldはエオシンとメチレンブルーを使用し、溶媒としてメタノールを使用しています。この戦略的な組み合わせにより、優れた結果が得られました。

細胞形態の観察に関しては、ギムザとライトの染色と同様に機能しますが、この手法は、マラリア、シャーガス病、リーシュマニア症、トリコモナスを引き起こす寄生虫の染色を精製することにより、以前の染色を改善します。

さらに、それは精液の細胞学的研究のための非常に有用な技術であることが証明されています。精子の形態学的特徴を示すだけでなく、白血球、上皮細胞、精子形成細胞の分化を非常に効率よく行えるこ​​とでも際立っています。

基礎

この手法は、酸性染料が基本的な細胞成分に対して選択的な親和性を持ち、酸性成分が塩基性染色剤を引き付けるロマノウスキー染色の基礎に従っています。

別の言い方をすると、細胞構造と色素の両方が正または負の電荷を持っています。電荷が反発し、別の電荷が引き付けるように。

例えば、メチレンブルーのような塩基性染料は正に帯電しており、負に帯電した構造に引き付けられます。そのため、この色素は、負に帯電したリン酸基を持つDNAおよびRNAが豊富な核を染色します。

セグメント化された好塩基球の顆粒およびRNA含有単核白血球の細胞質も染色されています。

同様に、酸性染料は負の電荷を帯びているため、赤血球やセグメント化された好酸球の顆粒などの正に帯電した構造に結合します。セグメント化された好中球の顆粒に関しては、これらは両方の色素を固定します。

さまざまな着色剤

この技法では、オルソクロマティック色素とメタクロマティック色素の反応の組み合わせが共存します。オルソクロマティックス（エオシンとメチレンブルー）は、それらが関連する細胞構造に結合し、変化しない安定した色を提供します。

一方、メタクロマト（メチレンブルーアズールAとアズールBの誘導体）は、特定の構造に接続されると元の色が変化し、さまざまな色合いがある場合もあります。

最後に、メイグリュンワルドソリューションが実行するステップでは、染料が構造に浸透しますが固定されないため、水の存在が必要です。これが起こるためには、色素は極性またはイオン化し、沈殿し、関連する構造に結合できる必要があります。

技術

材料

-スライドをスライドさせます。

-着色の橋。

-May-Grünwaldソリューション。

-ギムザ染色。

- 蒸留水。

MayGrünwald色素濃縮溶液

0.25 gのエオシン-メチレンブルー（MayGrünwaldによる染色）を量り取り、100 mlのメタノールに溶解する必要があります。次に、準備を1時間混合し、24時間放置します。タイムアップすると、フィルターされます。

テクニックを適用するには、メイグリュンワルド色素を次のように希釈する必要があります。200mlの希釈色素に対して、30 mlの濃縮溶液を測定し、20 mlの緩衝液と150 mlの蒸留水をpH7.2-7.3に調整します。 。後でそれは混合され、ろ過されます。

ギムザ染色濃縮液

0.5 gのアズールエオシンメチレンブルー（ギムザによる染色）を計量し、50 mlのメタノールに溶解し、50 mlのグリセリンを混合物に加えます。

このテクニックを実行するには、緩衝液で1:10に希釈し、10分間静置します。必要に応じてフィルタリングできます。

pH 7.2の緩衝液の調製

それらを比較検討する必要があります。

-40 mgのリン酸二水素カリウム（KH2PO4）。

-151 mgのリン酸水素二ナトリウム12水和物（Na2HPO4）。

両方の化合物を100 mlの水に溶解します。

血液または骨髄塗抹染色手順

クラシックモードと高速モードの2つのモードがあります。

クラシックモード

1. 希釈したMay-Grünwald溶液で塗抹標本を2〜3分間覆います。
2. 緩衝蒸留水で洗浄して、前の溶液を除去します。
3. 同じ緩衝洗浄液で覆い、1分間放置します。アイデアは、以前の色素が構造に固定され、同時に細胞が水和されるというものです。
4. 緩衝水に希釈したギムザチンキを12滴加え、混合して均質化するためにブローします。15〜20分間休ませます。
5. 緩衝蒸留水で塗抹標本を洗い、風乾する。
6. 40X対物レンズを使用して、光学顕微鏡で染色された血球の焦点を合わせて確認します。必要に応じて、100Xを使用できます。

クイックモード

1. 希釈したMayGrünwald染色液で塗抹標本を1分間覆います。
2. 緩衝蒸留水で洗浄します。
3. 緩衝水で覆い、1分間置きます。
4. 希釈したギムザ染色液を加え、5分間放置します。
5. 緩衝蒸留水で洗浄し、自然乾燥させます。

ここに記載されている技術はガイドラインですが、手順と染色時間は試薬を販売している企業によって異なることを考慮に入れる必要があります。各商業施設で厳密に示されている手順に従うことをお勧めします。

精液の塗抹標本を着色するための技術

1- MayGrünwald溶液の薄層で塗抹標本を4分間覆います。

2-着色剤を除去し、蒸留水で洗浄します。

3-蒸留水に希釈したギムザ（1:10）の層を15分間置きます。

4-染料を取り除き、蒸留水で洗浄します。

5-乾燥させ、顕微鏡下で観察します。

MayGrünwaldGiemsa染色で期待される色

重要な仕様

この手法では、試薬と洗浄液のpHを7.2〜7.3に調整する必要があります。これにより、細胞構造に対する色素の親和性が損なわれず、期待される最終的な色が変化しません。

用途

この手法は、臨床検査室で末梢血および骨髄塗抹標本、組織切片、および細胞診を染色するために使用されます。

血液学の分野では、この手法は、細胞の異常、形状、サイズ、数の研究において非常に重要です。白血病や貧血などの特定の疾患の診断に非常に役立つツールです。

さらに、血液学（Plasmodium spとTrypanosoma cruzi）または組織学（Leishmanias sp）の領域で寄生虫を探すときに、それは非常に有用です。

膣細胞診

膣細胞診に関しては、この技術はトリコモナスヴァギナリスの観察に特に有利です。これは重要な発見です。なぜなら、その存在は、寄生虫が除去されたときに後で消える上皮内癌の写真をシミュレートするからです。

精子サンプル

精子の質に関する貴重な情報を提供するため、精子サンプルの研究に理想的なツールです。

それが提供するデータは、主に数と形態だけでなく、存在する可能性があり、生殖細胞、白血球、上皮細胞などの非常に重要な付随細胞にも関係しています。

この分析により、頭、首、ミッドピース、メインピースの精子で観察された異常を記述することができます。

さらに、それらはまた、血精液症（精液中の赤血球の存在）と白血球精子症または精液精子症（精液中の白血球数の増加）の症例を示すのに役立ちます。

参考文献

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