Hektoen寒天固体培地寒天またはHektoen腸溶は、選択と差動文化です。ヘクトエン研究所で、KingとMetzgerによって、赤痢菌とサルモネラ属の腸内病原菌を分離するために作成されました。
培地は、プロテオースペプトン、酵母エキス、胆汁酸塩、乳糖、ショ糖、サリシン、チオ硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸鉄、クエン酸アンモニウム、ブロモチモールブルー、酸性フクシン、寒天で構成されています。この処方により、赤痢菌およびサルモネラ属を、この培地で増殖可能な残りの細菌から区別することが可能になります。
A.ヴァージンヘクトエン寒天B.シードヘクトエン寒天。出典：Flickr.com/元のアップローダーは、フランス語版ウィキペディアのPhilippinjlでした。
ヘクトエン寒天と同じ機能を持つ他の培地もありますが、特に赤痢菌を回収したい場合には、他の培地に比べて大きな利点があります。
両性の種は、汚染された食物を消費するため、人間に深刻な胃腸障害を引き起こします。したがって、感染は糞便-経口です。そのため、ヘクトエン寒天の使用は、主に糞便および食品サンプルの微生物学的分析で示されています。
基礎
ヘクトエン寒天は、栄養素の供給源としてペプトンと酵母エキスを含み、微生物の発生に不可欠な要素を提供します。
ただし、一部の細菌、特にグラム陽性菌とグラム陰性菌の増殖を阻害することによって作用する胆汁酸塩も含まれます。このため、選択培地と見なされます。
一方、ヘクトエン寒天培地は分化培地です。この特性は、ブロモチモールブルーと酸性フクシンに代表されるpHインジケーターシステムとともに、ラクトース、スクロース、サリシンなどの発酵性炭水化物の存在によって付与されます。
サルモネラ属およびシゲラ属に属さない、この培地で増殖可能なすべての細菌は、プロテウス属を除いて、サケまたはオレンジのコロニーを発達させます。これは、存在する炭水化物の1つ以上の発酵によるものです。これにより、培地が酸性になり、pHインジケーターが回転します。
その一部として、シゲラ属とサルモネラ属は、培地をアルカリ化するペプトンのみをエネルギー源として使用して、存在する炭水化物を発酵させることができず、したがってコロニーは青緑色になります。
硫化水素（無色のガス）を形成できる細菌もこの培地で区別できます。チオ硫酸ナトリウムは硫黄源として機能し、クエン酸鉄は現像液です。どちらの化合物も、反応を示す硫化鉄の黒色沈殿の形成を可能にします。
コロニーの中心に黒い沈殿物があり、周囲に透明なハローがあり、魚眼のような外観になります。この特徴は、サルモネラ属の存在を示唆しています。
最後に、塩化ナトリウムは浸透圧のバランスを維持し、寒天は培地に固体のコンシステンシーを提供します。
準備
脱水した媒体を76 g計量し、1リットルの蒸留水に溶解します。混合物を激しく振ってから、10〜15分間置きます。加熱して沸騰させ、完全に溶解するまで回転させることができます。この培地はオートクレーブされていません。
培地が約45°Cの温度に達したら、20 mlの容量を滅菌ペトリ皿に直接注ぎます。
寒天を固化させる。その時点で、それらは使用する準備ができています。すぐに使用することをお勧めします。これが不可能な場合は、使用するまで冷蔵庫に保管します。
プレートを播種する前に、プレートを冷蔵庫から取り出して、室温にします。
培地のpHは7.5±0.2です。脱水後の培地の色は紫、調製した培地は茶緑色になります。
使用する
便および食品サンプル中の赤痢菌およびサルモネラ属の細菌の検索には、ヘクトエン寒天の使用が推奨されます。
サンプルが以前に亜セレン酸ブロス、シスチン亜セレン酸ブロス、テトラチオン酸ブロスなどの特別なブロスに富んでいる場合、これらの細菌を分離する可能性はかなり高まります。
接種材料は強力でなければならず、播種はストリーキングによって行われます。プレートは、37℃で24〜48時間、好気性環境で培養されます。
コロニーの特徴は、現時点での解釈と区別がより明確であるため、48時間のインキュベーションが推奨されます。
QA
この培地で品質管理を行うには、Salmonella typhimurium ATCC 14028、Salmonella enteritidis ATCC 13076、Shigella flexneri ATCC 12022、Shigella sonnei ATCC 25931などの認定された細菌株が使用されます。
予想される結果は次のとおりです。SalmonellatyphimuriumおよびSalmonella enteritidisは、黒の中心の有無に関係なく青緑色のコロニーを形成するはずです。赤痢菌は青緑色のコロニーとして成長します。
大腸菌株ATCC 29212、プロテウスミラビリス、クレブシエラ・ニューモニエATCC 700603、エンテロコッカス・フェカリスATCC 29212およびスタフィロコッカス・アウレウスATCC 25923も含めることができる。
これらの場合、観察される特性は次のとおりです。E。coliとK. pneumoniaeは、この培地でサーモンオレンジ色のコロニーを形成し、周囲に同じ色の沈殿物が生じます。一方、プロテウスは黒い中心の有無にかかわらず青緑色のコロニーを開発します。
S. aureusとE. faecalisは阻害される必要がありますが、E。faecalisは非常に小さな黄色のコロニーとして成長することがあります。
一方、この培地はオートクレーブされていないため、培地の無菌性を評価することが重要です。したがって、準備された各バッチから、1〜2枚の接種されていないプレートを、好気性環境で37℃で24時間インキュベートする必要があります。
明らかに、プレート上でいかなる種類の成長も期待されていません。
制限事項
-プロテウス種はこの培地で成長することができ、それらのコロニーの特徴はサルモネラまたは赤痢菌種と混同される可能性があります。このため、疑わしいコロニーは生化学的検査で確認する必要があります。
-この培地を他の選択性の低い寒天と一緒に使用する必要があります。目的の微生物が低濃度で見つかると、この培地では増殖しない可能性があるためです。
-準備中に過熱しないでください。過度の熱は培地の組成を変化させます。
-異常なことに、サルモネラ菌を発酵させるラクトースのコロニーが現れ、気づかれない場合があります。
参考文献
- ウィキペディアの貢献者。ヘクトエン腸溶寒天。ウィキペディア、フリー百科事典。2019年3月13日23:38 UTC。利用可能：.wikipedia.org / 2019年3月16日アクセス。
- BD Laboratories。BD Hektoen Enteric Agar（HE寒天）。2013.利用可能：bd.com
- ブリタニア研究所。ヘクトエン腸溶寒天。2015.次で入手可能：britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories。ヘクトエン寒天。で利用可能：f-soria.es
- Difco&BBL Manual、Hektoen Enteric Agar。第2版。利用可能：bd.com/europe