トリプチカゼイン大豆寒天：理論的根拠、準備、および使用 - 生物学 - 2025

トリプトン寒天大豆またはトリプチケースソイ寒天は固体培養培地、および栄養非選択的です。これは、英語のトリプチカーゼ大豆寒天の頭字語でTSAという文字で指定されています。それは、トリプテイン、大豆ペプトン、塩化ナトリウム、および寒天で構成されています。

その高い栄養力のために、それは適度に要求と非要求の微生物の培養に理想的です。追加のサプリメントのない培地は初代培養にはお勧めできませんが、純粋な株を継代培養し、それらを生存可能に保つなど、他の用途に非常に役立ちます。

トリプチカゼイン大豆寒天ウェッジとベークライトキャップ付きチューブ。出典：著者MScが撮影した写真。マリエルサ・ギル。

また、この寒天は、特に溶血パターンを観察し、それぞれ肺炎球菌と化膿連鎖球菌の診断に必要なオプトキンとバシトラシン分類群をマウントする必要がある場合に、血液寒天などの濃縮培地を調製するためのベースとして機能します。

一方、抗生物質と組み合わせると、臨床的に重要な通性および厳密な嫌気性微生物を、植物相が混合したサンプルから分離するのに役立ちます。

最後に、トリプチカセイン大豆寒天の組成とその性能は、さまざまな薬局方（ヨーロッパ、日本、北米）によって確立された要件を満たしています。

基礎

バクテリアを適切に発達させるためには、アミノ酸、ビタミン、プリン酸、ピリミジン塩基などのエネルギー供給が必要です。

この意味で、トリプテインと大豆ペプトンはこれらの栄養素を微生物に提供し、微生物の完全な発達を可能にします。しかし、気難しい細菌の場合は、この寒天にフィブリン除去された血液または加温された血液を補充して、その濃縮度を高める必要があります。

一方、抗生物質を培地に加えると選択培地になります。リステリア属の種の分離を促進するために0.6％酵母エキスを追加することもできますが、シスチンテルライトと子羊の血液の追加は、Corynebacterium diphteriaeに最適です。

最後に、塩化ナトリウムは培地に浸透圧のバランスを提供し、寒天は固体のコンシステンシーを提供します。

準備

トリプチカゼイン大豆寒天プレート

トリプチカゼイン大豆寒天を調製するには、脱水した市販の培地40 gをデジタルスケールで計量する必要があります。フラスコに入っている1リットルの蒸留水に溶かします。

混合物を5分間静置し、次に熱源に運んで媒体の溶解を助けます。頻繁に攪拌し、1〜2分間煮沸します。続いて、培地をオートクレーブで121°Cで15分間滅菌します。

50°Cに冷却し、滅菌ペトリ皿に分散させます。固化させ、転倒させ、プラケロで注文し、冷蔵庫に保管する。

培地の最終pHは7.3±0.2です。

乾燥した培養液の色はライトベージュで、乾燥した場所で10〜35℃で保存する必要があることに注意してください。

その部分については、準備された寒天は薄い琥珀色です。準備したプレートは、使用するまで冷蔵庫（2-8°C）で保管してください。

プレートは使用前に室温に到達する必要があります。

血液を補充したトリプチカゼイン大豆寒天プレート

血液寒天は、トリプチカゼイン大豆寒天を50°Cに冷却するときに、5％のフィブリン除去血液を加えることによって調製されます。混合物は穏やかな動きで回転することにより均質化されます。

滅菌ペトリ皿に盛り付けます。真ん中の色はチェリーレッドにします。

温めた血液を補充したトリプチカゼイン大豆寒天プレート

TSAベースの血液寒天培地を準備するには、既に説明した手順と同じように行いますが、オートクレーブを離れるときは、培地の温度が約56〜70°Cになるまで静置します。その時、血液が置かれ、培地が茶色に変わるまで混合されます。

滅菌ペトリ皿に盛り付けます。ミディアムの色はチョコレートブラウン。

トリプチカゼイン大豆寒天ウェッジ

寒天の調製手順はプレートについて説明した手順と同じですが、ペトリ皿に培地を供給する代わりに、滅菌前にベークライトカバー付きのチューブに10〜12 mlで分配される点が異なります。

続いて、チューブを121°Cで15分間オートクレーブします。彼らが去るとき、彼らはサポートの助けを借りて傾いて、固まるのを許されます。

準備されたくさびは、表面積によって播種され、特定の非要求微生物を指定された時間の間生存できるようにする働きをします。

用途

トリプチカゼイン大豆寒天は、以下の場合に使用されます。

-ほとんどの実験室で日常的に使用されている古典的な血液寒天を準備するためのベースとして。

-要求の厳しい細菌の分離。

-溶血パターンの観察。

-診断テストの実行。

-シスチンテルライトと子羊の血液を含む、Corynebacterium diphteriaeの特別な血液寒天を調製するためのベースとして。

-ラムブラッド寒天を準備するベースとして、嫌気性菌、特にバクテロイデス種の成長のためのカナマイシン-バンコマイシン。

-非要求株（バクテリオテカ）の維持のため。

-水、環境、食品、化粧品サンプルの微生物限界の研究における好気性微生物数。

播種

サンプルは、血液やその他の添加物を添加したトリプチカセイン大豆寒天の表面に直接播種できます。枯渇にまかれます。

一方、添加物を含まないトリプチカゼイン大豆寒天プレートは、一般的に微生物株（細菌または酵母）の継代培養に使用されます。

QA

無菌管理

トリプチカゼイン大豆寒天で調製したさまざまな培地の無菌性を確認するには、以下を実行することをお勧めします：調製した各バッチから、1つまたは2つの非接種プレートまたはチューブを37°Cで24時間インキュベートして、無菌性を示します。すべての場合において、成長せずにとどまる必要があります。

汚染が見つかった場合は、バッチ全体を廃棄する必要があります。

成長管理

次の細菌株は、トリプチカゼイン大豆寒天の適切な機能を研究するために使用できます：大腸菌ATCC 8739、黄色ブドウ球菌ATCC 6538、緑膿菌ATCC 9027およびEnterococcus faecalis ATCC 29212。

菌株を播種し、37℃で24時間好気的にインキュベートします。

すべての場合において、成長は満足のいくものでなければなりません。

Candida albicans Complex ATCC 10231やAspergillus niger ATCC 16404などの真菌も使用でき、両方の菌株で良好な増殖が期待されます。

血液を補充したトリプチカゼイン大豆寒天の成長制御と溶血パターン

このベースで調製した血液寒天の適切な機能を確認するには、次の株を使用できます：化膿連鎖球菌ATCC 19615、肺炎球菌ATCC 6305および肺炎球菌ATCC 49619。

それらを播種し、微好気性で37℃で24時間インキュベートします。

すべての場合において、増殖は満足のいくものであり、ベータ溶血（コロニー周囲の明るいハロー）は化膿連鎖球菌で観察され、アルファ溶血（コロニー周囲の緑がかったハロー）は肺炎球菌の両方の株で観察されるはずです。コロニー）。

参考文献

1. ウィキペディアの貢献者。トリプチカーゼ私は寒天です。ウィキペディア、フリー百科事典。2018年12月17日15:47 UTC。https://en.wikipedia.orgで入手できます。
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3. Neogen Laboratories。トリプシン大豆寒天。で利用可能：foodsafety.neogen.com
4. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリーとスコットの微生物学的診断。12 ed アルゼンチン。エディトリアルパナメリカーナSA
5. BD Laboratories。トリプチカーゼ私は寒天です。2014.利用可能：.bd.com