四チオンスープやブイヨンTTは、サルモネラ属の菌株の濃縮および回復のための選択液体培地です。それはミュラーによって作成され、後にカウフマンによって修正されました。
元の培地には、プロテオースペプトン、炭酸カルシウム、チオ硫酸ナトリウムが含まれていました。カウフマンはそれに胆汁酸塩を加え、明るい緑色で別のモダリティを作りました。これらの物質は大腸菌群の成長を抑制し、病原菌、この場合はサルモネラ菌の発生のために培地を自由にします。
ヨウ素ヨウ素溶液をテトラチオン酸塩ブロスに加える。ソース：マヌエルアルマグロリバス
媒体の感度が大幅に向上したため、変更は非常に成功しました。このため、現在はあらゆる種類のサンプル中のサルモネラの検索に役立ちますが、特に固体または液体の便や食品に役立ちます。
その準備は2つのフェーズで構成されます。市販の培地は、テトラチオネートブロスを調製するためのベースであり、続いて、テトラチオネートが形成され得るように、ヨウ素化ヨウ素溶液が添加されて、培地を完成させる。
米国公衆衛生協会（APHA）は、サルモネラ菌のサンプルを濃縮するために、明るい緑色が補充されたテトラチオネートブロスを使用することを推奨しています。
一般に、テトラチオン酸ブロスは、サルモネラ属の細菌の存在が少量で疑われる場合、または阻害物質への曝露または生存率を最小限にする工業プロセスによって乱用される場合に理想的です。
基礎
存在するペプトンは、カゼインの膵臓消化物および動物組織の消化物消化物に対応します。これらは、細菌の成長のための炭素、窒素、および一般的な栄養素の供給源を提供します。
チオ硫酸ナトリウムは、ヨウ素化溶液と反応してテトラチオネートを形成します。これは、大腸菌群の成長を阻害し、酵素のテトラチオン酸レダクターゼを含む細菌の発生を促進します。その中には、サルモネラ属だけでなくプロテウス属もあります。
胆汁酸塩はまた、ほとんどのグラム陽性菌と一部のグラム陰性菌（大腸菌群）の阻害物質として働きます。
炭酸カルシウムは、硫酸を形成するテトラチオネートの分解によって生成される有害物質を吸収します。この意味で、炭酸カルシウムは酸性度を中和し、培地のpHを安定に保ちます。
明るい緑色のモダリティの場合、この物質は、サルモネラ属以外の微生物を阻害することにより、テトラチオネートブロスの選択力を高めます。
準備
-テトラチオネートブロス
ヨウ素ヨウ素溶液
計量する：
- ヨウ素6グラム。
- ヨウ化カリウム5 g。
ヨウ化カリウムを約5 mlの滅菌蒸留水に溶解し、加熱しながらヨウ素を少しずつ加えます。完全に溶解した後、最終容量が20 mlになるまで滅菌蒸留水でマークまで入れます。
テトラチオネートブロスの基本培地
脱水培地46グラムの重量を量り、1リットルの滅菌蒸留水に懸濁します。完全に溶けるまで混ぜて加熱すると、数分で沸騰します。オートクレーブしないでください。培地の基部を約45℃まで冷却し、その時点で20mlのヨウ素化溶液を加える。
ヨウ素化した溶液を培地に添加した後、すぐに使用する必要があります。混合物全体を使用したくない場合は、次の手順に従ってください。
基本培地10mlをチューブに分配し、サンプルを接種するものにのみ0.2mlのヨウ素化溶液を加える。
使用しないものはそのまま冷蔵庫に保管できますが、培地は滅菌されていないため、必要な量を用意することが理想です。
ヨウ素化ヨウ素溶液を加える前の培地の色は、白い沈殿物を含む乳白色であり、添加後は濃い沈殿物を含む茶色になります。観察された沈殿物は正常であり、溶解しない炭酸カルシウムに対応します。培地の最終pHは8.4±0.2です。
-明るい緑色のテトラチオネートブロスバリアント
明るい緑色のテトラチオネートブロスを調製するには、上記のすべてのステップを実行しますが、0.1％で調製した10 mlの明るい緑色の溶液を混合物に追加します。
輝く緑
このソリューションは次のように準備されます。
0.1 gの明るい緑色を量り取り、100 mlの蒸留水に懸濁します。完全に溶解するまで沸騰するまで加熱します。琥珀色のボトルに保管してください。
使用する
便検体（便培養）のプロトコルは次のとおりです。
1 gの固形便または1 mlの液体便を、すぐに使用できる10 mlのテトラチオネートブロスを含むチューブに接種します。激しく振とうし、43°Cで6〜24時間好気的に培養します。
続いて、10〜20 µlの培養液を取り、SS寒天、XLD寒天、明るい緑色寒天、ヘクトエン腸寒天などのサルモネラ菌の選択培地で継代培養します。
並行して、サルモネラの選択培地には、濃縮せずに直接サンプル（糞）を接種する必要があります。直腸スワブ検体の場合、収集した物質をチューブに排出し、上記のように進めます。
食品サンプルの場合は、固形食品10 gまたは液体食品10 mlの重さを量り、すぐに使用できるテトラチオネートブロス100 mlをボトルに接種します。上記と同じ方法で行いますが、37℃でインキュベートします。
ご覧のとおり、サンプルとブロスの関係は常に1:10です。
QA
既知の対照株を使用して培地を試験することができる。最も広く使用されているのはATCC認定株です。
使用する株は、ネズミチフス菌ATCC 14028、サルモネラアボニーDSM 4224、サルモネラエンテリティディスATCC 13076、大腸菌ATCC 25922、エンテロコッカスフェカリスATCC 19433および黄色ブドウ球菌ATCC 25923です。
サルモネラ菌株は優れた増殖が期待されますが、大腸菌の増殖は弱いか定期的であり、グラム陽性菌（EnterococcusおよびStaphylococcus）は部分的または全体的に阻害されます。
推奨事項
-この培地はプロテウスの成長を阻害しないため、一部の研究室では通常、この微生物株の発生を防ぐために40 mg / Lのノボビオシンを配置しています。抗生物質はヨウ素溶液の前に追加する必要があります。
-ヨウ素ヨウ素溶液を含む培地を調製した後、接種に2時間以上かかるべきではありません。
-チューブに培地を分配する場合、形成された沈殿物を再懸濁するために、混合物を継続的に均質化する必要があります。
-汚染の少ないサンプルでは、テトラチオネートブロスを35-37°Cでインキュベートし、汚染度の高いサンプルでは、43°Cでのインキュベーションをお勧めします。
参考文献
- Conda Pronadisa研究所。2010.ミュラー・カウフマンによるテトラチオネートブロスベース。で利用可能：
- BD Laboratories。2003. Tetrathionate Broth Base。で利用可能：
- ブリタニア研究所。2015.テトラナートベースブロス。で利用可能：
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