金曜染色：根拠と技術 - 生物学 - 2025

Kinyoun染色は、染色細菌および寄生虫耐性酸性アルコールに使用される染色技術です。これは、Ziehl-Neelsenの色の変更から生まれました。両方の手法は同じように解釈されますが、2つの要素が異なります。主な試薬の準備と、Kinyoun手法は熱を使用しません。

このため、コールドモディファイドZiehl-NeelsenまたはKinyounコールドステインとしても知られています。Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium leprae、非定型抗酸菌、Nocardias sp、Cryptosporidium parvum、Cryptosporidium meleagridis、Cryptosporidium felis、Cryptosporidium murisおよびCyclosporas cayetanensisの染色に使用されます。

Cryptosporidium parvumはKinyoun染色で染色されました。Punlop Anusonpornperm、ウィキメディア・コモンズ

ノカルジアは部分的に酸アルコール耐性があるため、この手法では弱く染まるので、この属には方法論の変更があります。

次に、冷たいKinyounテクニックは、コクシジウム（Cryptosporidium parvumおよびIsospora belli）とミクロスポリジウムの胞子（Enterocytozoon bieneusiおよびEncephalitozoon intestinalis）の検出のためにDidierによって変更されたトリクロームテクニックと組み合わされました。

基礎

主な染色試薬は、カルボフクシンまたはカルボフクシンであり、マイコバクテリアおよび特定の寄生虫の脂質に富むワックス状の細胞壁（ミコール酸）内のカルボ酸に結合する特性があります。

この結合は酸漂白剤によって妨げられません。したがって、微生物は抗酸と定義されます。

熱で染料を固定するZiehl-Neelsen手法とは異なり、Kinyoun手法では、この手法用に調製された炭水化物フクシン溶液に高濃度のフェノールが含まれているため、このステップは必要ありません。

フェノールは細胞壁の脂質物質を溶解し、カルボフクシン色素が入るのを可能にします。染料が浸透した後、酸性アルコール洗浄にもかかわらず、染料は固定されたままです。

このようにして、抗酸菌は特徴的な赤い色を帯び、抗酸菌でないものはすべて変色し、青く染まります。

技術

材料

-変更されたカーボフクシン。

-アルコール-酸。

- メチレンブルー。

金雲炭フクシンの調製

-基本的なフクシン：4グラム。

-フェノール：8 ml。

-アルコール（95％）：20 ml。

-蒸留水：100 ml。

基本的なフクシンは、アルコールにゆっくりと溶かし、絶えず混合します。続いて、結晶化したフェノールを56℃のウォーターバスで溶融します。溶解したら、8 mlを上記で調製したフクシン溶液に加えます。

酸アルコールの調製

-濃塩酸：3ml。

-エタノール（95％）：97 ml。

それは測定され、結合され、混合されなければなりません。

メチレンブルーコントラスト色素の調製

-メチレンブルー：0.3 g。

-蒸留水：100 ml。

秤量し、溶解します。

金陽染色法

1-唾液、肺液、尿沈渣、脳脊髄液または糞便などのサンプルから直接塗抹標本を準備します。または、初代培養培地で発生した純粋なコロニーから得られた微生物の懸濁液から。

2-塗抹標本を熱で固定します。

3-染色ブリッジに塗抹標本を置き、調製したKinyounカーボフクシン試薬で覆います。3〜5分間休ませます。

4-蒸留水で洗浄します。

5-酸性アルコールで3分間漂白し、蒸留水で再度洗浄します。

6-着色アルコールがなくなるまで、酸性アルコールで1〜2分間漂白します。

7-蒸留水で洗って水気を切り、スライドを垂直に置きます。

8-製剤をメチレンブルーで覆い、4分間放置します。

9-蒸留水で洗浄し、自然乾燥させます。

10- 40X、次に100Xで調べます。

抗酸微生物の染色を改善およびスピードアップするには、30または40 mlのKinyoun Carbol Fuchsinに1滴の湿潤剤（Tergitol No. 7など）を追加します。

一部のラボでは、メチレンブルーの造影剤を明るい緑色またはピクリン酸に変更しています。1つ目は背景に緑色を、2つ目は黄色を生成します。

ノカルジアのための特別な禁輸テクニック

Nocardia属の細菌の染色を改善するために、Kinyoun染色の変更が使用されます。手法は次のとおりです。

1- Kinyounカルボフクシンで塗抹標本を3分間覆います。

2-蒸留水で洗浄します。

3-着色がなくなるまで、3％に調整した酸性アルコールで簡単に変色させます。

4-蒸留水で再度洗浄します。

5-製剤をメチレンブルーで覆い、30秒間作用させます。

6-蒸留水で洗浄し、自然乾燥させます。

カーディフフクシンとトリクロームを組み合わせた技術は、ディディエによって修正されました

この手法は、コクシジウムとMicrosporidium spの胞子の糞便サンプルを同時に分析する場合に推奨されます。実行する手順は次のとおりです。

1-塗抹標本を金現炭フクシンで10分間覆う。

2-着色剤を除去し、蒸留水で洗浄します。

3-塩酸アルコールで30秒間漂白します。

4-蒸留水で再度洗浄します。

5- 37°Cで30分間、トリクローム溶液で塗抹標本を覆います。

6-蒸留水で洗います。

7-酢酸アルコールで10秒間漂白します。

8-95％エタノールを使用して塗抹標本を30秒間洗浄する。

QA

陽性対照として、結核菌株の塗抹標本を作成し、準備した試薬で染色して、細菌が適切な色（赤フクシア）になることを確認します。

ネガティブコントロールは、酸性アルコール以外の菌株を​​塗抹標本ですばやく準備し、サンプル全体が対照的な色になることを確認することによっても使用できます。

ジーヨンニールセンテクニックと比較したKinyounテクニック

Kinyoun技術は、加熱ステップを省略できるので単純ですが、その主な利点は、蒸気の放出を回避し、長期的には毒性が高く、癌を引き起こすことです。したがって、Kinyoun染色は、染色担当者にとってより安全です。

試薬は腐食性であり、漂白剤は可燃性であるため、試薬が皮膚に直接接触しないように注意する必要があることを考慮することが重要です。

欠点としては、塗抹標本が陰性であっても、必ずしもその生物が存在しないことを示しているわけではありません。さらに、細胞片の存在は偽陽性につながり、診断を混乱させる可能性があります。

参照

1. 応用臨床化学。（2016）。BK Kinyounキット.cromakit.esで入手可能
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6. Combol A、FernándezN、Figueredo E、AcuñaA、ZanettaE。コクシジウムと微胞子虫の同時診断のための染色技術の実装。共和国大学の衛生研究所。モンテビデオ。ウルグアイ。で利用可能：hygiene.edu.uy